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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 307-310页

作者：张树忠梁嘉靖戚中田胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的：研究丙肝病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，... 详细信息

目的：研究丙肝病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，以得到重组表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３。然后采用磷酸钙沉淀法将其转染哺乳动物ＣＨＯ细胞，经地塞米松（ＤＭ）诱导，采用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术检测ＮＳ３蛋白的表达水平。结果：用所构建的诱导型表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３转染ＣＨＯ细胞，经ＤＭ（３×１０－８ｍｏｌ／Ｌ）诱导后可表达ＮＳ３蛋白，其浓度与时间呈正相关。结论：所得到的表达载体在培养细胞中能够有效地表达。

关键词：丙型肝炎病毒基因3 非结构蛋白基因表达

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因氧化损伤与修复研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第10期31卷 887-894页

作者：汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入... 详细信息

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入细胞后 ,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似 ,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化 .由于线粒体的正常功能为修复机制所必需 ,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力 ,发现 9mmol/L四氧嘧啶培养细胞 1h后 ,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后 0 ,2 ,8和 2 4h时间点均无明显变化 .提取各组细胞的mtDNA ,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸 ,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA ,进行DNA印迹实验 ,地高辛抗体碱性磷酸酶系统显色 ,检测完整与断裂的mtDNA量 ,利用Poisson公式 (s=-lnP0 /P ,P0 为未断裂链光密度值 ,P为所有链光密度值总和 )计算一个mtDNA分子的平均损伤频率 ,结果显示 ,9mmol/L四氧嘧啶处理细胞 1h ,链平均损伤频率由对照的 0 11个 /分子增加至 5 6 0个 /分子 ,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤 ,除去药物后 8h ,绝大部分损伤可被修复 ,损伤频率减至

关键词：线粒体DNA tRNA^Leu(UUR) 突变人线粒体亮氨酰tRNA合成酶 A3243G 体外转录基因表达

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胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

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第二军医大学学报 2006年第8期27卷 834-836页

作者：金彩霞李文林朱吉田棣张南胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。

关键词：胰十二指肠同源盒基因-1 逆转录病毒科肝干细胞

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乙肝全基因组转基因小鼠肝组织病理及部分免疫学特征

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武汉大学学报（医学版） 2012年第4期33卷 462-465,502页

作者：胡新根訾晓渊张红霞胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:研究C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系乙型肝炎转基因小鼠肝脏的组织病理学及部分免疫学特征。方法:通过对130例SPF级乙型肝炎转基因小鼠和30例同龄正常C57BL/6小鼠肝组织进行免疫组织化学染色、HE染色和浸银染色分析,... 详细信息

目的:研究C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系乙型肝炎转基因小鼠肝脏的组织病理学及部分免疫学特征。方法:通过对130例SPF级乙型肝炎转基因小鼠和30例同龄正常C57BL/6小鼠肝组织进行免疫组织化学染色、HE染色和浸银染色分析,研究转基因小鼠HBsAg的表达以及病理改变情况。选取15例肝组织有单个核细胞浸润的转基因小鼠检测白细胞分化抗原的表达情况。结果:60.77%(79/130)的转基因小鼠肝脏组织中出现了不同程度的肝组织病理性改变,包括肝细胞变性、单个核细胞浸润和纤维组织增生,且与月龄正相关,而与性别、病毒蛋白的表达无相关性。选取出现单个核细胞浸润的肝组织进行免疫组织化学检测发现,肝组织中浸润的单个核细胞大多为CD3+、CD4+T细胞。结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系乙肝全基因组转基因小鼠肝脏产生类似慢性无症状HBV携带者的病理学变化,病理改变与病毒蛋白表达无相关性,与小鼠月龄呈正相关性。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学免疫组织化学

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高表达ABCG2基因对人原发性肝癌细胞SP表型的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 973-976页

作者：陈雪松张朵张红霞胡以平朱海英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的研究高表达ABCG2基因对人原发性肝癌细胞SP表型的影响。方法构建pMSCVpuro-ABCG2逆转录病毒质粒,并转染至病毒包装细胞PT67中,将获得的病毒上清液感染人原发性肝癌non-SP(Side population)细胞,筛选稳定感染的细胞系non-SP-ABCG2和n... 详细信息

目的研究高表达ABCG2基因对人原发性肝癌细胞SP表型的影响。方法构建pMSCVpuro-ABCG2逆转录病毒质粒,并转染至病毒包装细胞PT67中,将获得的病毒上清液感染人原发性肝癌non-SP(Side population)细胞,筛选稳定感染的细胞系non-SP-ABCG2和non-SP-puro,RT-PCR法检测细胞中ABCG2基因的转录水平,Western blot法检测细胞中ABCG2蛋白的表达水平,显微镜观察细胞形态的变化,Hoechst33342染色分析细胞的SP表型。结果逆转录病毒质粒pMSCVpuro-ABCG2经双酶切及测序证实构建正确;non-SP-ABCG2细胞中ABCG2基因的转录和蛋白表达水平均较空载体pMSCVpuro转染的细胞non-SP-puro明显提高;non-SP-ABCG2细胞的形态发生改变,成梭形生长,偶见小三角样细胞,细胞生长缓慢,细胞间排列不紧密,并出现了SP表型。结论 ABCG2基因的高表达与细胞SP表型的形成具有一定的相关性,并能影响细胞的基本形态。

关键词： ABCG2基因 SP表型肝癌细胞系生物学特性

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镉暴露大鼠睾丸支持细胞金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 965-968页

作者：任绪义周雍张建鹏仲燕冯伟华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸... 详细信息

啮齿目动物的睾丸较肝脏对镉毒性更为敏感 .为阐明不同组织细胞的镉毒性分子机制 ,对镉暴露大鼠睾丸支持细胞与肝脏金属硫蛋白基因 (MT )的表达及镉蓄积进行了时相研究 .成年雄性SD大鼠低剂量镉(4 0 μmol/kg)皮下注射后 ,立即进行睾丸支持细胞和肝脏组织的分离 .采用RT PCR技术分析mRNA ,并用光密度扫描作半定量分析 ,蛋白质定量用ELISA方法 ,原子分光光度吸收法测定镉浓度 .结果显示 :镉暴露 1h后肝脏MTmRNA即有明显的诱导表达 ,3h达高峰 ;支持细胞也有明显的诱导表达 ,6h达高峰 .镉暴露后肝脏MT有明显的诱导表达 ,但睾丸支持细胞不但未见MT增加而且还稍有下降 .提示 :a 镉对MTmRNA的诱导表达具有时间依赖性和组织特异性 .b 镉虽然能诱导睾丸MT的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：金属硫蛋白镉睾丸支持细胞睾丸组织镉损伤

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镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 811-815页

作者：任绪义周雍张建鹏冯伟华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2m... 详细信息

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2mRNA明显升高 ,但MT没有相应增加 ;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高 .结果提示 :镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：镉中毒大鼠睾丸肝脏金属硫蛋白表达时相研究

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强啡肽A_(1～13)对大鼠脑出血后脑水肿的治疗作用

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中国药理学通报 1999年第1期15卷 77-79页

作者：孙学军王成海路长林第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的研究强啡肽Ａ（ＤｙｎＡ１～１３）与大鼠胶原酶诱导的脑出血后脑水肿形成的关系，寻找治疗脑出血后脑水肿的特异性药物。方法大鼠大脑尾壳核内微量注射０．４ＩＵ细菌胶原酶；４ｈ后侧脑室注射ＤｙｎＡ１～１３及κ受体拮抗剂ｎｏ... 详细信息

目的研究强啡肽Ａ（ＤｙｎＡ１～１３）与大鼠胶原酶诱导的脑出血后脑水肿形成的关系，寻找治疗脑出血后脑水肿的特异性药物。方法大鼠大脑尾壳核内微量注射０．４ＩＵ细菌胶原酶；４ｈ后侧脑室注射ＤｙｎＡ１～１３及κ受体拮抗剂ｎｏｒ－ＢＮＩ；放射免疫法测定脑出血大鼠皮层、海马、尾壳核、下丘脑和垂体中ＤｙｎＡ１～１３含量；干湿重法测定脑组织含水量。结果胶原酶诱导大鼠脑出血后，顶叶皮层、额叶皮层、海马和尾壳核内ＤｙｎＡ１～１３含量明显减少，与对照组相比，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，与此同时，上述脑区组织含水量亦明显增加；但下丘脑和垂体ＤｙｎＡ１～１３含量明显增加（Ｐ＜０．０１）。侧脑室给予ＤｙｎＡ１－１３可以显著降低脑出血后脑组织含水量；κ受体拮抗剂ｎｏｒ－ＢＮＩ可以阻断该作用。结论ＤｙｎＡ１～１３可以通过κ受体治疗脑出血后脑水肿。

关键词：脑出血脑水肿强啡肽A1-13 治疗

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糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 726-728页

作者：姚玉成胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅ... 详细信息

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。结果：详细分析了ＧＲ基因第２外显子及其侧翼的基因组ＤＮＡ片段结构，克隆了同源片段，构建了目标载体。结论：这一载体的构建将为进一步建立ＧＲ基因剔除小鼠奠定基础。

关键词：糖皮质激素受体目标载体克隆 GR基因

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电镜技术在病理学诊断中的应用

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 628-628,649页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

为摸索出适合临床超微结构病理诊断的电镜技术，更好地发挥其对疾病诊断的作用，现根据多年工作积累并结合临床实际，介绍本实验室在疾病诊断中电镜技术的应用情况。

关键词：病理学诊断电镜技术临床应用疾病诊断

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