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空军军医大学学报 2023年第2期44卷 111-116页

作者：马乖乖毛宏晖奚楷文刘明月肖昊翔袁滋铎武胜昔王文挺殷松娜延安大学基础医学院神经生物学教研室陕西延安716000 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室陕西西安710032

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区... 详细信息

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区的冠状脑片,全细胞膜片钳记录mPOA电生理特性。结果采用蔗糖切片液制作的脑片mPOA神经元的内在兴奋性要优于氯化胆碱切片液,具体表现为细胞静息膜电位更超极化,动作电位幅度、不同电流刺激平均放电幅度、放电个数均高,半宽、基强度较小。而氯化胆碱切片液制作的脑片突触活性要更好,表现为兴奋性微小突触后电流频率高于蔗糖切片液制作脑片的细胞。结论蔗糖切片液和氯化胆碱切片液在保证细胞活性的情况下,蔗糖切片液更适合记录mPOA神经元的内在兴奋性,而氯化胆碱切片液更适合突触特性的记录。

关键词：氯化胆碱蔗糖下丘脑内侧视前区脑片

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NDRG2通过BRD4/c-Myc通路抑制黏液表皮样癌细胞增殖及迁移侵袭的机制研究

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实用口腔医学杂志 2023年第3期39卷 318-322页

作者：魏欣欣封琳卜歆申亮亮李德超佳木斯大学口腔医院 154007 佳木斯大学基础医学院空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室青岛大学附属青岛市口腔医院

目的:研究NDRG2基因抑制人黏液表皮样癌细胞增殖及迁移侵袭的调控机制。方法:建立MC3细胞过表达NDRG2和MEC1细胞敲降NDRG2模型,用Westernblot和Real-timePCR检测c-Myc蛋白和mRNA的表达;荧光素酶报告基因实验检测c-Myc启动子活性;染色质... 详细信息

目的:研究NDRG2基因抑制人黏液表皮样癌细胞增殖及迁移侵袭的调控机制。方法:建立MC3细胞过表达NDRG2和MEC1细胞敲降NDRG2模型,用Westernblot和Real-timePCR检测c-Myc蛋白和mRNA的表达;荧光素酶报告基因实验检测c-Myc启动子活性;染色质免疫共沉淀(ChIP)检测BRD4与c-Myc启动子结合活性;CCK-8试剂盒检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:过表达NDRG2的MC3细胞中c-MycmRNA和蛋白表达减少、c-Myc启动子活性降低、BRD4与c-Myc启动子结合活性降低;敲降NDRG2的MEC1细胞中c-MycmRNA和蛋白表达增加、c-Myc启动子活性升高、BRD4与c-Myc启动子结合活性升高;过表达NDRG2的MC3细胞增殖和转移能力降低,而同时过表达c-Myc后细胞活力恢复,敲降NDRG2的MEC1细胞增殖和转移能力增加,而同时敲降c-Myc表达后细胞活力被抑制。结论:NDRG2通过抑制BRD4与c-Myc结合抑制c-Myc表达,抑制黏液表皮样癌细胞的增殖和迁移侵袭能力。

关键词：人黏液表皮样癌 NDRG2 c-Myc BRD4 转录调控启动子

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"AMU云教学"平台的开发及其在医学细胞生物学教学中的应用

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中华医学教育杂志 2022年第6期42卷 527-530页

作者：李玉红杨劲王韵高强国郭海英星懿展陆军军医大学基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

随着国家教育信息化战略的逐步推进,信息化教学改革成为一种趋势。陆军军医大学基础医学院细胞生物学教研室基于微信公众号平台自主设计开发了"辅助匹配程序(auxiliary matching utility,AMU)云教学"平台,兼具公众号订阅功能... 详细信息

随着国家教育信息化战略的逐步推进,信息化教学改革成为一种趋势。陆军军医大学基础医学院细胞生物学教研室基于微信公众号平台自主设计开发了"辅助匹配程序(auxiliary matching utility,AMU)云教学"平台,兼具公众号订阅功能和教学互动功能。本文主要介绍该平台的设计开发理念、主要功能和在医学细胞生物学课程教学中的应用,并采用问卷调查和考核成绩评价该平台辅助教学的效果。结果表明,全体教师和90.1%(272/302)的学生对使用该平台辅助教学效果表示满意,学生细胞生物学考试成绩优良(75分以上)者占比78.1%(236/302)。"AMU云教学"平台的开发和应用有效辅助了医学细胞生物学教学,为医学院校其他课程信息化平台构建提供了参考。

关键词：细胞生物学信息化教学云平台探索

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巨噬细胞外泌体在增殖性糖尿病视网膜病变中的研究进展

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生命科学 2023年第10期35卷 1380-1387页

作者：汪梦竹蔡畅刘洋宋洪元沈炜海军军医大学基础医学院学员一大队海军军医大学长海医院眼科

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病患者最常见的微血管系统并发症之一，是视力丧失的主要原因。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy, PDR)是DR的终末期表现，其主要的病理生理学特征是视网... 详细信息

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病患者最常见的微血管系统并发症之一，是视力丧失的主要原因。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy, PDR)是DR的终末期表现，其主要的病理生理学特征是视网膜新生血管形成(retinal neovascularization, RNV)。但PDR现有治疗方式存在局限性。外泌体作为细胞间沟通交流的重要使者，其携带的非编码RNA和生物活性蛋白质等重要信号分子，通过影响血管内皮细胞的增殖和迁移，在RNV中发挥关键作用。巨噬细胞是一种多功能调节细胞，越来越多的研究表明巨噬细胞外泌体在调控新生血管形成中起重要作用。该文就巨噬细胞外泌体在增殖性糖尿病视网膜病变形成中的作用与机制研究进展进行综述。

关键词：糖尿病视网膜病变巨噬细胞外泌体作用机制

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荧光标记类鼻疽菌的构建及其与宿主细胞相互作用的应用研究

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陆军军医大学学报 2022年第20期44卷 2105-2112页

作者：陈建高饶承龙刘文正吴潘王旭冉南栋琪杨文波毛旭虎陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床微生物与免疫学教研室重庆400038

目的构建类鼻疽菌(Burkholderia pseudomallei,***)的荧光示踪载体,获得自发荧光的类鼻疽菌株,并对其与宿主相互作用的感染过程进行初步应用研究。方法采用基因重组技术,将绿色、红色和蓝色荧光蛋白(green/red/blue fluorescent protein... 详细信息

目的构建类鼻疽菌(Burkholderia pseudomallei,***)的荧光示踪载体,获得自发荧光的类鼻疽菌株,并对其与宿主相互作用的感染过程进行初步应用研究。方法采用基因重组技术,将绿色、红色和蓝色荧光蛋白(green/red/blue fluorescent protein,GFP/RFP/BFP)基因分别重组到原核表达载体pUCP28T上,构建类鼻疽菌组成型荧光表达载体,并通过体外细菌培养观察外源性荧光蛋白的表达对细菌生长能力的影响,以及荧光标记细菌遗传稳定性的检测。通过炎症因子IL-8的检测评价荧光标记细菌对宿主细胞感染能力的变化。利用活细胞工作站观察类鼻疽菌被宿主细胞自噬体包裹的动态过程。结果构建了三种荧光标记的类鼻疽菌示踪载体,并且能在体外传代20代内稳定表达,且外源性荧光蛋白的表达不影响类鼻疽菌的生长和对宿主细胞的感染。同时,利用高分辨率活细胞成像系统观察到红色荧光标记的类鼻疽菌与宿主细胞GFP-LC3共定位的动态变化过程。结论本文成功构建了三种荧光标记的类鼻疽菌,以期为类鼻疽菌致病机制的研究、抗菌药物的筛选提供重要实用工具。

关键词：类鼻疽菌基因重组荧光标记自噬

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登革病毒多价DNA疫苗构建及免疫保护效果验证

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免疫学杂志 2023年第1期39卷 70-77页

作者：周伃欣何久香全纹萱赵镜李晋涛陆军军医大学基础医学院军事生物安全教研室重庆400038 重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054

目的研究登革病毒(dengue virus,DENV)的多价DNA疫苗pVAX1-EDIII在小鼠体内的免疫原性及其保护作用。方法采用真核表达载体p VAX1,设计并构建含4种血清型登革病毒EDIII结构域的DNA疫苗。在第0、14和42天采用电脉冲肌肉导入方式免疫小鼠... 详细信息

目的研究登革病毒(dengue virus,DENV)的多价DNA疫苗pVAX1-EDIII在小鼠体内的免疫原性及其保护作用。方法采用真核表达载体p VAX1,设计并构建含4种血清型登革病毒EDIII结构域的DNA疫苗。在第0、14和42天采用电脉冲肌肉导入方式免疫小鼠。末次免疫后1周,ELISA检测针对4种血清型登革病毒的血清特异性IgG抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IL-4、IFN-γ的水平;体内中和实验检测小鼠免疫后血清对感染DENV和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)乳鼠的保护效力。结果与对照组相比,电脉冲肌肉导入DNA疫苗诱导产生较高滴度的IgG抗体与较强的细胞免疫应答。免疫后血清对致死剂量DENV感染的3日龄乳鼠有完全保护作用,对ZIKV感染C57BL/c 1日龄乳鼠有部分保护作用。结论电脉冲肌肉导入登革DNA多价疫苗免疫可诱导针对4种血清型登革病毒的特异性体液免疫以及细胞免疫应答并能有效抵抗DENV的致死剂量攻毒,对ZIKV也能产生一定的保护效应,具有广谱抗黄病毒感染的潜力。

关键词：登革病毒 DNA疫苗电脉冲肌肉导入免疫应答寨卡病毒

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二氢杨梅素通过Prohibitin 2增强血管内皮细胞线粒体自噬

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陆军军医大学学报 2022年第4期44卷 356-362页

作者：胡琴申卉张婷李亚斐陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系军队流行病学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品卫生学教研室重庆400038

目的观察二氢杨梅素对血管内皮细胞线粒体自噬的影响,并探讨Prohibitin 2在其中的作用。方法用不同浓度(0、0.1、1、10、100μmol/L)二氢杨梅素处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)12 h后,流式... 详细信息

目的观察二氢杨梅素对血管内皮细胞线粒体自噬的影响,并探讨Prohibitin 2在其中的作用。方法用不同浓度(0、0.1、1、10、100μmol/L)二氢杨梅素处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)12 h后,流式细胞术和荧光显微镜观测MitoTracker;Deep Red (MTDR)荧光强度,RT-PCR和Western blot分别检测Prohibitin 2 mRNA及其蛋白表达。用氯喹预处理HUVECs 1 h后,再用不同浓度二氢杨梅素处理12 h或10μmol/L羰基氰化物间氯苯腙(线粒体自噬激动剂)处理6 h,流式细胞术检测线粒体自噬。另用control siRNA或Prohibitin 2 siRNA转染HUVECs后,再用二氢杨梅素处理12 h,流式细胞术检测细胞线粒体自噬。结果与无二氢杨梅素(0μmol/L)处理相比,≥0.1μmol/L二氢杨梅素处理显著降低血管内皮细胞MTDR荧光强度;同时,二氢杨梅素处理可明显增加Prohibitin 2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);当以氯喹预处理抑制溶酶体功能后,与无二氢杨梅素处理相比,≥10μmol/L二氢杨梅素处理可以显著增加血管内皮细胞线粒体自噬,与羰基氰化物间氯苯腙效应相一致(P<0.05)。与control siRNA处理组相比,以siRNA转染沉默Prohibitin 2后二氢杨梅素对线粒体自噬的诱导作用被明显抑制(P<0.05)。结论二氢杨梅素可通过调控Prohibitin 2增强血管内皮细胞线粒体自噬。

关键词：血管内皮细胞二氢杨梅素 Prohibitin 2 线粒体自噬

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单细胞表观遗传测序技术最新进展

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陆军军医大学学报 2022年第1期44卷 74-78页

作者：倪兵高维武陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系病理生理学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院全军免疫学研究所重庆400038

单细胞测序技术是目前解码组织、器官、细胞、分子异质性的重要热门工具,其主要基于二代测序技术,根据其检测对象可分为单细胞基因组学测序技术、单细胞表观组学测序技术、单细胞转录组学测序技术,以及可同时解析多个组学的单细胞多组... 详细信息

单细胞测序技术是目前解码组织、器官、细胞、分子异质性的重要热门工具,其主要基于二代测序技术,根据其检测对象可分为单细胞基因组学测序技术、单细胞表观组学测序技术、单细胞转录组学测序技术,以及可同时解析多个组学的单细胞多组学测序技术。表观遗传学是连接基因组学和细胞表型的重要调控环节,其可通过染色质的可及性、DNA和组蛋白的修饰、核小体的排列、染色质的三维构象等发挥转录调控等作用。目前,已开发了多种检测不同表观层面的单细胞测序新技术,绘制了多种组织、器官、细胞的多个表观层面异质性的图谱,初步阐述了细胞转录异质性的表观决定机制。未来的新技术和新算法,以及单细胞测序技术在生命科学和医学疾病中的应用,将有望深度解码组织、器官、细胞、分子的异质性以及异质性的调控机制。

关键词：单细胞测序表观组学转录组学二代测序异质性

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巨噬细胞吞噬检查点阻断在抗肿瘤免疫治疗中的应用

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空军军医大学学报 2024年

作者：郑文静张瀚霍毅张向前王涛延安大学生命科学学院空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞，可直接吞噬肿瘤细胞或在吞噬活化后通过分泌细胞因子和抗原提呈活化T细胞等方式清除肿瘤细胞，在抗肿瘤免疫应答中发挥关键作用。然而，肿瘤细胞常常通过高表达CD47、PD-L1或CD24等吞噬检查点分子作用于... 详细信息

巨噬细胞是重要的固有免疫细胞，可直接吞噬肿瘤细胞或在吞噬活化后通过分泌细胞因子和抗原提呈活化T细胞等方式清除肿瘤细胞，在抗肿瘤免疫应答中发挥关键作用。然而，肿瘤细胞常常通过高表达CD47、PD-L1或CD24等吞噬检查点分子作用于巨噬细胞并传递抑制性信号，抑制巨噬细胞的吞噬作用，从而逃避巨噬细胞的攻击，实现免疫逃逸。阻断巨噬细胞吞噬检查点信号，恢复巨噬细胞对肿瘤细胞的清除能力，已成为提高肿瘤免疫治疗效果的重要策略，并在临床试验中体现了其应用价值。本文主要综述了目前已发现的巨噬细胞吞噬检查点分子以及阻断这些吞噬检查点信号在抗肿瘤免疫治疗中的应用，并对巨噬细胞吞噬检查点阻断在未来抗肿瘤免疫治疗中的发展进行了展望。

关键词：肿瘤巨噬细胞吞噬检查点免疫逃逸免疫治疗

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仙台病毒递送新型冠状病毒RBD蛋白鼻内免疫接种增强呼吸道黏膜和系统性免疫应答的初步研究

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空军军医大学学报 2023年第7期44卷 609-614页

作者：袁明城张剑陈洋薛潘武福星袁若栋董阳超徐志凯张芳琳雷迎峰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并... 详细信息

目的研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并用Western blotting验证;将RBD-Fc融合蛋白表达质粒转染293-T细胞大量表达并使用亲和层析进行蛋白纯化;通过SeV递送RBD-Fc蛋白进行鼻内免疫接种,同时设置RBD-Fc组、SeV组、PBS组作为对照,各组分别在2周后加强免疫1次,3周后检测血清样本和肺泡灌洗液(BALF)中特异性抗体水平。结果 RBD、Fc蛋白编码基因片段通过重叠PCR方法得到融合蛋白基因片段(RBD-Fc),成功构建pCAGGS-RBD-Fc真核表达质粒;Western blotting结果显示RBD-Fc融合蛋白的表达条带符合预期大小,大量表达后经亲和层析获得一条单一的接近Mr 60 000的条带,与预期大小一致,纯度高;与RBD-Fc组、SeV组、PBS组相比,SeV递送RBD-Fc蛋白通过鼻腔加强免疫小鼠后的血清样本和BALF中均可检测到RBD特异性IgG(血清样本:P<0.01;BALF样本:P<0.05),且BALF中RBD特异性IgA相比RBD-Fc组有一定升高。结论 SeV在递送SARS-CoV-2 RBD蛋白进行鼻内免疫接种方面能够诱导一定水平的黏膜免疫和系统性免疫,为呼吸道传染病的黏膜疫苗研究奠定了初步的实验基础。

关键词：新型冠状病毒 RBD-Fc蛋白黏膜免疫仙台病毒

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