检索结果-内蒙古大学图书馆

第十次全国牙周病学学术会议

作者：叶菁王勤涛第四军医大学口腔医学院牙周科军事口腔医学国家重点实验室

目的比较炎症和正常牙周膜来源的牙周膜干细胞成血管的能力。方法分离纯化正常和炎症来源的牙周膜干细胞,对其进行成血管诱导,免疫荧光染色、实时定量PCR、Matrigel assay体外检测比较其内皮细胞相关标记物的表达水平及毛细血管网形成状... 详细信息

目的比较炎症和正常牙周膜来源的牙周膜干细胞成血管的能力。方法分离纯化正常和炎症来源的牙周膜干细胞,对其进行成血管诱导,免疫荧光染色、实时定量PCR、Matrigel assay体外检测比较其内皮细胞相关标记物的表达水平及毛细血管网形成状况,正常和炎症来源牙周膜干细胞复合HA/β-TCP材料植入裸鼠皮下,组织学观察其体内成血管能力。结果两种细胞经内皮向诱导培养后均能表达内皮细胞标记物VEGF、vWF、CD31、VE-cadherin,并且均

关键词：牙周膜干细胞成血管

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血清DNA结合蛋白SAP对核酸疫苗免疫效力的影响机制

血清DNA结合蛋白SAP对核酸疫苗免疫效力的影响机制

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第18次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室第二军医大学遗传学研究所

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抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

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第三军医大学学报 2013年第6期35卷 523-526页

作者：郑怡麟何莹陈安易维京胡川闽第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室重庆400038

目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT... 详细信息

目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Western blot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgG1和IgG2a,最高效价为1∶1 024 000,亲和力最高可达到1.3×109L/mol;选取2-D7经Western blot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。

关键词：降钙素原原核表达单克隆抗体特性鉴定 ELSIA检测

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受DNA甲基化调控的IncRNA-AY927547在原发性肝癌中的作用机制研究

受DNA甲基化调控的IncRNA-AY927547在原发性肝癌中的作用机制研究

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第十二次全国医学遗传学学术会议

作者：赵晨曦郭瀛军黄金凤孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室

目的:研究在原发性肝癌发生过程中受DNA甲基化调控的lncRNAs对肿瘤形成的影响及其分子机制。方法:甲基化相关的lncRNAs芯片数据进行分析,筛选潜在受DNA甲基化调控异常表达的lncRNAs。通过实时定量PCR技术检测lncRNAs的表达量改变;亚硫... 详细信息

目的:研究在原发性肝癌发生过程中受DNA甲基化调控的lncRNAs对肿瘤形成的影响及其分子机制。方法:甲基化相关的lncRNAs芯片数据进行分析,筛选潜在受DNA甲基化调控异常表达的lncRNAs。通过实时定量PCR技术检测lncRNAs的表达量改变;亚硫酸氢盐修饰与甲基化测序技术检测甲基化水平改变。通过siRNA干扰及全长载体质粒的构建在细胞水平对lncRNAs进行干扰及过表达后分析肿瘤表型:利用CCK-8法检测细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的迁移、侵袭能力;Annexin-FITC荧光法检测细胞凋亡。利用RNApull-down及western blot技术筛选与lncRNAs相结合的靶蛋白分子。结果:筛选出lncRNA-AY927547,其在肝癌样本中的表达量呈明显下调,且甲基化程度明显增高。干扰lncRNA-AY927547后,肝癌细胞的迁移及侵袭能力受到明显促进。过表达1ncRNA-AY927547后,肝癌细胞的迁移及侵袭能力受到明显抑制。Western blot显示与1ncRNA-AY927547正义链及反义链相结合的蛋白谱呈明显差异。结论:lncRNA-AY927547能够受到DNA甲基化的调控,在原发性肝癌的发生及转移过程中通过其结合靶蛋白发挥抑癌基因的作用,为发展表观遗传学药物治疗原发性肝癌提供了新的思路和靶向。

关键词：表观遗传学原发性肝癌 DNA甲基化长链非编码RNA

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ZEB1的一个可变剪切体通过抑制上皮间质转化抑制肝癌的转移

ZEB1的一个可变剪切体通过抑制上皮间质转化抑制肝癌的转移

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第十二次全国医学遗传学学术会议

作者：袁继行李浩龙郭瀛军王芳孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室

背景:上皮间质转化(EMT)和发育、肿瘤的发生、转移密切相关,但对其调控机制不清。长链非编码RNA为一类大于200nt,不具有蛋白编码能力的长链RNA分子,开始展示出对生命活动的重要的广泛的调控作用。阐明其对EMT的调控作用,明确肝癌中EMT... 详细信息

背景:上皮间质转化(EMT)和发育、肿瘤的发生、转移密切相关,但对其调控机制不清。长链非编码RNA为一类大于200nt,不具有蛋白编码能力的长链RNA分子,开始展示出对生命活动的重要的广泛的调控作用。阐明其对EMT的调控作用,明确肝癌中EMT的关键调控分子,以其为靶点对肝癌进行分子靶向治疗具有重要临床意义。方法与结果:5'-3'-末端快速扩增技术获得ZEB1的一个不同剪接体(ZEB1-isoform 1),但其不具有蛋白编码能力。其在肝癌组织中和ZEB1的表达呈负相关,且和肝癌的微血管侵袭、包膜完整度呈负相关。过表达ZEB1-isoform 1,可上调上皮标志分子E-cadherin、ZO1的表达,下调间质标志分子N-cadherin、vimentin的表达,即可抑制EMT,干扰ZEB 1-isoform 1,可促进EMT。RNA免疫共沉淀实验证实其可特异性的结合vimentin的mRNA,不改变vimentin的mRNA的水平,但可抑制其翻译,最终减少vimentin的蛋白水平。体外试验表明ZEB1-isoform 1可抑制肝癌细胞的迁移、侵袭,体内裸鼠合瘤实验证实ZEB1-isoform 1可抑制肝癌细胞的血管侵袭,抑制肝癌的转移。结论:ZEB1-isoform 1通过特异性的结合vimentin的mRNA,抑制vimentin的翻译,减少vimentin的蛋白水平,进而抑制EMT,最终抑制肝癌的侵袭、转移。表明其和ZEB1完全发挥着相反的作用,可作为肝癌潜在的治疗靶点。

关键词：长链非编码RNA 上皮间质转化可变剪接肝癌

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IBP表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱变化分析

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第三军医大学学报 2013年第2期35卷 109-113页

作者：向莉李鹏张竹君杨明珍陈安胡川闽第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室重庆400038

目的利用全基因组寡核苷酸芯片检测干扰素调节因子-4结合蛋白(IRF-4 binding protein,IBP)表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱的差异。方法采用本室构建的IBP表达抑制的Jurkat T细胞及相应对照细胞为实验对象,Anti-CD3、CD28 mAb处理细... 详细信息

目的利用全基因组寡核苷酸芯片检测干扰素调节因子-4结合蛋白(IRF-4 binding protein,IBP)表达抑制后活化T淋巴细胞基因表达谱的差异。方法采用本室构建的IBP表达抑制的Jurkat T细胞及相应对照细胞为实验对象,Anti-CD3、CD28 mAb处理细胞后提取刺激24、48 h的细胞总RNA,利用北京博奥生物有限公司22K Human GenomeArray芯片检测基因表达的差异,以***.V1软件,结合KEGG、NCBI等生物信息学数据库检索分析差异表达基因功能和网络关系。结果 IBP基因表达抑制的Jurkat T细胞在TCR信号刺激24、48 h后,细胞能量代谢、周期生长、转录调控及凋亡等多种类型的基因发生差异表达改变,2个时相组共有56个差异表达趋势一致基因,其中17个基因共同上调,39个基因共同下调。结论在活化的Jurkat T细胞中IBP表达抑制所致多个基因差异表达。

关键词：干扰素调节因子4结合蛋白 T淋巴细胞基因芯片

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靶向抗肿瘤药物AnxB1-MLT的基因构建及诱导表达条件优化

靶向抗肿瘤药物AnxB1-MLT的基因构建及诱导表达条件优化

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第十二次全国医学遗传学学术会议

作者：王玉招颜宏利唐冠楠林恒荣章意亮孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室

背景与目的:靶向药物治疗(targeted drug therapy)逐渐成为是目前肿瘤治疗的重要手段。近年来的研究发现,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是抗肿瘤治疗的重要靶点之-。膜联蛋白B1(annexin B1)是孙树汉教授克隆的一个新的膜联蛋白(A... 详细信息

背景与目的:靶向药物治疗(targeted drug therapy)逐渐成为是目前肿瘤治疗的重要手段。近年来的研究发现,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是抗肿瘤治疗的重要靶点之-。膜联蛋白B1(annexin B1)是孙树汉教授克隆的一个新的膜联蛋白(Annexins)亚家族成员,对PS的结合具有很高的亲和力和特异性。蜂毒肽(melittin,MLT)是蜂毒的主要成分,具有很强的抗肿瘤作用。以肿瘤内皮细胞暴露的磷脂酰丝氨酸为"靶",以AnxB1为"导向分子",以蜂毒素为"抗肿瘤分子",构建基因工程靶向抗肿瘤药物mAnxB1-MLT。方法:利用PCR重叠区延伸法连接AnxB1-MLT,融合基因克隆至pGEX5T融合表达载体和pET-28a表达载体,转染大肠杆菌,分别就IPTG浓度、利福平、表达温度等条件进行优化。结果:融合蛋白AnxB1-MLT在pET-28a表达载体中无明显表达条带。37℃条件下,pGEX-5T表达质粒中高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%以上;IPTG、利福平对表达影响较小,但表达产物均为包涵体,不利于纯化。在22-25℃条件下诱导表达,虽然大肠杆菌生长较慢,但表达产物均为可溶性表达,且占菌体蛋白30%以上。利用GST亲和层析柱纯化,蛋白纯度大于90%。结论:成功构建了融合表达蛋白AnxB1-MLT的表达质粒,优化了诱导表达条件,获得了重组蛋白,为进一步通过动物模型研究其靶向抗肿瘤活性奠定了基础。

关键词：膜联蛋白B1 蜂毒素靶向抗肿瘤药物

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大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

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中国保健营养 2016年第14期 520-521页

作者：马笛巩平新疆石河子大学医学院第一附属医院新疆石河子832000

目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞的上皮-间充质转化(EMT)的调节作用及机制.方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10ng·mL-1 TGF-β1、10ng·mL-1 TGF-β15 μg·mL-1大蒜素、5 μg·mL-1大蒜素处理PANC-1细胞,另... 详细信息

目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞的上皮-间充质转化(EMT)的调节作用及机制.方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10ng·mL-1 TGF-β1、10ng·mL-1 TGF-β15 μg·mL-1大蒜素、5 μg·mL-1大蒜素处理PANC-1细胞,另设空白对照组.应用划痕试验检测胰腺癌细胞的迁移能力.Real-time PCR检测各组E-Cadherin、Viminten的表达.结果:划痕试验表明大蒜素可明显抑制胰腺癌细胞发生EMT后的迁移能力,差异有统计学意义(P＜0.05);Real-time PCR显示,胰腺癌细胞经大蒜素及TGF-β1处理后,与Con组相比,TGF-β 1组E-cadherin表达均明显下调(P＜0.05),Vimentin表达则明显上调(P＜0.05),说明TGF-β1促进了胰腺癌细胞发生EMT.与TGF-β1组相比,大蒜素+TGF-β1组及大蒜素组的E-candherin表达上调,Vimentin表达下调,表明大蒜素具有阻断TGF-β1诱导的胰腺癌EMT效应(p＜0.05).结论:大蒜素可抑制胰腺癌细胞发生上皮间质转化.

关键词：大蒜素胰腺癌上皮间质转化

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分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响

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现代生物医学进展 2013年第35期13卷 6848-6851,6936页

作者：李焱张杰武赟杨劲杨珂郭海英第三军医大学学员旅五队重庆400038 第三军医大学基础部细胞生物学教研室重庆400038

目的:探讨分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响。方法:用带有Wnt5a基因的腺病毒及对照组腺病毒作为载体感染体外培养的melan-a黑素细胞;MTT法测定细胞增殖率;体外氧化DOPA反应法测定酪氨酸酶活性;NaOH法... 详细信息

目的:探讨分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响。方法:用带有Wnt5a基因的腺病毒及对照组腺病毒作为载体感染体外培养的melan-a黑素细胞;MTT法测定细胞增殖率;体外氧化DOPA反应法测定酪氨酸酶活性;NaOH法测定黑素含量;RT-PCR方法检测melan-a细胞中MITF的表达。结果:与AdGFP对照组相比,AdWnt5a处理组melan-a细胞的增殖率明显降低(P<0.01);DOPA反应法和NaOH法检测结果发现,Wnt5a能显著降低melan-a细胞内酪氨酸酶活性(P<0.01)以及黑素含量(P<0.05);RT-PCR结果表明,Wnt5a显著下调melan-a细胞内MITF的表达(P<0.01)。结论:以上结果显示,AdWnt5a处理组melan-a细胞的增殖率、酪氨酸酶活性、产黑素的量及MITF的表达均有所下降。实验结果提示,Wnt5a能有效抑制melan-a细胞产黑素的能力,并且其作用机制可能与下调MITF的表达有关。

关键词： Wnt5a 黑素细胞黑素

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人Sox10基因启动子区高甲基化的预测和验证

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第三军医大学学报 2013年第20期35卷 2168-2171页

作者：李文英余鸿陈兴书肖岚第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 自贡市第三人民医院病理科四川643020 泸州医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室四川646000

目的运用生物信息学方法预测人Sox10基因启动子区甲基化情况并进行实验验证。方法从GenBank获取人Sox10基因序列,利用Methyprimer 11.0软件、Li lab、CpG Island Searcher预测其启动子区CpG岛。进一步运用甲基化特异性PCR(methylation s... 详细信息

目的运用生物信息学方法预测人Sox10基因启动子区甲基化情况并进行实验验证。方法从GenBank获取人Sox10基因序列,利用Methyprimer 11.0软件、Li lab、CpG Island Searcher预测其启动子区CpG岛。进一步运用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中的甲基化情况。结果经过生物信息学分析发现,人Sox10基因启动子区存在2个CpG岛,分别为165(1 241～1 405)bp和105(1 478～1 582)bp。针对这两个CpG岛设计引物行MSP和BSP实验,研究发现,在人多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中Sox10基因启动子区CpG岛均出现部分甲基化,其中在多形性胶质母细胞瘤中的甲基化率为90.5%,在瘤周组织中的甲基化率为28.5%。结论本研究证实了人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤中出现高甲基化,提示其表达下调可能受甲基化调节。

关键词：人Sox10基因启动子区甲基化生物信息学分析 MSP BSP 人多形性胶质母细胞瘤

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