目的探究GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法在MCF7细胞中利用慢病毒载体介导的基因干涉技术敲低GATA3基因,使用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测GATA3和LIFR的mRNA和蛋白表达水平,...
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目的探究GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法在MCF7细胞中利用慢病毒载体介导的基因干涉技术敲低GATA3基因,使用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测GATA3和LIFR的mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。在MCF7和T47D细胞中用染色质免疫沉淀(ChIP-qPCR)实验检测GATA3在LIFR的启动子区的结合位点。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中回补LIFR,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测MCF7细胞的迁移能力。结果与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的迁移能力增强(P_(均)<0.05)。与对照组相比,敲低GATA3基因的MCF7细胞的LIFR表达水平降低(P_(均)<0.05)。乳腺癌细胞MCF7与T47D中GATA3在LIFR的启动子区有结合(P_(均)<0.05)。在敲低GATA3基因的MCF7细胞中稳定过表达LIFR可以部分挽救GATA3基因敲低引起的细胞迁移能力的增强(P_(均)<0.05)。结论GATA3通过转录激活LIFR抑制乳腺癌细胞MCF7的迁移。
目的明确72 h睡眠剥夺(SD)对小鼠行为异常的影响,初步探究海马区小胶质细胞在该模型下的活化改变。方法通过改良多平台法诱导构建SD小鼠模型。将小鼠随机分为SD组和对照组,每组8只。在SD模型的基础上,应用高架十字迷宫实验、开放旷场实验和新物体识别实验分析小鼠行为变化,以确定SD对情绪和认知功能的影响;应用免疫荧光染色技术和形态学分析的方法观察小胶质细胞在72 h SD后的活化情况。结果高架十字迷宫实验显示,与对照组小鼠对比,SD组小鼠进入开放臂次数及探索时间明显降低(P<0.01,P<0.05);旷场实验中SD组小鼠进入旷场中心区域的时间、次数以及运动的总距离均低于对照组(P<0.01);在新物体识别实验中,SD组小鼠对新物体识别水平低于对照组小鼠(P<0.01);SD组小鼠海马区域小胶质细胞被激活,胞体面积增加(P<0.01),细胞数量增多(P<0.05)。结论SD导致小鼠出现焦虑样行为及认知功能障碍,诱发海马脑区小胶质细胞的过度活化。
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