检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第1期25卷 14-17页

作者：张冬梅潘卫庆第二军医大学基础医学部病原生物学教研室上海200433

目的:全合成恶性疟原虫eba-175Ⅱf2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原PfCP-2.9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制.方法:采用不对称PCR法拼接合成eba-175Ⅱf2基因(959 bp),用电转化... 详细信息

目的:全合成恶性疟原虫eba-175Ⅱf2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原PfCP-2.9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制.方法:采用不对称PCR法拼接合成eba-175Ⅱf2基因(959 bp),用电转化方法将合成基因导入毕氏酵母中并进行诱导表达,采用离子交换层析和分子筛层析纯化EBA-175ⅡF2蛋白.结果:全合成eba-175Ⅱf2基因在毕氏酵母中高效分泌表达.重组EBA-175ⅡF2和PfCP-2.9联合免疫后,以ELISA 和IFA检测,针对2个蛋白联合免疫的抗体滴度明显高于2个蛋白单独免疫的滴度.结论:重组EBA-175ⅡF2和PfCP-2.9联合免疫时不存在竞争性免疫抑制,这2个重要的疟疾疫苗候选抗原具有潜在联合应用前景.

关键词：恶性疟原虫 175 000红细胞结合抗原免疫性

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HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 962-965页

作者：朱诗应赵平任浩赵兰娟戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fa... 详细信息

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fast Bac HTa构建重组转座质粒 p FB- CE2 t,转化 DH10 Bac大肠杆菌 ,获得重组杆状病毒穿梭质粒 Bacmid- CE2 t,以之转染昆虫 Sf9细胞进行外源基因的表达 ,并对其抗原性进行 EL ISA检测。结果 :SDS- PAGE和 Western blot分析表明Bacmid- CE2 t在 Sf9细胞表达了 HCV C- E2蛋白 ,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的 C蛋白和截短的 E2蛋白。纯化后的蛋白能分别与 HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应。结论 :HCV核心蛋白和截短的

关键词：肝炎病毒,丙型核心蛋白截短的E2蛋白昆虫Sf 9细胞

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庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制(英文)

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 389-393页

作者：王宏卫潘欣戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 W... 详细信息

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 Western印迹分析病毒正、负链 RNA,蛋白表达和剪切。结果 :在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞及 HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链 RNA,但在转染 p3.1 HGV的张氏肝细胞中未能检出 HGV负链 RNA。Western印迹在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞中检测到针对 HCV NS3蛋白、相对分子质量约 70 0 0 0的特异性条带 ,在 HGV转基因小鼠某些组织中检测到 2条特异性条带 ,相对分子质量约 4 2 0 0 0和 1 0 0 0 0 0 ,分别相当于 HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而 ,在转染p3.1 HGV的张氏肝细胞中检测到针对 HGV E2蛋白的特异性条带 ,其相对分子质量约为 31 0 0 0 0 ,相当于 HGV整个前体蛋白。结论 :HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用 ,HGV和 HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异。

关键词：庚型肝炎病毒全长cDNA克隆表达复制丙型肝炎病毒

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嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 301-303页

作者：马玉海张勇曹莉张少成潘永太麻文谦孙来卿路长林第二军医大学长海医院骨科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 O... 详细信息

目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用。方法 :30只 SD大鼠随机分为 OECs组和对照组 ,每组 1 5只 ;切除 3m m右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复 ,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的 OECs和生理盐水 ;术后 4、8和 1 2周分别行电生理和组织学检查。结果 :术后 4、8和 1 2周 ,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生 ,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0 .0 5 )。结论 :外源性

关键词：嗅鞘细胞大鼠坐骨神经神经再生细胞移植

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蛋白激酶与蛋白磷酸酶在细胞增殖分化中的机制研究

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第二军医大学学报 2004年第5期25卷 550-552页

作者：刘善荣刘厚奇戚中田赵兰娟王凤玫冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室 Burnham Institute

细胞生长发育和癌变过程中有众多复杂的信号转导途径以及信号分子参与,其中最基本的生化反应过程是系列蛋白质(信号分子)的磷酸化.

关键词：蛋白激酶蛋白磷酸酶细胞增殖细胞分化

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普鲁泊福对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1212-1215页

作者：夏建华石学银曹莉刘刚张琪王亚华第二军医大学长征医院麻醉科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的 :研究普鲁泊福对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用及其机制。方法 :SD大鼠 6 0只 ,随机分为假手术组、损伤组和普鲁泊福组 (n=2 0 )。采用改良的 Allen's打击法致伤大鼠脊髓 ,假手术组仅做椎板切除术。普鲁泊福组在脊髓损伤后 30 mi... 详细信息

目的 :研究普鲁泊福对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用及其机制。方法 :SD大鼠 6 0只 ,随机分为假手术组、损伤组和普鲁泊福组 (n=2 0 )。采用改良的 Allen's打击法致伤大鼠脊髓 ,假手术组仅做椎板切除术。普鲁泊福组在脊髓损伤后 30 min以 6 0 mg/ (kg· h)的速度持续输注 1%的普鲁泊福 1h,其余两组以相同的方法给予 0 .9%的生理盐水。应用斜板试验和 BBB(Basso,Beattie and Bresnahan)评分法进行后肢运动功能评价 ,分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定血浆超氧化物歧化酶 (SOD)活力和丙二醛 (MDA)含量变化 ,同时观察组织形态学变化。结果 :普鲁泊福组行为学评分明显高于损伤组(P<0 .0 5 ) ;与假手术组相比 ,损伤组血浆 MDA含量升高 ,SOD活力降低 ,而与损伤组相比 ,普鲁泊福组血浆 MDA含量降低 ,SOD活力升高 ;损伤组脊髓病理变化较重 ,可见大量神经元坏死 ,普鲁泊福组神经元坏死较轻。结论 :普鲁泊福对大鼠急性脊髓损伤有较好的治疗作用 ,其机制与抗氧化作用有关。

关键词：普鲁泊福脊髓损伤超氧化物歧化酶丙二醛

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羟甲芬太尼对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 168-171页

作者：许欣李强孙学军张殿尧王成海第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体... 详细信息

目的 :探讨 μ阿片受体激动剂羟甲芬太尼 (OMF)对慢性缺氧大鼠呼吸功能的影响。方法 :将 86只雄性 SD大鼠随机分为正常组和慢性缺氧组 ,慢性缺氧模型由经尾静脉 6次注射木瓜蛋白酶而建立。正常组大鼠侧脑室微量注射 OMF(n=1 0 )和同体积人工脑脊液 (a CSF) (n=1 0 )。慢性缺氧组大鼠又随机分为 :(1 )侧脑室组 ,分别微量注射阿片受体拮抗剂纳络酮(NL X) (n=1 2 )和 OMF(n=1 2 ) ,同时另有两组均注射 a CSF(n=1 2 )作为对照 ;(2 )孤束核组 ,分别微量注射 OMF(n=9)和同体积 a CSF(n=9)。在注射后 5、1 5、30、4 5、6 0 min测定各组大鼠呼吸频率 (RR)和潮气量 (VT)。结果 :正常大鼠侧脑室注射OMF后 1 5、30、4 5、6 0 min,RR、VT 均显著下降 (P<0 .0 5 ) ;慢性缺氧大鼠侧脑室及孤束核注射 OMF后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT 均显著降低 (P<0 .0 1 ) ,侧脑室注射 NL X后 1 5、30、4 5、6 0 m in,RR、VT均显著增高 (P<0 .0 5 )。结论 :μ阿片受体激动剂可能通过中枢相应受体降低 RR、VT 等呼吸指标。

关键词：羟甲芬太尼慢性缺氧大鼠呼吸功能 μ阿片受体激动剂

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大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 292-294页

作者：缪明永朱克军汪振诚刘军华蒋雷王学敏焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变... 详细信息

目的 :研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换 (PT)的变化规律。方法 :SD大鼠肝 70 %部分切除 (PH)制作肝再生模型 ,断头取肝分离线粒体后 ,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在 5 4 0 nm处光密度值 (D540 )变化来观察线粒体 PT的时相变化。结果 :与对照组比较 ,大鼠肝再生早期 (PH后 0～ 2 4 h)和后期 (PH后 1 2 0～ 1 6 8h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀 ,也即通透性先下降后增高 ;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用 ,而 PH后2 4 h和 1 6 8h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感。环孢素 A(Cs A)可阻断钙的诱导作用。结论 :大鼠肝再生过程中线粒体 PT出现明显规律性改变。

关键词：大鼠肝再生线粒体通透性转换钙离子环孢素A

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改良PCR-RFLP法测定异质性线粒体基因的相对含量

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 1036-1037页

作者：龙建纲王洁缪明永王学敏第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :改进 PCR- RFL P法 ,确认线粒体异质性基因并测定异质性线粒体基因的相对含量。方法 :依据先期实验中克隆测序得到的 ECV 30 4细胞中线粒体基因 (D- L OOP区 )多态性位点 ,采用两轮 PCR法 ,以第 1轮 PCR胶回收产物为模板 ,作第 2... 详细信息

目的 :改进 PCR- RFL P法 ,确认线粒体异质性基因并测定异质性线粒体基因的相对含量。方法 :依据先期实验中克隆测序得到的 ECV 30 4细胞中线粒体基因 (D- L OOP区 )多态性位点 ,采用两轮 PCR法 ,以第 1轮 PCR胶回收产物为模板 ,作第 2轮 PCR,并在第 2轮 PCR中引入限制性内切酶位点 ,酶切产物行琼脂糖电泳 ,测定异质性线粒体基因的相对含量。结果 :ECV30 4细胞中存在 5 13A/ G异质性 ,二者比例约为 1∶ 3。结论 :确证 ECV30 4细胞中含有 5 13A/ G异质性碱基 ,改良 PCR-RFL P法测定异质性线粒体基因相对含量较为简单可靠。

关键词：线粒体基因异质性 PCR-RFLP

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一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 444-446页

作者：朱克军汪振诚王学敏缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和... 详细信息

目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体 DNA用 PCR进行长片段扩增 ,比较扩增效果。结果 :用改进的方法制备的线粒体 DNA中没有检测到核 DNA,并能有效扩增 8kb长的目的片段。结论 :改进后的方法简便、快捷 ,制备的线粒体 DNA纯度高 ,也有利于长片段

关键词：外周血线粒体DNA 聚合酶链反应骨骼肌

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