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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 298-302页

作者：沈毅珺潘卫易进华徐容陈秋莉潘欣冯春芝邓松华戚中田刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 上海复旦张江生物医药股份有限公司安徽医科大学病理生理学教研室

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 详细信息

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。

关键词：噬菌体展示噬菌粒载体多克隆位点多肽接头

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细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会

目的:探索应用细菌双杂交体系统在细胞外蛋白质之间相互作用分析的可行性。方法:应用StratageneBacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒;以pBT构建编码DR4,DR5,OPG等的细胞外区域序... 详细信息

目的:探索应用细菌双杂交体系统在细胞外蛋白质之间相互作用分析的可行性。方法:应用StratageneBacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达表达质粒;以pBT构建编码DR4,DR5,OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒。重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-BlueMRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标。结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500(g/ml以上)筛选下宿主菌

关键词：细菌双杂交系统半乳糖苷酶共转化羧苄青霉素激活状态外区域宿主菌

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脊髓火器伤后GDNFmRNA表达的实验研究

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实用医药杂志 2003年第11期20卷 838-840页

作者：宋海涛贾连顺陈哲宇陈坚刘传云何成 107医院济南军区创伤骨科中心山东烟台264002 第二军医大学长征医院骨科第二军医大学基础医学部神经生物学教研室第二军医大学海医系军队卫生教研室上海200003

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤... 详细信息

目的观察脊髓火器伤后GDNFmRNA的表达变化并探讨其意义。方法利用民用射钉枪建立大鼠脊髓火器损伤模型,不同时间采用半定量RT-PCR方法,观察T12～L1段脊髓GDNFmRNA表达的变化。结果脊髓损伤前,GDNFmRNA在T12～L1段脊髓微量表达,脊髓损伤后表达逐渐减少,伤后1、4、7、10d分别减少25%、71%、82%、86%。结论脊髓GDNFmRNA表达减少,是由于失去靶组织转运GDNFmRNA所造成,这为外源性GDNF治疗脊髓火器伤提供了理论依据。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子射钉枪脊髓火器伤基因表达

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YFP-CD18融合蛋白在U937细胞株中的表达与鉴定

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生物技术 2003年第4期13卷 4-6页

作者：严鸣毛积芳钟纪根何健朱秋峰徐仁宝基础医学部病理生理学教研室基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院急救科长征医院麻醉科第二军医大学上海200433

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载... 详细信息

目的 :构建并表达Mac - 1的β链CD18与黄色荧光蛋白 (YFP)的融合蛋白YFP -CD18,为进一步直视研究Mac- 1在白细胞内的分布、走向及归宿提供物质条件。方法 :首先将CD18的全长cDNA与pEYFP -C1进行酶切 ,构建YFP与CD18的N末端连接的表达载体 ,并将其转染至U937细胞株中进行表达。通过荧光显微镜观察转染成功后的U937细胞黄色荧光是否存在 ,以及流式细胞术检测确定PMA刺激后YFP -CD18活化后可否由胞浆内转位至膜上和测定PMA活化前后转染的U937细胞与其配基ICAM - 1粘附活性的变化等方面来进行鉴定。结果 :经酶切鉴定 ,pYFP -CD18构建正确 ,转染U937细胞株后 ,可见YFP -CD18融合蛋白发出的黄色荧光。结论 :构建完成YFP -CD18融合基因并可以在U937细胞株中进行表达。

关键词： YFP CD18 融合蛋白 U937细胞株表达黄色荧光蛋白

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Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

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中华临床医药杂志（北京） 2003年第9期4卷 6-8页

作者：肖扬焦炳华朱玉平彭艳王梁华娄永华解放军第118医院肝病科325000 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室200433

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组... 详细信息

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial growth inhibitor，VEGI)的抗肿瘤活性及其机制。方法：用重组人可溶性VEGI治疗荷S180肉瘤小鼠；第VIII因子相关抗原(FVIII RAg)标记肿瘤血管内皮细胞，用免疫组化Envision法检测瘤内微血管密度。结果：重组人可溶性VEGI显著抑制S180肉瘤生长，肿瘤微血管密度大大减低。结论：VEGI具有较强的抗肿瘤活性，其机制可能是通过抗新生血管形成介导的。

关键词： Envision法免疫组织化学染色研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子抗肿瘤活性

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N-硝基-L-精氨酸抑制大鼠吗啡身体依赖的强啡肽机制

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解放军药学学报 2003年第5期19卷 327-330页

作者：黄矛万兴旺何雅琴李万亥由振东路长林中国人民解放军第二军医大学基础医学部新药评价中心上海200433 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院国际合作生物信号转导研究中心上海200433 中国人民解放军第二军医大学药学院药理教研室上海200433 中国人民解放军第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在抑制吗啡身体依赖形成中的作用及探讨强啡肽在该过程中的可能作用。方法　采用剂量递增皮下注射吗啡法建立大鼠吗啡身体依赖模型 ;身体依赖程度采用皮下注射 5mg·kg-1 纳洛酮激发戒断症状... 详细信息

目的　研究N 硝基 L 精氨酸 (NO2 Arg)在抑制吗啡身体依赖形成中的作用及探讨强啡肽在该过程中的可能作用。方法　采用剂量递增皮下注射吗啡法建立大鼠吗啡身体依赖模型 ;身体依赖程度采用皮下注射 5mg·kg-1 纳洛酮激发戒断症状并对大鼠 6 0min内可数和不可数的戒断症状评分的方法进行 ;采用放射免疫法分别测定大鼠脑各分区、垂体、脊髓和血浆内免疫活性强啡肽A(ir-Dyn)的含量。结果　NO2 Arg可剂量相关性地抑制吗啡身体依赖的形成 ,其中 5mg·kg-1 NO2 Arg可显著抑制吗啡依赖大鼠大多数戒断症状 ;NO2 Arg处理可显著升高吗啡依赖大鼠脊髓、纹状体、垂体及血浆内ir-Dyn的水平。该作用可被特异性κ -受体阻滞剂norbinaltorphimine (nor-BNI)所拮抗。结论　NO2 Arg剂量相关性地抑制吗啡身体依赖的形成。

关键词：吗啡依赖身体依赖 N-硝基-L-精氨酸强啡肽一氧化氮

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镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 811-815页

作者：任绪义周雍张建鹏冯伟华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2m... 详细信息

啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感 .为阐明睾丸的镉毒性分子机制 ,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化 .mRNA采用RT PCR技术分析并用光密度扫描定量 ;蛋白质定量用ELISA方法 .结果显示 ,睾丸中存在MT ,镉中毒后MT1与MT2mRNA明显升高 ,但MT没有相应增加 ;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高 .结果提示 :镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录 ,但没有促进其MT的合成。

关键词：镉中毒大鼠睾丸肝脏金属硫蛋白表达时相研究

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干细胞:生物医药研究的新靶标

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1161-1165页

作者：胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

曾几何时,我有过一个很朦胧的概念,即"个体生长发育和功能维持可能是通过干细胞在空间和时间上的有序增殖与分化来实现的".虽然,这一概念当时还未真正形成,而且也还没有明确的解释,但就目前来说,它与各相关学科的现有理论和... 详细信息

曾几何时,我有过一个很朦胧的概念,即"个体生长发育和功能维持可能是通过干细胞在空间和时间上的有序增殖与分化来实现的".虽然,这一概念当时还未真正形成,而且也还没有明确的解释,但就目前来说,它与各相关学科的现有理论和知识并不冲突,而且还显得十分吻合.

关键词：新靶标干细胞生物药学应用肿瘤

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庚型肝炎病毒全基因转基因小鼠的制备与遗传

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1175-1178页

作者：胡卫江王宏卫戚中田李建秀胡以平第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 基础医学部细胞生物学教研室

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA South... 详细信息

目的:利用显微注射方法产生整合庚型肝炎病毒(HGV)全基因的转基因小鼠,并研究HGV基因的遗传特性。方法:将含有HGV全长基因的载体线性化后,将目的基因DNA溶于显微注射用缓冲液,依常规方法进行显微注射,得到仔鼠后用PCR及基因组DNA Southern印迹法鉴定。阳性小鼠即为建立者(founder)小鼠,将founder小鼠与正常小鼠交配得到F代小鼠,随后将F1代阳性鼠与正常小鼠交配得到F2代小鼠。结果:共得到5只founder小鼠,其中4只与正常小鼠交配,得到F1代小鼠共41只,其中29只为阳性,阳性率为71％。F2代小鼠共21只,其中16只为阳性,阳性率为76％。结论:得到了整合有HGV全长基因的转基因小鼠,并证明HGV基因可以在转基因小鼠体内稳定传递。

关键词：制备庚型肝炎病毒转基因小鼠遗传学动物模型

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小鼠受精卵显微操作方法的改进

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第二军医大学学报 2002年第9期23卷 1032-1033页

作者：李建秀胡卫江胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学实验动物中心

目的 :改进小鼠受精卵显微操作方法 ,提高小鼠受精卵的存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。方法 :以一定长度大小及浓度的 DNA片段为材料 ,分别进行常规及改进的显微操作后 ,统计分析受精卵存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。结果 :经改... 详细信息

目的 :改进小鼠受精卵显微操作方法 ,提高小鼠受精卵的存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。方法 :以一定长度大小及浓度的 DNA片段为材料 ,分别进行常规及改进的显微操作后 ,统计分析受精卵存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。结果 :经改进后缩短操作时间的显微操作法与常规显微操作法相比 ,小鼠受精卵的存活率由 6 0 .3%提高至 79.5 %、假孕母鼠生产率由 35 .7%提高至 5 6 .8%、得仔率由 10 .1%提高至 14.1%,均有显著差别 (P<0 .0 1)。结论 :改进的显微操作法可推广应用于常规的转基因小鼠制备。

关键词：受精卵存活率生产率得仔率显微操作法

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