检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第2期23卷 143-146页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PC... 详细信息

目的 :克隆人 THANK的全长基因及编码可溶性胞外区的基因 ,并在大肠杆菌中表达可溶性 THANK。方法 :采用RT- PCR从 PMA诱导的 HL 6 0细胞中克隆人 THANK全长编码基因 ,继以 PCR扩增出可溶性 THANK编码区基因 (134～2 85位氨基酸 ) ,PCR产物克隆于 p MD- 18T,经 DNA测序证实后亚克隆到 p ET- 11a中。重组质粒转化 BL 2 1,以 1m mol/ LIPTG进行诱导表达产物 ,SDS- PAGE分析表达产物 ,对重组蛋白经纯化复性后测定生物学活性。结果 :RT- PCR扩增出编码人 THANK全长编码基因及 PCR扩增出 THANK1 34 - 2 85基因的 c DNA ,经序列分析证实与文献报道完全一致。含有THANK1 34 - 2 85编码基因的表达载体 ,转化大肠杆菌后表达出相对分子质量约 180 0 0的重组蛋白。该重组蛋白经纯化后能够诱导 U937细胞凋亡。结论 :成功克隆了人 THANK基因 ,并在大肠杆菌中表达重组可溶性 THANK,该重组蛋白在实验条件下具有诱导 U937细胞凋亡的作用。

关键词： TNF超家族 RT-PCR 基因克隆基因表达肿瘤重组人可溶性THANK 大肠杆菌

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高密度培养大肠杆菌表达重组人胰高血糖素样肽-1

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 254-256页

作者：张志珍毛积芳杨生生窦鸿第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶... 详细信息

目的 :高密度发酵培养表达重组人胰高血糖素样肽 - 1( h GL P- 1)。方法 :将构建的重组质粒 p GEX- h GL P- 1转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3 ) ,得到表达 h GL P- 1的工程菌株 *** BL 2 1( DE3 ) / p GEX- h GL P- 1。在 5 0 0 m l三角摇瓶中进行了诱导条件的摸索实验 ,之后用 5 L自控发酵罐对工程菌进行高密度培养 ,以获取 h GL P- 1和谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白 ( GST- h GL P- 1)。结果 :采用分批培养和补料分批培养相结合的技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧的量 ,可使重组工程菌发酵光密度D6 0 0 值达 5 2 ,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白量的 2 8% ,其含量达到 2 .1g/ L。用 ESI质谱鉴定 h GL P- 1相对分子质量与理论值一致。结论 :本研究为大规模生产重组 h GL P-

关键词：高密度培养人胰高血糖素样肽-1 基因表达融合蛋白质类大肠杆菌强降血糖肽

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重组人可溶性VEGI在大肠杆菌中的高效表达

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 140-142页

作者：娄永华焦炳华肖扬朱玉平王梁华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DN... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人可溶性 VEGI,纯化重组蛋白并分析其生物学活性。方法 :采用 PCR方法对编码人 VEGI全基因进行修饰 ,获得编码成熟蛋白第 2 9～ 174位氨基酸的 C端胞外区基因片段 ,将 PCR产物亚克隆到 p MD-18T中 ,经 DNA测序证实后亚克隆入高表达载体 p L OU- 1,转化大肠杆菌 BL 2 1,获得高表达菌株。经 IPTG诱导获得高表达 ,纯化表达产物并检测其对内皮细胞 ECV30 4增殖的抑制活性。结果 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,约占细菌总蛋白的 4 0 % ;纯化的重组蛋白经复性后具有直接抑制内皮细胞增殖的活性。结论 :重组人可溶性 VEGI在大肠杆菌中获得高效表达 ,且表达的重组蛋白具有抑制内皮细胞生长作用。

关键词：血管内皮聚合酶链反应血管生长抑制因子基因表达重组人可溶性VEGI 大肠杆菌

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外周血单核细胞LIGHT的诱导表达及基因克隆

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 129-131页

作者：娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因... 详细信息

目的 :分析细胞因子对外周血单核细胞 L IGHT基因的诱导表达 ,并克隆人 L IGHT基因。方法 :采用新鲜健康人外周血单核细胞 (PMBC) ,分别以 L PS、TNFα、IL - 2、IFN-γ及 PMA刺激以诱导 L IGHT基因表达 ,RT- PCR分析 PMBC内L IGHT基因转录表达。采用 PCR产物直接克隆法克隆人全长 L IGHT基因及其胞外区编码基因 ,并对胞外区编码基因进行大肠杆菌表达。结果 :当用 IFN-γ和 PMA刺激 PMBC后 4 8h,可诱导 L IGHT基因的明显表达 ,而 L PS、IL - 2和 TNFα则不能诱导。克隆的人 L IGHT全长基因及 L IGHT胞外区编码基因 ,经过 DNA序列测定证实基因序列与文献报道一致。 L IGHT基因胞外区在大肠杆菌获得一定程度的表达。结论 :本研究对人 L IGHT基因及其胞外区编码基因进行了克隆和表达。

关键词： LIGHT TNF超家族外周血单核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达

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乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.0)SMMU的生物学特征

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1179-1183页

作者：訾晓渊姚玉成熊俊金艳花叶煦亭李建秀刘红朱海英王新民倪文君胡以平余宏宇丛文铭第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科东方肝胆外科医院病理科

目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和... 详细信息

目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和H-E染色的方法分析HBV基因在转基因小鼠中的整合、表达、复制和组织学变化。结果:F1代乙肝转基因小鼠基因组中稳定整合有HBV基因,肝组织中可检测到HBsAg、HBcAg和X蛋白3种病毒蛋白,血清中HB-sAg和HBeAg的表达率分别为19.54％和3.39％,且在血清和肝组织中存在病毒DNA和病毒样颗粒;长期的病毒DNA整合、表达和复制可以引起转基因小鼠肝、肺等组织的病理性损伤。结论:乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O:)SMMU具有基因组中稳定整合病毒DNA、血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征,并具有一定的组织学变化,作为生物医药研究的实验动物模型具有推广应用价值。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠免疫组织化学病理学

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视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1188-1191页

作者：姚玉成訾晓渊李建秀熊俊李文林金艳花苏小平倪文君胡以平李振林安靓杨俊峰罗清礼张文周久模第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第一军医大学组织胚胎学教研室广州510515 大学华西医院眼科四川成都610041

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pm... 详细信息

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pmROP-EGFP表达质粒经Nol I酶切线性化后,用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核,制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建者小鼠,基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传代后,取眼球进行冰冻切片,在荧光显微镜下观察视网膜上GFP的表达。结果:从基因组内扩增出了2.1 kb的小鼠ROP,成功构建了小鼠ROP-GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建者,分别命名为C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论:成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠,它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制,还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。

关键词：转基因小鼠视蛋白基因启动子绿色荧光蛋白

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CNTF在周围神经损伤及再生中的表达和分布

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 605-607页

作者：郑宏良由振东周水淼李兆基路长林严进黄益灯王成海刘葛音第二军医大学长海医院耳鼻咽喉科上海200433 第二军医大学基础医学部神经生物学教研室

目的 :探讨周围神经损伤及修复后神经干睫状神经营养因子 (CNTF)的表达及分布。方法 :以犬喉返神经损伤及修复再生为实验模型 ,采用原位杂交及免疫组织化学技术 ,结合图像分析技术检测 CNTF m RNA及其蛋白反应产物的灰度及面积。结果 ... 详细信息

目的 :探讨周围神经损伤及修复后神经干睫状神经营养因子 (CNTF)的表达及分布。方法 :以犬喉返神经损伤及修复再生为实验模型 ,采用原位杂交及免疫组织化学技术 ,结合图像分析技术检测 CNTF m RNA及其蛋白反应产物的灰度及面积。结果 :正常神经 CNTF位于神经膜细胞中。神经切断后远段神经干 CNTF表达迅速下降 ,6周后消失。随着神经的再生CNTF表达逐渐增加 ,表达产物分布于包绕再生轴突及髓鞘的神经膜细胞质中 ,CNTF蛋白还出现于再生的轴突中。神经再生完成后 ,表达仍明显低于正常状态。近段神经干也出现类似远段的改变。结论 :再生神经 CNTF的表达呈下调型并与轴突再生有关 ;CNTF的重分布为神经再生提供合适的微环境。

关键词： CNTF 周围神经损伤神经再生神经生长因子睫状神经营养因子喉神经声带麻痹

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重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外活性作用的研究

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 261-263页

作者：倪之嘉潘卫王元和戚中田傅宏傅志仁王强第二军医大学长征医院普通外科上海200003 第二军医大学长征医院基础医学部微生物学教研室

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮... 详细信息

目的 :研究表达人内皮细胞抑制素 ( endostatin)的腺病毒载体的体外活性作用。方法 :用重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外转染人结肠癌 SW62 0细胞 ,观察肿瘤细胞生长情况 ,并观察其上清对大鼠肺毛细血管内皮细胞、新生牛主动脉内皮细胞及人脐静脉内皮细胞生长的影响。结果 :MTT法检查证实重组腺病毒对结肠癌细胞生长无抑制 ,锥虫蓝染色证实转染的人结肠癌 SW62 0细胞上清对各种血管内皮细胞的生长均有较强的抑制作用。结论 :重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体体外对各种血管内皮细胞生长均有较强的抑制作用。

关键词：重组人内皮细胞抑制素腺病毒科血管内皮体外活性

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吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 611-613页

作者：俞卫锋杨立群纪筠陶勇缪明永第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :通过观察吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响 ,研究吸入麻醉药肝毒性与线粒体能量代谢的关系。方法 :应用碱性藏红为探针 ,在 3ml的反应体系中分别加入 5、10、2 0、5 0μl/ ml氟烷、恩氟烷、异氟烷及七氟烷 ,用 UV - 30 ... 详细信息

目的 :通过观察吸入麻醉药对离体鼠肝线粒体跨膜电位的影响 ,研究吸入麻醉药肝毒性与线粒体能量代谢的关系。方法 :应用碱性藏红为探针 ,在 3ml的反应体系中分别加入 5、10、2 0、5 0μl/ ml氟烷、恩氟烷、异氟烷及七氟烷 ,用 UV - 30 0 0分光光度计进行双波长 (5 11～ 5 33nm )扫描 ,观察上述 4种药物对 ATP或琥珀酸能化及非能化鼠肝线粒体跨膜电位 (Δψ)的影响。结果 :氟烷与经典的解耦联剂氰化 -对 -三氟甲氧基苯腙相似 ,能明显降低能化及非能化线粒体的跨膜电位 ,而其余 3种药物仅在大剂量时才降低线粒体的跨膜电位。结论 :氟烷具有解耦联作用。氟烷与其他吸入麻醉药在能量代谢上的这种差异是否为它们肝毒性差异的原因值得引起重视。

关键词：麻醉药线粒体跨膜电位影响肝毒性离体肝吸入麻醉

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缺血再灌注损伤对兔心肌线粒体钙稳态的影响

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 186-188页

作者：徐美英马宇王学敏张富军第二军医大学长海医院麻醉科上海200433 基础医学部生化与分子生物学教研室

目的 :观察心肌在高钾停搏液保护下经历缺血再灌注损伤时 ,其线粒体钙稳态的变化。方法 :采用改良 L angendorff离体灌注兔心脏模型 ,用高钾停搏液停跳停止灌注 1h后再灌注 30 m in。电镜观察线粒体的变化 ,分离心肌线粒体并负载钙离子... 详细信息

目的 :观察心肌在高钾停搏液保护下经历缺血再灌注损伤时 ,其线粒体钙稳态的变化。方法 :采用改良 L angendorff离体灌注兔心脏模型 ,用高钾停搏液停跳停止灌注 1h后再灌注 30 m in。电镜观察线粒体的变化 ,分离心肌线粒体并负载钙离子敏感荧光试剂 Fura 2 - AM,测定线粒体基质游离钙浓度以及线粒体在高钙环境中摄钙能力和加入钠离子后的释钙能力。结果 :心肌线粒体基质钙离子浓度明显升高 ,但摄钙和释钙能力基本已恢复正常。电镜下大量线粒体中可见高密度的钙盐沉积 ,少量线粒体肿胀、嵴消失。结论 :在再灌注初期线粒体钙超载一方面是由于生理性的摄钙过程启动 ,但也有病理性的摄钙过程参与 ,30 min以后已没有病理性摄钙过程参与 ,摄钙释钙能力基本正常。

关键词：再灌注损伤线粒体钙稳态影响兔心肌缺血

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