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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 136-139页

作者：王梁华朱玉平蔡清萍娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长征医院普通外科

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失... 详细信息

目的 :分析原核重组表达的人可溶性 TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡 ,并观察凋亡作用与 FHIT基因突变的关系。方法 :观察人可溶性 TRAIL对 2 8株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用 ,RT- PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况。结果 :1～ 10 0 mg/ L的重组人可溶性 TRAIL蛋白即可诱导 19株细胞 (包括人肿瘤细胞株 )如 1990(胰腺导管癌 )、MCF- 7(乳腺癌 )、A 5 4 9(肺癌 )、U 2 5 1(星形胶质瘤 )、Hep G- 2 (肝细胞癌 )、M85 (胃癌 )、CNE- 2 (鼻咽癌 )、Hep- 2(喉癌 )、AT- 2 9(结肠癌 )、3AO (卵巢癌 )和 B16 - MB(黑色素瘤 ) ,髓性恶性细胞如 Jurkat、K5 6 2、U937、6 T- CEM,鼠源性 S180(肉瘤 )、Ehrlich(腹水瘤 )和 L ewis(肺癌 ) ,以及人内皮细胞株 ECV 30 4等发生凋亡 ;而其他 9株细胞 ,如 SK- N - SH(人神经母细胞瘤 )、8898(人胰腺导管癌 )、He L a(人宫颈癌 )、SMMU 772 1(人肝癌 )、HL 6 0 (人白血病 )、COS- 7(猴肾 )、人成纤维细胞、L 92 9(鼠成纤维细胞 )、Wish(人羊膜细胞 )等需大于 10 0 mg/ L的 TRAIL才能使其凋亡 ;观察到上述部分对 TRAIL敏感的人源细胞的 FHIT基因有缺失突变 ,而不敏感的人源细胞 FHIT基因完整。结论 :原核表达的人可溶性 TRAIL 具有明显诱导多种?

关键词： TRAIL 细胞凋亡 FHIT基因基因突变肿瘤细胞

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神经生长因子对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内ATP酶的影响

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 859-859,867页

作者：黄才国魏善建姜华贾瑞波焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国药科大学

缺血缺氧性脑损伤(HIE)在临床上致死率和致残率都很高,是严重威胁新生儿健康的疾病之一,而且病因相当复杂,其中脑内细胞膜酶活性的变化也是造成细胞膜损害的原因之一.神经生长因子(NGF)对损伤神经细胞具有修复作用,对缺血缺氧性脑损伤... 详细信息

缺血缺氧性脑损伤(HIE)在临床上致死率和致残率都很高,是严重威胁新生儿健康的疾病之一,而且病因相当复杂,其中脑内细胞膜酶活性的变化也是造成细胞膜损害的原因之一.神经生长因子(NGF)对损伤神经细胞具有修复作用,对缺血缺氧性脑损伤有一定的治疗作用[1].本文研究NGF对HIE模型大鼠细胞Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的影响.

关键词：神经生长因子缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内 ATP酶实验研究

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胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 153-155,F003页

作者：鲁凯伍陈哲宇侯铁胜傅强曹莉金大地第二军医大学长海医院骨科上海200433 基础医学部神经生物学教研室第一军医大学南方医院脊柱骨病科

目的 :观察外源性胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响。方法 :利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。蛛网膜下腔置管至损伤局部 ,连续 1周给予 GDNF。应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶... 详细信息

目的 :观察外源性胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响。方法 :利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。蛛网膜下腔置管至损伤局部 ,连续 1周给予 GDNF。应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经中丝 (NF)免疫组化活性的变化来评价外源性 GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响。结果 :脊髓损伤后 4周 GDNF治疗组 GFAP表达较对照组明显减少 ,NF标记轴突数显著多于对照组 ,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端 0 .5 cm。结论 :外源性 GDNF局部给药能减少胶质细胞增生 ,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复。

关键词：脊髓损伤胶质细胞源性神经营养因子轴突神经再生皮质脊髓束再生

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人多种组织中线粒体DNA存在13.1kb片段缺失突变

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 221-223页

作者：张燕王学敏蒋蕾沈茜第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室

目的 :在人外周血细胞中筛选到新的线粒体 DNA大片段缺失突变后 ,进一步探讨该缺失在稳定组织内的分布。方法 :以人外周血细胞及人体多种组织 DNA为模板 ,进行 PCR扩增 ,筛选该突变。结果 :在人外周血细胞及多种稳定组织中发现 13.1kb... 详细信息

目的 :在人外周血细胞中筛选到新的线粒体 DNA大片段缺失突变后 ,进一步探讨该缺失在稳定组织内的分布。方法 :以人外周血细胞及人体多种组织 DNA为模板 ,进行 PCR扩增 ,筛选该突变。结果 :在人外周血细胞及多种稳定组织中发现 13.1kb缺失突变的存在。结论 :这种广泛分布于健康人多种组织中的线粒体

关键词： DNA 线粒体基因缺失基因突变人多种组织

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高密度发酵制备重组人可溶性TRAIL

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 132-135页

作者：王梁华朱玉平娄永华周劲松彭玉珍球谊焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 上海恰尔生物技术有限公司

目的 :利用原核重组表达技术 ,完成人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL ,又称凋亡素 2配体 ,Apo- 2 L )的中试。方法 :可溶性 TRAIL编码基因插入改建的 p BV 2 2 0载体 ;在发酵过程中 ,控制溶解氧在 30 %～ 5 0 % ,30℃生长 6... 详细信息

目的 :利用原核重组表达技术 ,完成人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL ,又称凋亡素 2配体 ,Apo- 2 L )的中试。方法 :可溶性 TRAIL编码基因插入改建的 p BV 2 2 0载体 ;在发酵过程中 ,控制溶解氧在 30 %～ 5 0 % ,30℃生长 6 h,4 2℃诱导培养 4 h;菌体上清行金属亲和层析。结果 :发酵液中最终菌体密度 D(6 0 0 )达 8.0 (相当于每升发酵液含 15 g湿菌体 ) ,TRAIL占菌体总蛋白的 4 0 %左右 ,含量超过 0 .6 g/ L。其中 ,所表达的 TRAIL 2 0 %～ 30 %在上清而直接有活性 ,70 %～ 80 %呈包涵体。上清用亲和层析一步使其纯度达 70 %以上 ;包涵体超声破菌后经两次洗涤 ,纯度达到 80 %以上。　结论 :TRAIL

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组蛋白质发酵分批补料重组人可溶性TRAIL

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CNTF对大鼠脊髓损伤后逆行性红核神经元损伤的保护作用

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 598-601,F004页

作者：叶俊丽曹莉崔瑞耀黄爱军阎志勇路长林何成第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433 青岛大学青岛医学院病理生理学教研室青岛266021

目的 :研究睫状神经营养因子 (CNTF)对脊髓损伤后逆行性红核神经元损伤的保护作用和促进肢体功能恢复的作用。方法 :将大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 CNTF组 ,用 Allen改良法撞击致 SD大鼠脊髓 T1 0 损伤 ,经蛛网膜下腔留置导管... 详细信息

目的 :研究睫状神经营养因子 (CNTF)对脊髓损伤后逆行性红核神经元损伤的保护作用和促进肢体功能恢复的作用。方法 :将大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 CNTF组 ,用 Allen改良法撞击致 SD大鼠脊髓 T1 0 损伤 ,经蛛网膜下腔留置导管注射 NS和 CNTF;术后每周进行一次 BBB评分和斜板试验的行为学评分 ;6周时采用辣根过氧化物酶 (HRP)逆行示踪技术标记红核神经元 ,取红核部位脑组织作冰冻切片 ,应用四甲基联苯胺 (TMB)呈色反应显示脊髓损伤后红核神经元存活率 ,并进行图像数据的分析。结果 :(1) CNTF组行为功能评分高于 NS组 ;(2 ) CNTF组 HRP标记红核神经元数目多于对照组。结论 :CNTF可减轻脊髓损伤后的逆行性损伤 ,而对上行运动神经元发挥保护作用 ,从而对肢体功能的恢复起到促进作用。

关键词： CNTF 大鼠脊髓损伤逆行性红核神经元损伤保护作用睫状神经营养因子 HRP

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脑内移植BDNF载体细胞对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后运动机能和行为的影响

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中华物理医学与康复杂志 2002年第1期24卷 10-14页

作者：洪新如曲伸侍坚陈新民全军儿科中心福州总医院儿科福州350025 第二军医大学基础部神经生物学教研室上海第二医科大学基础医学部神经生物学研究室

目的　探讨脑内移植脑源性神经营养因子 (BDNF)载体细胞对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后存活、运动机能和行为的影响。方法　 7d龄新生大鼠一侧颈总动脉结扎联合低氧吸入法制成缺氧缺血性脑损伤模型。在损伤后即刻 ,于单侧皮层内植入构建... 详细信息

目的　探讨脑内移植脑源性神经营养因子 (BDNF)载体细胞对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后存活、运动机能和行为的影响。方法　 7d龄新生大鼠一侧颈总动脉结扎联合低氧吸入法制成缺氧缺血性脑损伤模型。在损伤后即刻 ,于单侧皮层内植入构建的可稳定表达和分泌BDNF的大鼠成肌细胞 ,观察植入 4周后大鼠存活、运动机能和行为的变化。结果　BDNF载体细胞可稳定表达BDNFmRNA ,其分泌上清液可维持PC1 2细胞存活、促进突触生长 ,脑内移植后 42d ,移植组动物死亡率显著降低 (2 8.6 % ,对照值为 57.7% ) ;倾斜临界角度虽仍低于假伤组 ,但显著高于移植不含BDNF载体细胞的对照组 ;开场行为的水平、垂直运动值均显著高于对照组 ,多数时间点上显著低于假伤组。结论　脑内移植可稳定表达和分泌活性BDNF的载体细胞可显著降低新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的死亡率 ,对运动机能和行为的恢复有良好的促进作用。

关键词：新生儿缺血缺氧性脑病脑内移植 BDNF 运动机能行为脑源性神经营养因子脑缺氧脑缺血动物实验

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应用加速器质谱技术检测体外细胞中^(14)C标记的苯并芘-DNA加合物

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 454-455页

作者：游冬青陈杞潘真韩玲蔡建明邹鲁峰孙红芳王海芳刘元方第二军医大学海军医学系放射医学教研室上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室北京大学技术物理系

DNA加合物是亲电化合物与DNA形成共价相联的结合物。在机体中被加合物修饰的DNA若无法修复和被错误修复，就有可能导致一系列细胞生物学行为的改变，并最终导致体细胞突变或恶性变。

关键词：加速器质谱仪 DNA加合物苯并花化学致癌机制体外细胞 ^14C标记

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大鼠坐骨神经切断后GDNF mRNA在其向心端及脊髓表达的变化

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 602-604页

作者：宋海涛贾连顺陈哲宇陈坚刘传云路长林解放军第107医院济南军区创伤骨科中心烟台264002 第二军医大学长征医院骨科基础医学部神经生物学教研室海军医学系军队卫生学教研室

目的 :探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) m RNA在其向心端及脊髓表达的变化及其意义。方法 :在切断 SD大鼠双侧坐骨神经后的不同时间采用半定量 RT- PCR方法 ,观察坐骨神经向心端及 T1 2 ～ L1 段脊髓GDNF m RN... 详细信息

目的 :探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) m RNA在其向心端及脊髓表达的变化及其意义。方法 :在切断 SD大鼠双侧坐骨神经后的不同时间采用半定量 RT- PCR方法 ,观察坐骨神经向心端及 T1 2 ～ L1 段脊髓GDNF m RNA表达的变化。结果 :坐骨神经切断前 ,GDNF m RNA在坐骨神经及 T1 2 ～ L1 段脊髓微量表达 ,切断后其向心端及 T1 2 ～ L1 段脊髓表达逐渐减少 ,伤后 1、7、14、2 8d分别减少 10 %、38%、4 5 %、5 2 %及 2 0 %、6 8%、80 %、85 %。结论 :坐骨神经切断后其向心端及 T1 2 ～ L1 脊髓 GDNF m RNA表达减少 ,推测是由于失去靶组织转运 GDNF m RNA所造成 ,为外源性GDNF应用于治疗脊髓损伤提供了实验依据。

关键词：大鼠 GDNF mRNA 向心端胶质细胞源性神经营养因子坐骨神经切断术脊髓损伤运动神经元基因表达

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红细胞膜锚蛋白研究进展

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国外医学（输血及血液学分册） 2002年第3期25卷 198-200页

作者：任绪义张建鹏冯伟华 200433 上海第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

锚蛋白是红细胞膜结构蛋白之一。通过与其它膜结构成分的相互作用而影响细胞结构及功能。锚蛋白对红细胞膜流动性、抗氧化作用以及红细胞的粘附功能具有重要的调控作用。

关键词：锚蛋白红细胞膜带3蛋白研究进展

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