检索结果-内蒙古大学图书馆

伯氏疟原虫氯喹敏感株和抗性株红内期虫体超微结构的比较

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肝脏 2001年第S1期6卷 147-页

作者：陈克强宋关鸿上海第二军医大学基础医学部病原生物学教研室 200433

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基于pMTR1质粒的转基因小鼠突变研究模型的建立

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 537-540页

作者：卢洋黎怀星李建秀傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分... 详细信息

目的 :建立在基因组中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法 :利用分子克隆技术构建 p MTR1质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 5 72只 C5 7BL / 6小鼠受精卵 ,再将它们分别移入 45只受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 44只 ,存活 35只 ,采用 PCR,PCR- Southern和基因组 Southern杂交三级筛选法鉴定子代小鼠。以 4只经基因组 Southern杂交证实在基因组 DNA中整合有多拷贝结构完整的 p MTR1质粒的小鼠作Founder小鼠 ,进行转基因小鼠的建系工作。对每个 Founder小鼠已有的 F1代及 F2代转基因小鼠的基因组 DNA进行p MTR1质粒回收实验。结果 :从转基因小鼠基因组中可以回收出结构、功能完整的 p MTR1质粒。结论 :(1)建立了在基因组 DNA中整合有 p MTR1质粒的 C5 7BL / 6转基因小鼠家系 ;(2 )

关键词：转基因小鼠基因突变 PMTR1质粒

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睫状神经营养因子对应激引起大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制的研究

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生理科学进展 2000年第2期31卷 131-134页

作者：严进第二军医大学基础医学部神经生物学教研室上海200433

本实验用Nissl染色法、Bielschowsky Gros Lawrentjew染色法、常规透射电镜、行为活动测定、双侧海马微量给药、海马神经元原代培养、活细胞连续照相、全细胞膜片钳记录、细胞内游离Ca2 +浓度测定及P5 3蛋白免疫组化测定等方法 ,观察了... 详细信息

本实验用Nissl染色法、Bielschowsky Gros Lawrentjew染色法、常规透射电镜、行为活动测定、双侧海马微量给药、海马神经元原代培养、活细胞连续照相、全细胞膜片钳记录、细胞内游离Ca2 +浓度测定及P5 3蛋白免疫组化测定等方法 ,观察了睫状神经营养因子 (CNTF)对应激引起动物行为变化和海马神经元形态学变化的影响 ,探讨了CNTF的部分作用机制。结果表明 ,急性应激不引起大鼠海马神经元损伤 ,CNTF不能改善急性应激时的焦虑样行为。但CNTF可显著减轻慢性应激引起的大鼠海马神经元损伤 ,并改善慢性应激时的抑郁样行为。CNTF可能通过早期快速抑制谷氨酸 (Glu)膜电流、胞内游离钙 ( [Ca2 +]i)的升高 ,以及后期核内效应 ,发挥其保护神经元的作用。

关键词：应激睫状神经营养因子海马神经元形态学

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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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国产葛属药用植物叶表面的扫描电镜观察

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第二军医大学学报 2000年第10期21卷 996-998页

作者：曾明郑水庆张汉明叶熙亭陶朝阳苏中武第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

葛根是一味常用中药,其原植物为豆科葛属植物野葛[Pueraria lobata (Willd. )Ohwi]和粉葛(P. thomsonii Benth.).除上述两种植物外,同属的一些植物如食用葛、峨嵋葛、三裂叶葛等在我国部分地区也作葛根使用[1].我们已对葛属植物的花粉[2... 详细信息

葛根是一味常用中药,其原植物为豆科葛属植物野葛[Pueraria lobata (Willd. )Ohwi]和粉葛(P. thomsonii Benth.).除上述两种植物外,同属的一些植物如食用葛、峨嵋葛、三裂叶葛等在我国部分地区也作葛根使用[1].我们已对葛属植物的花粉[2]及花冠表面显微特征[3]进行了研究,而叶片作为植物的最外部分之一,其表皮和毛被特征必将最快地反映外界环境的变化,一些特征已明显处于基因的控制之下[4],从而成为分类和鉴定的有用证据.尤其是随着电镜扫描(SEM)的应用,这些特征更广泛地应用于不同的分类群的区分.本文报道了野葛、粉葛及同属的6个种和1个变种植物叶表面特征的SEM观察结果,以期为更好地识别种、变种,并为该属植物的鉴定和分类提供更多的形态学依据.

关键词：葛属药用植物叶表面扫描电镜形态学

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庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：吴晓兰潘卫戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,... 详细信息

目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,并用原位杂交、限制性酶切及 DNA测序等方法鉴定所建文库的随机性和完整性。结果 :所建肽库的容量为5 .34× 10 4个菌落形成单位 ,滴度为 1.41× 10 1 4 TU/ ml。原位杂交结果证明在 HGV基因组的不同区域均有阳性菌落 ,酶切鉴定和 DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域具有随机性。结论 :所建肽库具有良好的完整性、随机性及实用性 ,为进一步研究奠定了基础。

关键词：噬菌体随机肽展示肽库庚型肝炎 HGV cDNA

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庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

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第二军医大学学报 2000年第1期21卷 16-19页

作者：任浩朱分禄朱诗应宋燕斌戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选... 详细信息

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞，将转染上清再次感染ｓｆ９细胞，以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分析、检测重组蛋白。结果：序列测定证实克隆的基因片段是ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的ＮＳ５基因片段，且阅读框架正确。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在相对分子质量４．１５×１０４处有重组蛋白的表达条带，薄层扫描占总蛋白量的１１．７％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ发现重组蛋白可与ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性患者混合血清发生较强的免疫反应。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５重组蛋白可以用于ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染的检测。

关键词： NS5蛋白庚型肝炎 GBV-C/HGV 基因表达

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庚型肝炎病毒研究现状与展望

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 802-805页

作者：戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(eme... 详细信息

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(emerging infectious disea ses).由于对这类病原微生物本身及其致病机制了解甚少,加之人群缺乏免疫力及有效的防治方法,这类新的病原体常引起严重的传染性疾病,造成巨大的社会影响和经济损失.庚型肝炎病毒(hepatitis G virus,HGV)被认为是这类病原微生物之一.

关键词：庚型肝炎庚型肝炎病毒 HGV 病原微生物

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HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 857-860页

作者：潘卫戚中田贺祥陈秋莉潘欣第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学科研部

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 详细信息

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。

关键词：噬菌体随机展示肽库核心蛋白丙型肝炎 HCV

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人肝脏再生增强因子cDNA的克隆、表达及纯化

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第二军医大学学报 2000年第6期21卷 534-536页

作者：陈世敏蔡在龙毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序... 详细信息

目的 :克隆人肝脏再生增强因子 (h AL R) c DNA,构建重组表达载体并对其诱导表达、纯化。方法 :提取胎儿肝组织总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出 h AL R c DNA,克隆于载体 p GEM- T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体 p GEX- 4T- 3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导表达融合蛋白 GST- h AL R,表达产物通过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析纯化后进行 Throm bin酶切。结果和结论 :构建成融合蛋白 GST- h AL R的重组表达质粒 ,h AL R在大肠杆菌高效表达 ,重组蛋白主要以可溶形式存在于胞质中 ,融合蛋白的分离纯化简单易行。

关键词：肝再生基因表达纯化 cDNA 克隆

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