检索结果-内蒙古大学图书馆

海军军医大学学报 2023年第10期44卷 1205-1211页

作者：谭坚王月帆戴智慧尹昊瓒王嗣杰杨富海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

核旁斑是细胞核内一类重要的亚核体。核旁斑可通过拘留RNA或蛋白以及与miRNA相互作用等方式调控基因的表达,从而在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用,研究核旁斑在肿瘤细胞中的生物学结构及作用对肿瘤的诊疗具有重要意义。目前关于核旁... 详细信息

核旁斑是细胞核内一类重要的亚核体。核旁斑可通过拘留RNA或蛋白以及与miRNA相互作用等方式调控基因的表达,从而在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用,研究核旁斑在肿瘤细胞中的生物学结构及作用对肿瘤的诊疗具有重要意义。目前关于核旁斑在肿瘤细胞中的结构、功能及临床意义尚未完全明确。本文综述了肿瘤细胞核旁斑的组成、结构、装配及其在肿瘤发生、发展过程的作用机制和临床意义,旨在为肿瘤的诊断、治疗及预后提供新的研究方向与线索。

关键词：核旁斑肿瘤核富集常染色体转录本1 结构功能

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泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展

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第二军医大学学报 2021年第1期42卷 14-20页

作者：刘梦朱怡卿黄金凤肖邦陈美婷王芳海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

目的筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用。方法构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-P... 详细信息

目的筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用。方法构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-PAGE和质谱对底物蛋白进行鉴定。在人肝癌细胞系Huh-7中过表达UBE2C,通过qRT-PCR、蛋白质印迹分析和细胞免疫荧光实验检测UBE2C过表达对其底物蛋白表达的影响,利用细胞核质分离结合蛋白质印迹分析及TOP flash/FOP flash荧光素酶报告基因实验检测UBE2C过表达对Wnt信号通路的影响,并进一步通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析验证UBE2C过表达对Wnt信号通路下游基因表达的影响。结果Halotag共沉淀产物经SDS-PAGE和银染后所获得差异条带的质谱鉴定结果显示,β-微管蛋白是UBE2C结合的底物蛋白。与对照组相比,过表达UBE2C降低了Huh-7细胞中β-微管蛋白在蛋白水平的表达(P<0.01),但对其在mRNA水平的表达没有影响(P>0.05)。同时,过表达UBE2C促进了β-联蛋白入核(P<0.05),提高了TOP flash/FOP flash荧光素酶活性(P<0.01),增强了Wnt信号通路下游基因JNK、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶7的表达(P均<0.05)。结论UBE2C通过特异性结合β-微管蛋白降低肝癌细胞中β-微管蛋白水平,从而提高Wnt信号通路活性,促进其下游基因表达,进而参与调控肝细胞癌的进展。

关键词：肝细胞癌泛素结合酶E2C β-微管蛋白 Wnt信号通路

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DNA疫苗微球给药系统的研究进展

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中国药学杂志 2003年第11期38卷 828-831页

作者：刘善奎高申钟延强孙树汉第二军医大学药学院药剂学教研室上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的　介绍以生物降解材料制备DNA疫苗微球给药系统 (microspheresdrugdeliverysystem ,以下简称MDDS)的研究进展 ,为此领域的研究提供参考。方法　根据国内外文献 ,较全面地综述了DNA疫苗MDDS的优点 ,载体材料的种类、规格及其优缺点 ... 详细信息

目的　介绍以生物降解材料制备DNA疫苗微球给药系统 (microspheresdrugdeliverysystem ,以下简称MDDS)的研究进展 ,为此领域的研究提供参考。方法　根据国内外文献 ,较全面地综述了DNA疫苗MDDS的优点 ,载体材料的种类、规格及其优缺点 ,微球的制备方法 ,微球的理化特性要求 ,给药剂型和给药途径 ,体内外免疫效果的评价 ,药动学、组织器官分布和体内转运机制的研究以及目前MDDS研究中需解决的问题。结果与结论　与常规冻干粉针剂相比 ,DNA疫苗MDDS的研究结果显示出明显的优势 ,必将会为DNA疫苗的临床应用提供一个免疫效果好和安全性能高的给药系统。

关键词： DNA疫苗微球给药系统研究进展载体材料种类规格

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胎肝特异性癌胚RNA——AK003710的筛选及功能研究

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第二军医大学学报 2015年第3期36卷 233-240页

作者：王少冰孙树汉王芳第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中... 详细信息

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中对候选lncRNA进行表达水平检测,综合芯片分析及实时定量PCR结果,选择表达差异最明显的lncRNA行进一步研究。首先在胎肝和肝再生模型中验证该lncRNA的表达,然后利用siRNA技术干扰该lncRNA,再通过EdU标记技术和Transwell实验分别检测细胞的增殖能力和侵袭能力。结果生物信息学分析筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的7条lncRNA,其中3条在小鼠肝癌组织中较正常肝组织高表达,3条表达无差异,1条无表达;高表达的3条lncRNA中,lncRNA-AK003710在小鼠肝发育和肝再生芯片中的差异表达倍数最高,可作为进一步研究对象。进一步验证显示lncRNA-AK003710在胎肝及多种肝损伤修复模型中表达上调;功能实验表明对lncRNA-AK003710靶向干扰后能降低小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖和侵袭能力。结论 lncRNA-A003710在胎肝、再生肝组织及肝癌组织中均高表达,是胎肝特异性癌胚RNA,可调控肝癌细胞的增殖及侵袭过程,有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

关键词：长链非编码RNA 肝发育肝再生肝损伤肝肿瘤

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姜黄素诱导人肝癌细胞系Huh7自噬和凋亡

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第二军医大学学报 2019年第1期40卷 38-42页

作者：尹煜鹏孙树汉海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

目的探讨姜黄素诱导人肝癌细胞Huh7自噬和凋亡的作用,以及抑制自噬对姜黄素诱导凋亡的影响。方法将姜黄素(5、10、20、40μmol/L)加入人肝癌细胞系Huh7的培养液中,用CCK-8检测细胞增殖水平变化。Huh7细胞用5～40μmol/L姜黄素培养48 h,... 详细信息

目的探讨姜黄素诱导人肝癌细胞Huh7自噬和凋亡的作用,以及抑制自噬对姜黄素诱导凋亡的影响。方法将姜黄素(5、10、20、40μmol/L)加入人肝癌细胞系Huh7的培养液中,用CCK-8检测细胞增殖水平变化。Huh7细胞用5～40μmol/L姜黄素培养48 h,通过蛋白质印迹法检测自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值,免疫荧光法检测自噬小体的形成,评估Huh7细胞自噬水平的变化。通过流式细胞术检测Huh7细胞凋亡情况。加入5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-MA)和20μmol/L姜黄素培养Huh7细胞,检测Huh7细胞凋亡水平和自噬水平的变化。结果 CCK-8检测显示姜黄素能抑制Huh7细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),且细胞凋亡率随着姜黄素浓度的升高而上升;蛋白质印迹检测显示加入姜黄素后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上升(P<0.05,P<0.01),免疫荧光检测显示加入20μmol/L姜黄素后自噬小体增多。与单独使用20μmol/L姜黄素培养的Huh7细胞相比,姜黄素联用3-MA培养的Huh7细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值下降(P<0.01),自噬小体减少。流式细胞术检测发现5～40μmol/L姜黄素促进了Huh7细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),而联用3-MA后与单独使用20μmol/L姜黄素培养相比引起的Huh7细胞凋亡减少(P<0.05)。结论姜黄素能诱导Huh7细胞凋亡、抑制细胞增殖并促进细胞自噬,抑制自噬能减弱姜黄素对Huh7细胞的诱导凋亡效应。

关键词：肝细胞癌姜黄素自噬细胞凋亡

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一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白——Annexin32对血凝及血栓形成的影响

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中国科学（C辑） 2002年第2期32卷 172-176页

作者：张毅陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成... 详细信息

通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响,对其主要药效学进行了研究,并与普通肝素进行了比较.兔、大鼠静脉给药,检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）、体外血栓形成和大鼠体内血栓形成的变化.结果显示,按1mg/kg静脉注射Annexin32后,KPTT明显延长（P<0.01）,但小于肝素延长幅度,体外血栓形成仪测定显示血栓长度、重量均明显减少（P<0.01）,大鼠体内血栓重量明显降低（P<0.01）,提示Annexin32具有抗血栓形成的功能,并有对凝血系统影响小的特征.

关键词：钙依赖性磷脂结合蛋白 Annexin32 血凝时间血栓形成药效学生理功能凝血指标溶栓药物

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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1090-1091,I002页

作者：孙树汉郭瀛军陈蕊雯杨桦第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 详细信息

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象。

关键词：核酸疫苗囊尾蚴细胞凋亡 pcDNA3-γcC1

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地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 902-903页

作者：贺艳施柯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA... 详细信息

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

关键词：地高辛标记 DNA探针核酸疫苗宿主菌基因组 DNA含量乙肝 DNA疫苗制品

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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pM CLacⅠ/Neo质粒的构建和基因突变研究的新策略

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第二军医大学学报 1999年第8期20卷 509-512页

作者：卢洋黎怀星傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体。方法和结果：设计并构建一种具两个ｌａｃⅠ突变靶基因的突变研究载体：ｐＭＣＬａｃⅠ／Ｎｅｏ质粒。在该质粒中，一个ｌａｃⅠ靶基因受 ... 详细信息

目的：构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体。方法和结果：设计并构建一种具两个ｌａｃⅠ突变靶基因的突变研究载体：ｐＭＣＬａｃⅠ／Ｎｅｏ质粒。在该质粒中，一个ｌａｃⅠ靶基因受ＣＭＶ启动子的驱动而使其在人和哺乳动物细胞内能表达，而另一个ｌａｃⅠ靶基因则不能表达。将所获得的ｐＭＣＬａｃⅠ／Ｎｅｏ质粒经酶切鉴定后，再进行如下功能鉴定：一是分析两个ｌａｃⅠ靶基因在大肠杆菌细胞内的功能状态，结果显示这两个ｌａｃⅠ基因在ＤＨ５α宿主菌内功能正常；二是将其导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞内，分析两个靶基因是否能模拟哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。结果表明其中一个ｌａｃⅠ靶基因在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中处于转录表达状态。结论：本研究构建了一种新型的突变研究载体，位于该载体上的两个ｌａｃⅠ靶基因能模拟人和哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。

关键词：基因突变 lacⅠ基因质粒 DNA损伤沉默基因

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