检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第8期24卷 902-903页

作者：贺艳施柯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA... 详细信息

将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。

关键词：地高辛标记 DNA探针核酸疫苗宿主菌基因组 DNA含量乙肝 DNA疫苗制品

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SARS相关冠状病毒S1融合蛋白的原核表达与纯化

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 704-706页

作者：张术王开宇郭瀛军黄力陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序... 详细信息

目的 :克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 (SARS- Co V) S1蛋白编码 DNA,构建原核表达质粒 p GEX- 5 T/ S1,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增合成 S1片段 ,并克隆入载体中 ,经双酶切鉴定和测序后把S1序列定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T的多克隆位点 ,转化大肠杆菌 K80 2 ,将纯化后的融合蛋白用于 SARS- Co V抗体阳性血清的检测。结果 :GST- S1融合蛋白以可溶形式表达 ,纯化后的蛋白用 EL ISA法检测 ,结果与对照相符。结论 :成功诱导原核表达并纯化出融合蛋白 S1,为将其应用于 SARS- Co

关键词：严重急性呼吸综合征相关冠状病毒 S1融合蛋白原核表达纯化 SARS

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口蹄疫病毒融合表位基因在pET原核系统的高表达及产物的纯化

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第二军医大学学报 2003年第8期24卷 904-905页

作者：陈祖欢张洪英郭瀛军林懿朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

构建口蹄疫融合表位基因 - SG表达载体 p ET- SG,转化重组子与 K80 2 ,新鲜过夜菌以 2 %接种量接种 2 YT培养液 ,37℃培养 2 h后用 IPTG诱导 ,每隔 1h取样 ,共 8h。根据 SDS- PAGE结果 ,口蹄疫融合表位基因 - SG在 p ET原核表达系统可... 详细信息

构建口蹄疫融合表位基因 - SG表达载体 p ET- SG,转化重组子与 K80 2 ,新鲜过夜菌以 2 %接种量接种 2 YT培养液 ,37℃培养 2 h后用 IPTG诱导 ,每隔 1h取样 ,共 8h。根据 SDS- PAGE结果 ,口蹄疫融合表位基因 - SG在 p ET原核表达系统可获得较高表达 ,用 IPTG诱导 4 h蛋白表达量最高 ,用 Ni+柱亲和层析可得到较纯蛋白。

关键词：口蹄疫病毒融合表位基因 pET原核系统基因表达纯化

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结核杆菌保护性抗原-遍在蛋白质系统的建立

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 61-63页

作者：王庆敏胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过... 详细信息

目的 :将结核杆菌 4种保护性抗原基因与小鼠遍在蛋白质 (泛素 )基因融合 ,建立抗原 -遍在蛋白质系统。方法 :通过RT- PCR技术从小鼠睾丸组织中克隆遍在蛋白质 c DNA,同时培养结核杆菌并从基因组中克隆出 4种保护性抗原编码区 ,然后通过柔性接头将遍在蛋白质与 4种抗原的基因分别融合在一起 ,并插入到 p VAX质粒中。结果 :扩增出来的 4种抗原基因大小分别约为 0 .3、0 .7、1.0、1.6 5 kb,遍在蛋白质 PCR产物约为 0 .2 kb,均与 Gen Bank中登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果显示融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序显示抗原基因和遍在蛋白质基因均为所需基因 ,柔性接头序列也完全正确。结论 :成功地构建了中国株结核杆菌的 4种保护性抗原基因 -遍在蛋白质融合系统。

关键词：结核杆菌遍在蛋白质 DNA疫苗结核病

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乙肝DNA疫苗pVAX-PS对树鼩的免疫保护作用

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1102-1104页

作者：周凤娟胡振林戴建新施柯陈蕊雯林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗... 详细信息

目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗,从股四头肌接种免疫树(鼠句)。免疫接种方式为肌注2次,间隔2周。用ELISA法分析DNA免疫诱导的抗体水平及阳转率。DNA免疫后部分树(鼠句)用乙肝患者(HBsA+,HBeAg+,HBcAb+)血清进行病毒攻击实验,通过检测乙肝感染的备种血清学指标及肝组织病理的变化来评价DNA疫苗的免疫保护作用。结果:DNA疫苗免疫2周后开始检出HBsAB,6周后达到峰值,8周后所有免疫接种树(鼠句)抗体阳转;与阴性对照组相比,DNA疫苗免疫使乙肝病毒攻击所致的各项血清学指标阳转率明显降低,肝脏病理性损伤明显减轻。结论:乙肝DNA疫苗pVAX-PS免疫树(鼠句)后诱发明显的体液免疫应答,并对乙肝病毒感染提供有效的保护作用。

关键词：乙型肝炎 DNA疫苗 pVAX—PS 树鼩免疫保护作用免疫应答

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CpG-寡核苷酸对免疫细胞基因表达的影响

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第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1086-1089页

作者：胡振林万斌周凤娟王静王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,... 详细信息

目的:研究CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)对免疫细胞基因表达的影响。方法:用Cy3和Cy5两种荧光分子通过逆转录反应将CpG-ODN刺激前后的单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞的mRNA分别标记成探针,混合后与小鼠基因表达谱芯片杂交,通过扫描、计算机分析,寻找经CpG-ODN刺激后差异表达的基因。结果:CpG-ODN刺激RAW264.7细胞6 h后,2次芯片杂交筛选出重复差异表达的基因119条,其中74条上调,45条下调;这些基因涉及细胞周期、免疫调控、脂肪代谢、泡沫细胞形成、信号转导等过程。结论:CpG-ODN可广泛调控巨噬细胞内多种基因的表达,对相关基因群的进一步研究有助于深入了解CpG-ODN的作用机制。

关键词： CpG-寡核苷酸免疫细胞基因表达巨噬细胞表达谱芯片

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SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 710-712页

作者：黄力郭瀛军张术王开宇陈祖欢朱维佳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免... 详细信息

目的 :构建含有 SARS相关冠状病毒 (severe acute respiratory syndrom e coronavirus,SARS- Co V) M基因片段的核酸疫苗 ,观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法 :将合成的 M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体 p VAX1中 ,免疫小鼠后 ,用 SARS- Co V抗体 EL ISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗 SARS- Co V的病毒特异性抗体水平。结果 :构建了重组核酸疫苗质粒 p VCo- M,免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论 :以 M为抗原基因的 DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体 ,为进一步改进或探索同类 DNA疫苗提供有益启示。

关键词： SARS 冠状病毒M基因片段克隆 DNA疫苗体液免疫严重急性呼吸综合征

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Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白

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第二军医大学学报 2003年第3期24卷 333-334页

作者：张毅郭瀛军王芳高远舰颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC... 详细信息

目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。结果 :FITC标记的AnnexinB1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合 ,使凋亡细胞呈阳性着色 ,能有效检测细胞凋亡。结论 :开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白AnnexinB1,为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。

关键词： AnnexinB1 细胞凋亡检测用蛋白

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人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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后基因组时代的基因工程小鼠

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 117-119页

作者：胡以平曾溢滔第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 上海医学遗传学研究所上海200040

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代... 详细信息

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来 ,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加 ,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而 ,在基因工程小鼠的产生中 ,仍存在着一些问题。它们的解决。

关键词：基因工程小鼠转基因小鼠基因剔除小鼠基因替换小鼠

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