检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第4期23卷 384-386页

作者：周凤娟戴建新胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了... 详细信息

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了重组质粒pcDNA3－HBsAg（S），转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg（S）的存在，PCR扩增也证实HBSAg（S）基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论：获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株，为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。

关键词：乙肝DNA疫苗体外细胞感染 PCR方法乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株

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利用生物信息学鉴定新发现的膜联蛋白亚家族anx32

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 381-383页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海2004331

目的：对抗原基因cC1进行结构分析和初步功能研究。方法：利用网上生物信息学软件进行cC1的一级结构、二级结构分析，同源建模预测三级结构。白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）检测重组蛋白GST－anx32的抗凝血活性。结果：cC1在核酸水平... 详细信息

目的：对抗原基因cC1进行结构分析和初步功能研究。方法：利用网上生物信息学软件进行cC1的一级结构、二级结构分析，同源建模预测三级结构。白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）检测重组蛋白GST－anx32的抗凝血活性。结果：cC1在核酸水平和氨基酸水平均与膜联蛋白基因同源，具有4个同源结构区域，且每一个同源区域均具有膜联蛋白的典型motif“G－X－G－T（38 residues）－D／E”。抗凝血实验表明大肠杆菌表达的谷胱甘肽转移酶－cC1融合蛋白具有很强的抗凝血活性。结论；抗原基因cC1具有膜联蛋白家族的典型特征，但与已知的31个亚家族氨基酸序列的同源性均低于48％，因此是一个新的膜联蛋白亚家族成员，命名为膜联蛋白32（anx32）。为进一步研究其生理功能及核酸疫苗pcDNA3－γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的分子机制打下了基础。

关键词：生物信息学膜联蛋白同源建模抗凝药抗原基因结构分析重组蛋白GST-anx32

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猪囊尾蚴Annexin32的组织定位

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 830-832页

作者：王庆敏胡振林王中川孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白... 详细信息

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白兔 ,获得抗 Annexin32的多克隆抗体 ;最后将新鲜剥离的囊尾蚴进行冰冻切片 ,用免疫组化方法进行定位研究。结果 :表达的 Annexin32蛋白可以被囊虫病病猪血清特异地识别。制备的多克隆抗体的效价为 1∶ 4 0万。免疫组化定位结果显示 ,Annexin32主要在囊壁中表达 ,头节部表达较少 ;囊尾蚴周边肌肉组织也有表达。结论 :Annexin32主要分布于囊尾蚴的囊壁 ,而且它可能是一种分泌性蛋白。

关键词：猪囊尾蚴 Annexin32 组织定位

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膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 378-380页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯杨湘越第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物... 详细信息

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。

关键词：膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶基因拼接基因表达重叠区扩增法大肠杆菌

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Annexin32酵母分泌型表达载体的构建及其高拷贝转化子的快速筛选

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第二军医大学学报 2002年第6期23卷 695-696页

作者：杨湘越武圣明陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

Annexin家族是20世纪70年代末发现的一类钙依赖性磷脂结合蛋白，广泛存在于真核生物细胞内，迄今为止已发现31个annexin亚家族。

关键词： Annexin32 酵母分泌型表达载体构建高拷贝转化子快速筛选毕赤酵母 G418抗性筛选

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钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 374-377页

作者：寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆... 详细信息

目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。

关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白 LipL41基因原核表达基因表达基因克隆

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猪囊尾蚴DNA疫苗在猪组织中的分布

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 833-835页

作者：郭瀛军王庆敏张洪英陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方... 详细信息

目的 :分析猪囊尾蚴 DNA疫苗 pc DNA3- c C1肌肉接种后在猪体内的组织分布。方法 :分别于疫苗接种后 1d、7d、4周、8周 ,提取猪骨髓、肾、肝、脑、性腺、肠系膜淋巴结、脾、胸腺、外周血及肌注部位的肌肉和皮肤的总 DNA,通过 PCR的方法检测疫苗质粒在各组织中的分布及随时间变化的情况。结果 :疫苗接种后的第 1天几乎所有组织中都检测到质粒 ;但随着时间的延续 ,仅在注射部位的肌肉和皮肤中检测到质粒的存在 ,并保持到 8周以上。结论 :肌注疫苗质粒后。

关键词：猪囊尾蚴 DNA疫苗猪组织分布药代动力学

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口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1195-1197页

作者：张洪英郭瀛军陈祖欢林懿孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃... 详细信息

目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃培养2h后用IPTG诱导5h,融合蛋白在2×YT培养液中得到高效表达;全菌中相应蛋白条带与阳性抗体呈阳性反应,阳性反应强弱基本与表位特性及数量有关;得到4个P815细胞阳性克隆,培养上清、细胞膜和细胞质的抗原均为阳性,其中培养上清中浓度较低,细胞膜和细胞质中浓度较高。结论:CAD的融合表位基因在原核和真核系统均得到正确表达;CAD对于表位研究的设计很有帮助。

关键词：口蹄疫病毒表位基因表达真核系统原核系统计算机辅助设计

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大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32的抗凝血活性分析

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 825-827页

作者：张毅杨湘越陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 K... 详细信息

目的 :比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的 Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法 :采用白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)法体外检测凝血指标 ,并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果 :两种表达体系制备的蛋白对 KPTT有明显延长作用 ,且 1m g/ kg的蛋白均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓形成。结论 :两种表达体系制备的

关键词： annexin32 大肠杆菌毕赤酵母基因表达抗凝血活性

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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达

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中国人兽共患病杂志 2002年第3期18卷 31-33,67页

作者：杨湘越孙树汉陈蕊雯郭瀛军颜宏利上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 详细信息

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论　在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原。

关键词： cC1cDNA 克隆表达巴斯德毕赤酵母囊虫病猪囊尾蚴

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