检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2006年第4期27卷 386-390页

作者：宋立华颜宏利蔡东联上海交通大学食品科学与工程系上海201101 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 第二军医大学长海医院营养科上海200433

目的:以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱,从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制。方法:采用小鼠基因表达谱芯片(4 096个基因)对60Co-γ照射后48 h小鼠肝组织基因表达谱进行研究。RT-PCR验证基因芯片结果。结果:与正常... 详细信息

目的:以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱,从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制。方法:采用小鼠基因表达谱芯片(4 096个基因)对60Co-γ照射后48 h小鼠肝组织基因表达谱进行研究。RT-PCR验证基因芯片结果。结果:与正常小鼠相比,辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达,78条下调,46条上调。其中57条基因的功能已知,这些差异表达的基因按功能可分为6类:DNA修复和应激蛋白,细胞骨架,离子通道和转运蛋白,信号转导,免疫蛋白,代谢调控,其中下调基因主要为细胞骨架基因,而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子。RT-PCR结果表明,Hspa5、Rasa3、Nqo1基因的表达和芯片结果一致。结论:辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点。

关键词：辐射肝脏基因表达谱

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小鼠睾丸膜联蛋白A1的克隆、表达及定位

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解剖学杂志 2006年第2期29卷 137-140页

作者：魏玉珍郭瀛军王凯慧高福禄孙树汉福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系福州350004 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 承德医学院组织学与胚胎学教研室承德067000

目的:克隆、表达小鼠睾丸膜联蛋白A1,并研究其在睾丸中的定位。方法:利用RT-PCR技术从小鼠睾丸组织中扩增膜联蛋白A1的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T。以亲和层析法纯化蛋白免疫家兔制备多抗,并做睾丸切片免疫组织化学... 详细信息

目的:克隆、表达小鼠睾丸膜联蛋白A1,并研究其在睾丸中的定位。方法:利用RT-PCR技术从小鼠睾丸组织中扩增膜联蛋白A1的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T。以亲和层析法纯化蛋白免疫家兔制备多抗,并做睾丸切片免疫组织化学检测。结果:重组质粒测序结果表明,插入片段与小鼠膜联蛋白A1的序列完全一致。K802重组菌高效表达出相对分子质量为63 000的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%。多抗效价达1∶102 400,可特异识别重组蛋白。免疫组织化学显示膜联蛋白A1主要分布于精原细胞核、精子细胞顶体帽及精子胞质残余体内。结论:成功克隆、表达了小鼠膜联蛋白A1基因;膜联蛋白A1在睾丸生精细胞中的不同分布预示其可能与生精过程有关。

关键词：膜联蛋白A1 克隆,分子基因表达定位睾丸

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胰十二指肠同源盒基因-1启动子在肝干细胞分化研究中的应用

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癌变．畸变．突变 2006年第5期18卷 337-339页

作者：金彩霞李文林朱吉张南田棣胡以平第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 宁夏医学院医学遗传学与细胞生物学教研室

背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),... 详细信息

背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(Liverepithelialprogenitorcells,LEPCs)观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果获得PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体及报告载体标记的LEPCs。结论pPDX-1EGFP报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。

关键词：肝干细胞胰十二指肠同源盒基因-1启动子转分化绿色荧光蛋白

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Retn基因表达对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其机制探讨

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1067-1071页

作者：李雅慧黎怀星董诗源余超姜雨孙树汉国家食品药品监督管理局保健食品审评中心北京100061 中科院上海生命科学研究院营养科学研究所上海200031 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:观察Resistin蛋白对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响并探讨其引发胰岛素抗性的可能机制。方法:(1)采用放射免疫测定法检测低、正常及高表达Retn基因的3T3-L1脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取水平。(2)采用RT-PCR和实... 详细信息

目的:观察Resistin蛋白对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响并探讨其引发胰岛素抗性的可能机制。方法:(1)采用放射免疫测定法检测低、正常及高表达Retn基因的3T3-L1脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取水平。(2)采用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法测定低、正常和高表达Retn基因的3T3-L1脂肪细胞中几种葡萄糖转运信号蛋白,包括胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、丝/苏氨酸激酶2(AKT-2)、葡萄糖转运子4(GLUT-4)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的表达。结果:(1)在基础状态及胰岛素刺激下,3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取随Retn基因表达的升高而降低。(2)PI-3K和AKT-2两个信号蛋白mRNA的表达随着细胞内Retn基因表达水平的升高而降低;GSK-3β和p38MAPK两个信号蛋白mRNA的表达随着细胞内Retn基因表达水平的升高而升高。结论:(1)Resistin蛋白可以导致脂肪细胞产生胰岛素抗性,其机制可能与胰岛素信号通路中的PI-3K和Ras通路中一些信号蛋白表达的变化有关。

关键词： resistin蛋白 Retn基因胰岛素葡萄糖摄取 3T3-L1细胞

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大豆异黄酮对^(60)Co-γ线照射小鼠肝组织过氧化状态的影响(英文)

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第二军医大学学报 2005年第2期26卷 151-154页

作者：宋立华蔡东联颜宏利陈小莉李雅慧马莉胡同杰第二军医大学长海医院营养科第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的:观察大豆异黄酮对60Co γ射线引起小鼠肝组织过氧化损伤的影响。方法:实验根据体质量将80 只雌性昆明小鼠随机均分为5组,即正常对照、阳性对照(单纯辐照组)及低、中、高剂量大豆异黄酮实验组(50、100、400 mg/kg)。辐照前正常对照... 详细信息

目的:观察大豆异黄酮对60Co γ射线引起小鼠肝组织过氧化损伤的影响。方法:实验根据体质量将80 只雌性昆明小鼠随机均分为5组,即正常对照、阳性对照(单纯辐照组)及低、中、高剂量大豆异黄酮实验组(50、100、400 mg/kg)。辐照前正常对照、阳性对照组及实验组每天分别以溶剂0.5%羧甲基纤维素钠(CMC Na)和不同剂量大豆异黄酮连续灌胃14 d,灌胃至第7天,除正常对照组外,其余各组小鼠均接受4.56 Gy 60Co γ全身性照射1次,照射后继续灌胃2 d及7 d后杀鼠取肝组织作生化分析。结果:照射后第2天100、400 mg/kg大豆异黄酮组及照射后第7 天3 个浓度大豆异黄酮组显著提高肝细胞质过氧化氢酶的活性(P<0.05);照射后第7天100 mg/kg大豆异黄酮组的肝组织谷胱甘肽过氧化物酶活性有显著提高(P<0.05);照射后第2天50 mg/kg大豆异黄酮使肝组织总超氧化物歧化酶活性显著下降(P<0.05),其余各组间无显著差异;照射后第7天100 mg/kg大豆异黄酮使肝组织丙二醛含量下降,与对照组有显著差异(P<0.05),照射后第2 天各照射组肝组织丙二醛含量有一过性升高,但第7天实验组已降至正常水平。结论:大豆异黄酮可提高受照小鼠肝组织的抗氧化能力,但不呈量效关系。

关键词：肝损伤 γ射线自由基抗氧化酶大豆异黄酮

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表达ROG的重组腺相关病毒载体的构建及高滴度病毒的制备

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 445-447页

作者：王桂芳施柯杨丹榕陈吉泉修清玉黎怀星孙树汉第二军医大学长征医院呼吸内科上海200003 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:获得表达小鼠ROG(repressor of GATA 3)基因的重组腺相关病毒载体,制备表达ROG的重组腺相关病毒。方法:设计、合成引物,通过RT PCR法从CTLL 2细胞总RNA中扩增ROG基因,测序确认后,连接于pAAV MCS载体,双酶切、PCR鉴定重组病毒载体;... 详细信息

目的:获得表达小鼠ROG(repressor of GATA 3)基因的重组腺相关病毒载体,制备表达ROG的重组腺相关病毒。方法:设计、合成引物,通过RT PCR法从CTLL 2细胞总RNA中扩增ROG基因,测序确认后,连接于pAAV MCS载体,双酶切、PCR鉴定重组病毒载体;制备高滴度重组腺相关病毒。结果:成功扩增了小鼠ROG基因,构建可表达ROG基因的重组腺相关病毒载体,并获得表达ROG的重组腺相关病毒。结论:本实验获得的小鼠ROG重组腺相关病毒,将为支气管哮喘的基因治疗研究奠定基础。

关键词： repressor of GATA-3 重组腺相关病毒哮喘基因治疗

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核酸疫苗pcDNA3cC1小鼠体内表达的血清学分析

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第二军医大学学报 2005年第8期26卷 957-958页

作者：章亚南何晓文王芳姜磊任丁李德安孙树汉第二军医大学基础医学部医学生物技术和分子遗传研究所医学遗传学教研室上海200433

抗原cC1是从猪囊尾蚴cDNA文库中以囊虫病患者、病猪血清为探针筛选出的抗原蛋白．经免疫学检测证实为具有较高特异性的诊断用抗原。在前期的研究中，我们将全长cC1 cDNA插入真核表达质粒载体pcDNA3，构建了重组质粒pcDNA3-cC1。该DNA疫... 详细信息

抗原cC1是从猪囊尾蚴cDNA文库中以囊虫病患者、病猪血清为探针筛选出的抗原蛋白．经免疫学检测证实为具有较高特异性的诊断用抗原。在前期的研究中，我们将全长cC1 cDNA插入真核表达质粒载体pcDNA3，构建了重组质粒pcDNA3-cC1。该DNA疫苗免疫仔猪后，能有效诱导仔猪的免疫保护效应。本研究选择该DNA疫苗为分析对象，旨在建立一种早期预测DNA疫苗免疫效果的方法。

关键词：疫苗,DNA pcDNA3 cC1 cC1循环抗原

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强直性脊柱炎易感基因的研究进展

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Acta Genetica Sinica 2005年第10期32卷 1108-1114页

作者：陈蕊雯王勇孙树汉段世伟第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室上海200433 上海交通大学Bio-X生命科学研究中心上海200031

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种常见的高度遗传的风湿类疾病。至20世纪70年代以来,越来越多的证据表明HLA-B27是AS最主要的易感基因。然而,全基因组扫描和关联分析等研究发现在HLA以外的区域仍存在AS的易感区域,大量的... 详细信息

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种常见的高度遗传的风湿类疾病。至20世纪70年代以来,越来越多的证据表明HLA-B27是AS最主要的易感基因。然而,全基因组扫描和关联分析等研究发现在HLA以外的区域仍存在AS的易感区域,大量的证据显示在HLA区内外有许多基因与AS的发病有关。文章主要综述了与AS相关的易感基因以及它们的研究现状。

关键词：强直性脊柱炎易感性全基因组扫描关联分析连锁分析

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Annexin B1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

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第二军医大学学报 2005年第12期26卷 1347-1349页

作者：高远舰王俊霞王凯慧张毅颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 河北医科大学实验动物中心石家庄050017

目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚... 详细信息

目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚克隆。结果:用杂交瘤技术,我们获得了1株杂交瘤细胞株,能稳定地分泌高滴度的针对Annexin B1的特异单抗。结论:成功筛选并制备了Annexin B1的特异单抗,为下一步功能研究打下了良好的基础。

关键词：膜联蛋白B1 杂交瘤单克隆抗体

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慢病毒载体在疫苗研究中的应用

慢病毒载体在疫苗研究中的应用

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2005全国第二届核酸疫苗研讨会

作者：郭瀛军郭嘉张术王开宇高远舰何颖孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

人类免疫缺陷病毒-1(HIV—1)来源的慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体,近来在疫苗研制领域也显现出极大的应用潜力。与通常使用的病毒载体比较,具有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点,人们已成功地应用慢病毒... 详细信息

人类免疫缺陷病毒-1(HIV—1)来源的慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体,近来在疫苗研制领域也显现出极大的应用潜力。与通常使用的病毒载体比较,具有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点,人们已成功地应用慢病毒载体感染了神经细胞、肝细胞、造血干细胞、胰岛细胞、肌肉细胞、视网膜色素上皮细胞、气道上皮细胞等。此外,慢病毒载体容纳外源性目的基因的片段大,可以在体内较长期的表达,免疫反应小,安全性较好。慢病毒属于逆转录病毒科,但其基因组结构复杂,除gag、pol和env这3个结构基因外,还包括4个辅助基因,和2个调节基因。目前,多数实验室所采用载体系统的是经改建的三质粒表达系统,包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。包装质粒在CMV启动子的控制下,表达HTV-1复制所需的全部反式激活蛋白,但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu;包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G);转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列,还保留350 bp的gag和RRE。将载体系统分成三个质粒的优点在于使序列重叠的机会大大减少,减少载体重组过程中产生可复制病毒的可能性。共转染293T细胞后,经超速离心浓缩,病毒滴度能达到1091IU/ml。已有报道将慢病毒载体作为靶向树突状细胞(DCs)肿瘤疫苗载体,能诱导有效的CD8+T细胞应答。将慢病毒为载体的疫苗(编码抗原多肽)接种小鼠足垫能在引流淋巴结和脾发现被转导的DCs。同时,携带T细胞抗原的慢病毒载体疫苗能在小鼠体内诱导很强的抗原特异性的CTL应答。对照实验表明,在诱发CTL应答的强度和持续时间方面,体内接种慢病毒载体疫苗优于体外转导DCs策略或是采用肽/佐剂疫苗。慢病毒载体疫苗诱导有效T细胞应答的原因在于慢病毒能在接种部位原位靶向DCs,这些DCs进而迁移至二级淋巴器官。该疫苗系统不涉及人体已有免疫抗性的问题(如腺病毒系统),且使用方便,可作为肿瘤等疫苗研究的载体。

关键词：慢病毒载体疫苗研究

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