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氦氖激光穴位照射后缺氧缺血新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化

中国临床康复 2005年第23期9卷 196-197页

作者：李宛青陈雪梅吴爱群刘伟刘华郑州师范高等专科学校生命科学系河南省郑州市450044 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室河南省郑州市450052 解放军第二军医大学解剖学教研室上海市200433 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所解剖与组织胚胎学系北京市100005 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室河南省郑州市450052

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄... 详细信息

目的:观察缺氧缺血新生大鼠经过氦氖激光穴位照射后脑组织中的活性物质超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的变化情况。方法:实验于2003-03/11在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室完成。选择30只7d龄健康Wistar大鼠,体质量12～15g,雌雄不拘。随机分为3组,即假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组,每组10只。缺氧缺血组与激光穴位照射组动物均制作成缺氧缺血模型,在清醒状态下实施左侧颈总动脉结扎术,术后在室温中恢复1～4h后,置于常压缺氧仓中,通入8mL/L氧气、920mL/L氮气(体积比)的混合气体,2h后将动物取出。缺氧缺血组不加任何治疗。激光穴位照射组于缺氧缺血后第2天,采用氦氖激光照射百会、大椎两穴,功率4mW,光斑直径3mm,每次照射10min,1次/d,同一时间进行,10d为1个疗程,共3个疗程,各疗程间隔2d。百会穴在颅顶正中,大椎穴在C7～T1之间,背部正中。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧。各组大鼠常规饲养34d后,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性,比色法测定丙二醛含量。结果:因缺氧缺血对动物造成了伤害,缺氧缺血组死亡3只,激光穴位照射组死亡2只。进入结果分析,假手术对照组、缺氧缺血组和激光穴位照射组分别为10,7和8只。①大鼠脑组织超氧化物歧化酶活性:缺氧缺血组显著低于假手术对照组和激光穴位照射组[(59.70±4.03)NU/mL,(76.24±2.43)NU/mL,(72.56±5.60)NU/mL,(t=5.03,4.83,P<0.05)]。②大鼠脑组织丙二醛含量:缺氧缺血组显著高于假手术对照组和激光穴位照射组[(267.58±30.55)mmol/L,(99.87±15.48)mmol/L,(135.29±32.76)mmol/L,(t=10.68,8.81,P<0.05)]。结论:氦氖激光穴位照射能提高、诱发缺氧缺血大鼠脑组织中超氧化物歧化酶的生成和活力,降低丙二醛水平。新生大鼠未成熟脑的可塑性较大,如果利用此关键时期进行氦氖激光穴位照射,可能对脑功能的恢复有一定帮助。

关键词：脑缺氧脑缺血氦氖激光超氧化物歧化酶丙二醛

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新型重组膜联蛋白B1的特征及其抗血液凝固活性的比较

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福建医科大学学报 2005年第1期39卷 1-4页

作者：杨湘越兰小鹏朱忠勇颜宏利张毅孙树汉南京军区福州总医院全军医学检验中心(福建医科大学福总临床医学院) 福州350025 第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的　研究毕赤酵母重组膜联蛋白 B1的特征变化 ,比较其和原核表达产物对血细胞凝集与血栓形成过程的影响。　方法　对毕赤酵母重组膜联蛋白 B1行 SDS- PAGE,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,蛋白质 N端氨基酸测序 ,白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT... 详细信息

目的　研究毕赤酵母重组膜联蛋白 B1的特征变化 ,比较其和原核表达产物对血细胞凝集与血栓形成过程的影响。　方法　对毕赤酵母重组膜联蛋白 B1行 SDS- PAGE,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,蛋白质 N端氨基酸测序 ,白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)测定及大鼠下腔静脉血栓形成观察。　结果　毕赤酵母重组膜联蛋白 B1显示两条电泳带 ,其中一条带的相对分子质量比原核表达产物大 ,已被磷酸化 ,等电点较理论值低 ,两条带的 N端均携带了来自载体的 4个氨基酸 ,毕赤酵母重组膜联蛋白 B1和大肠杆菌谷胱甘肽转移酶融合膜联蛋白 B1具有明显的抗凝及抑制血栓形成作用。　结论　虽然毕赤酵母重组膜联蛋白 B1的分子特征较原核产物有了明显变化 ,但其抗凝及抑制血栓功能基本未受影响。

关键词：膜联蛋白原核表达产物血液凝固抗凝部分凝血活酶时间 KPTT 白陶土毕赤酵母等电点电泳

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在中国汉族人群中发现一个强直性脊柱炎新的易感位点

在中国汉族人群中发现一个强直性脊柱炎新的易感位点

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：陈蕊雯段世伟蔡青吴丹林经安吕柯胡建达施柯韩星海陈琦冯国鄞贺林孙树汉第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室上海交通大学Bio-X生命科学研究中心中国科学院营养研究所第二军医大学长海医院风湿免疫科第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室福建医科大学第一附属医院中心实验室第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室福建医科大学协和医院福建省血液研究所第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院风湿免疫科上海交通大学Bio-X生命科学研究中心中国科学院营养研究所上海交通大学Bio-X生命科学研究中心中国科学院营养研究所上海交通大学Bio-X生命科学研究中心中国科学院营养研究所第二军医大学医学生物技术与分子遗传研究所基础医学部医学遗传学教研室

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种常见的、累及中轴关节和肌腱韧带骨附着点的慢性炎症性疾病,在炎症性关节炎中发病率占第二位,被认为是一种复杂性状疾病。目前,AS病因尚不清楚,近年来,随着分子遗传学技术的发展和人类基... 详细信息

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种常见的、累及中轴关节和肌腱韧带骨附着点的慢性炎症性疾病,在炎症性关节炎中发病率占第二位,被认为是一种复杂性状疾病。目前,AS病因尚不清楚,近年来,随着分子遗传学技术的发展和人类基因组研究的深入,对AS的研究已取得很大进展, 发现遗传因素在发病中起了主导作用,所涉及的遗传因素除HLA-B27以外,尚有HLA区域内外的其它易感基因的参与。肿瘤坏死因子基因(TNFα)位于染色体6p21．3的MHC Ⅲ区域,由4个外显子和3个内含子组成,四个独立的全基因组扫描结果提示TNFα位于AS的易感区域。TNFα具有介导炎症和免疫调节作用。相关研究表明:AS病人骶髂关节的滑液中TNFαmRNA升高;cDNA芯片表达谱显示AS病人 TNF-α表达上调,半定量RT-PCR证实TNF-α转录显著高于健康人。所有这些都提示TNFα是AS的候选易感基因。

关键词：强直性脊柱炎 TNF 启动子易感位点中国汉族人群

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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单核苷酸多态性在复杂性状疾病易感基因研究中的应用

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 140-142页

作者：陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下... 详细信息

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下几个方面对 SNPs与复杂性状疾病易感基因研究的策略和方法学问题作了较为详细的综述 :(1 ) SNP特点及其有关网上资源 ;(2 )对直接测序法、单碱基延伸法、Taq Man法、基于实时动态荧光 (动力学 ) PCR的等位基因特异扩增法 ,变性高效液相色谱 (DHPL C)法和 OL A/ PCR的 SNPs基因分型方法的原理、通量和优缺点进行了比较 ;(3)

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病易感基因发病机制基因组学

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融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1205-1207页

作者：贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：膜联蛋白亚家族单链尿激酶融合基因稀有密码子表达利福平

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phP53-luc质粒的构建及其用于检测化学物质遗传毒性的初步分析

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 277-279页

作者：施柯黎怀星吴丹李雅慧孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告... 详细信息

目的 :构建 2个分别由 p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性。方法 :通过 PCR扩增人 p5 3基因启动子片段 ,然后采用重组 DNA技术克隆入 p GL3- BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得 ph P5 3- luc表达质粒。用脂质体转染法将 ph P5 3- luc转染入 NIH3T3细胞并分别用 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)处理 ,最后裂解细胞用 Dual- L uciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达。结果 :构建了 2个分别由p5 3基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒 ,位于这 2个质粒上的荧光素酶报告基因在 NIH3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导 ,其表达比对照的 p GL 3- BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近 2 4 0倍。结论 :基于人 p5

关键词： phP53—luc质粒检测化学物质遗传毒性 p53基因 5—氟尿嘧啶

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抗阿尔茨海默病重组真核表达载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 55-57页

作者：何颖黄力章亚男黎怀星陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,... 详细信息

目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,然后以克隆出的小鼠 Ig G重链区 c DNA为模板 ,用 PCR法克隆出由柔性接头将抗原表位和 Ig G重链区基因融合在一起的序列 ,并插入到 p VAX质粒载体中。结果 :扩增出来的 4种不同组合的抗原表位基因和 Ig G重链区基因融合序列大小分别为 999、1 0 2 0、1 0 0 5、1 0 2 6 bp,均与 Gen Bank上登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果表明融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序亦显示抗原表位基因和 Ig G重链区基因为所需基因 ,接头序列也完全正确。结论 :成功构建了抗阿尔茨海默病的 4种表位基因 - Ig G重链区融合表达的重组质粒。

关键词：阿尔茨海默病重组真核表达载体抗原基因序列基因表达

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CpG-寡核苷酸对巨噬泡沫细胞形成相关基因表达的调控作用

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 458-459页

作者：万斌胡振林周凤娟孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片... 详细信息

CpG-寡核苷酸(CpG-ODN)具有直接激活巨噬细胞的作用．但其是否影响巨噬泡沫细胞的形成未见报道。我们在利用基因表达谱芯片研究CpG-ODN对免疫细胞基因表达谱影响的过程中发现3条与泡沫细胞形成相关的基因表达受CpG-ODN调控。为确证芯片杂交的结果．我们采用RT—PCR技术对相关基因的表达作了进一步研究。

关键词： CpG-寡核苷酸巨噬泡沫细胞形成相关基因表达调控作用 RT—PCR技术

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Annexin B1分子结构、Ca^(2+)结合位点与进化的分析

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1078-1081页

作者：王凯慧郭瀛军高远舰王开宇颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :An... 详细信息

目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。结果 :Annexin B1包含 4个序列和结构高度相似的结构域 ,含有 8个 Ca2 + 结合位点 ,二级结构显示蛋白主要由 α螺旋结构组成 ,具有寄生生物所特有的氨基酸残基。在物种进化上 ,Annexin B1和节肢动物为 1支 ,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为 1支 ,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为 1支。另外 ,Annexin B1与 Annexin A1在进化上有较强的亲缘关系 ,结构和功能上 An-nexin A1和 Annexin A5相似。结论 :Annexin B1具有膜联蛋白的结构特征 ,含有抗凝血、参与细胞凋亡、炎性反应、信号转导和细胞分化等细胞生理功能的氨基酸结构域和决定种属特异性的氨基酸序列 ,在进化上同源于 Annexin A1。

关键词： Annexin B1 结构功能进化

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