检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2004年第1期25卷 44-46页

作者：王芳张毅颜宏利高远舰刘凡贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1... 详细信息

目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin

关键词： Annexin B1 磷脂酰丝氨酸结合活性血小板活化细胞凋亡

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膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 41-43页

作者：颜宏利贺燕刘凡杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以... 详细信息

目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以亲合层析法纯化表达的融合蛋白 ,用 KPTT法验证抗凝血活性。结果 :凝胶电泳显示 PCR扩增产物的长度为 978bp,重组质粒测序结果表明 ,插入片段与人膜联蛋白 A5的序列完全一致。在 IPTG诱导下 ,K80 2重组菌高效表达出相对分子质量为 5 80 0 0的融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 2 6 %。纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。结论 :成功克隆人膜联蛋白

关键词：膜联蛋白A5 cDNA 克隆大肠杆菌基因表达

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DNA疫苗海藻酸钠微球的制备及体外释药

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 58-60页

作者：刘善奎高申钟延强张洪英孙树汉第二军医大学药学院药剂学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的 :研制 DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。方法 :以海藻酸钠为载体 ,采用 W/ O乳化 -离子交联法制备 DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及影响因素。结果 :... 详细信息

目的 :研制 DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。方法 :以海藻酸钠为载体 ,采用 W/ O乳化 -离子交联法制备 DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及影响因素。结果 :微球球形圆整 ,分散性好 ,平均粒径为 (1 2 .0 3± 6 .9) μm,载药量可达 5 % ,包封率为 5 6 .0 % ;微球的体外释放速率与载药量呈正相关 ,与壳聚糖的交联固化度呈负相关。结论 :海藻酸钠可以作为 DNA疫苗微球的可生物降解辅料 ;乳化离子交联法的制备工艺简便 ,有利于 DNA疫苗结构和功能的稳定性 ;海藻酸钠微球是

关键词： DNA疫苗海藻酸钠微球制备体外释药

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BCG-DNA对哮喘患者外周血单个核细胞IFN-γ和IL-4产生的作用

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第二军医大学学报 2004年第7期25卷 718-720页

作者：商艳胡振林李强施柯刘忠令孙树汉第二军医大学长海医院呼吸内科上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室

目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- ... 详细信息

目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- PCR检测 PBMC IFN-γ m RNA及 IL - 4 m RNA的表达量 ,并与空白对照组相比较。结果 :地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的 IFN-γ m RNA和蛋白、IL - 4 m RNA和蛋白均有抑制作用 ;BCG- DNA抑制哮喘患者 PBMC IL - 4 m RNA和蛋白的分泌 ,而促进 IFN -γ m RNA和蛋白的分泌 ,与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1 ) ,且在体外对 PBMC无毒性。结论 :BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调 IL - 4表达的作用 ,而且还具有地塞米松所没有的诱导 IFN -γ表达的作用 ,利于纠正哮喘患者体内存在的 Th1 / Th2比例失衡状态。

关键词： BCG-DNA 哮喘外周血单个核细胞 IFN-r IL-4

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建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究

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第二军医大学学报 2004年第8期25卷 892-894页

作者：李雅慧黎怀星吴丹蔡东联孙树汉长海医院营养科第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿... 详细信息

目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平。结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系。结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础。

关键词： Resistin蛋白 Retn基因基因表达 3T3-L1细胞系

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口蹄疫DNA疫苗海藻酸钠微球的制备及体外释放的研究

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药学服务与研究 2004年第2期4卷 107-110页

作者：刘善奎钟延强王芳孙树汉高申第二军医大学药学院药剂学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其... 详细信息

目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其影响因素。结果 :微球球形圆整 ,分散性好 ,平均粒径为 11.9μm ,载药量为 5 % ,产率为 5 3.2 %。微球的体外释放速率受载药量影响较小 ,而壳聚糖的交联固化度增高 ,微球的体外释放速率变慢。结论 :以生物降解材料海藻酸钠、壳聚糖 ,用喷雾干燥法制备DNA疫苗微球 ,不需要超声和有机溶剂 ,因而有利于DNA疫苗结构和功能的稳定性 ;工艺简便 ,易于工业化生产。

关键词：口蹄疫 DNA疫苗海藻酸钠微球喷雾干燥体外释药

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小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 136-139页

作者：李雅慧黎怀星吴丹施柯蔡东联孙树汉长海医院营养科上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Sil... 详细信息

目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Silencer EM 1 .0 - N eo载体 ;(2 )用电穿孔转染和 G4 1 8筛选等方法建立能稳定表达相应 si RNAs的一组 3T3- L1细胞克隆 ;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞 ,并用 RT- PCR分析这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。结果 :设计并构建了 4个小鼠Retn基因特异性的 si RNAs表达质粒 ,并证明其中的 2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的 si RNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。结论 :本研究设计并构建出的小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs表达载体 ,所表达的 si R-NAs具有较强的 RNA干涉功能 ,为

关键词：小鼠 Retn基因 siRNAs 设计载体基因表达脂肪细胞

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利用荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 203-206页

作者：陆一鸣李彦舫白杰英颜宏利贺艳孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 解放军军需大学生物学教研室长春130062

目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL ... 详细信息

目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL AST同源性分析结果表明 ,1 3个与已知基因序列有同源性 ,1 9个为未知 ESTs。其类型分别为 :诱导表达型 ,2 2个 ;增强表达型 ,7个 ;抑制表达型 ,3个。结论 :通过荧光 m RNA差异显示技术获得了短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。

关键词：荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因 ESTs 基因表达

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结核杆菌抗原MPT64基因在大肠杆菌中的表达及纯化

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第二军医大学学报 2004年第10期25卷 1146-1147页

作者：王庆敏胡振林周凤娟殷明章建程孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 上海海军医学研究所舰艇卫生研究室上海200433

近几年来,结核病的发病有上升的趋势,全世界每年约有300万人死于结核病,800万人患结核病[1].尤其是多重耐药菌株的出现及与艾滋病共同感染更加重了结核病对人类健康的危害.

关键词：结核分枝杆菌 MPT64抗原表达纯化

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卡介菌基因组 DNA和卡介菌多糖核酸免疫调控活性的比较(英文)

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 37-40页

作者：王静胡振林周凤娟万斌何晓文凌亦凌孙树汉河北医科大学病理生理学教研室石家庄050017 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :比较研究卡介菌 (Mycobacterium bovis Bacillus Calm ette- Guérin,BCG)基因组 DNA(BCG- DNA)和卡介菌多糖核酸 (BCG- PSN)的免疫调控活性。方法 :制备高纯度的 BCG- DNA,小鼠脾细胞 (splenocyte)和人外周血单个核细胞 (pe... 详细信息

目的 :比较研究卡介菌 (Mycobacterium bovis Bacillus Calm ette- Guérin,BCG)基因组 DNA(BCG- DNA)和卡介菌多糖核酸 (BCG- PSN)的免疫调控活性。方法 :制备高纯度的 BCG- DNA,小鼠脾细胞 (splenocyte)和人外周血单个核细胞 (pe-ripheral blood m ononuclear cell,PBMC)分别与 BCG- DNA和 BCG- PSN共同培养 72 h,采用 EL ISA方法检测细胞培养上清中 IFN -γ的水平。结果 :所制备的 BCG- DNA纯度较高 ,DNA含量达 95 .3%。琼脂糖电泳显示 :BCG- DNA片断大小集中于2 0 0～ 2 5 0 bp。EL ISA结果表明 BCG- DNA与 BCG- PSN均可显著激活小鼠脾细胞和人外周血单个核细胞 ,有效诱导 IFN-γ的产生 (P<0 .0 1 )。当浓度达 1 0μg/ m l以上时 ,BCG- DNA免疫调控作用优于 BCG- PSN(P<0 .0 1 )。结论 :BCG- DNA可显著诱导 Th1型细胞因子 IFN-γ的产生。

关键词：卡介菌基因组 DNA 多糖核酸免疫调控活性干扰素γ

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