检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2009年第7期30卷 825-829页

作者：章亚南王芳杨富殷一旋张玲孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZ... 详细信息

目的:利用稳定表达人miR-122前体的表达载体,转染低表达miR-122的人肝癌细胞系HepG2细胞,获得过量表达miR-122的稳定转染细胞系,探讨miR-122对肝脏细胞脂代谢的影响及其机制。方法:对已构建完成的表达质粒pEZX-hsa-mir-122和对照质粒pEZX-mir-control进行酶切鉴定,对酶切正确的克隆进行DNA测序,测序正确的克隆应用脂质体试剂转染,绿色荧光蛋白表达监测转染效率,应用嘌呤霉素筛选稳定转染细胞系,实时定量PCR在RNA水平鉴定miR-122的表达,蛋白质印迹法从靶分子水平验证miR-122的抑制功能,尼罗红染色观察细胞内脂质。结果:pEZX-hsa-mir-122质粒成功转染HepG2细胞,质粒携带的miR-122前体序列整合到细胞基因组中,获得过量表达miR-122的HepG2细胞株,细胞内成熟体miR-122可抑制靶基因的翻译,细胞内脂质明显增加。结论:人miR-122前体序列可整合在HepG2细胞基因组中,过量表达miR-122的HepG2细胞出现脂质代谢异常。

关键词：人miR-122 稳定转染脂代谢嘌呤霉素 HepG2细胞

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慢性乙肝患者外周血microRNAs的表达变化

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第二军医大学学报 2010年第12期31卷 1381-1383页

作者：贾音张毅费明钰孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

microRNAs(mi RNAs)是大小约21－23个碱基的非编码单链小分子RNA,通过与靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使mRNA降解或抑制靶mRNA翻译。mi RNAs广泛参与了生物体多种生理和病理过程,包括细胞增殖、凋亡... 详细信息

microRNAs(mi RNAs)是大小约21－23个碱基的非编码单链小分子RNA,通过与靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的不完全碱基配对发挥基因调控作用,使mRNA降解或抑制靶mRNA翻译。mi RNAs广泛参与了生物体多种生理和病理过程,包括细胞增殖、凋亡、应激反应和肿瘤生成等。最近有报道指出随着一些疾病的发生发展,外周血循环中的mi RNAs表达量也有显著变化。我国是乙型肝炎高发区,目前关于mi RNAs在乙型肝炎中的表达变化尚不清楚。[第一段]

关键词： microRNAs 血浆慢性乙型肝炎

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粒状头样2(GRHL2)与肿瘤

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第二军医大学学报 2013年第11期34卷 1243-1247页

作者：唐冠楠颜宏利王玉招孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中... 详细信息

粒状头样2(GRHL2)作为果蝇GRH(grainyhead)基因在哺乳动物中的同源基因之一,不仅参与调控胚胎发育、表皮屏障形成、表皮损伤修复以及中枢神经系统的发育等诸多生命活动过程,而且在乳腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。GRHL2在肝癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌等肿瘤中表达升高,促进肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡;而在上皮-间质转化(EMT)相关的乳腺癌中则下调表达,促进EMT的发生。GRHL2在肿瘤细胞中作用机制复杂而多样,既包括死亡受体相关的凋亡作用,人端粒反转录酶(hTERT)的活化,也涉及到EMT的发生、失巢凋亡敏感性增加。随着对GRHL2研究的深入,将有望为恶性肿瘤的临床诊断和治疗开辟新的方向。

关键词：粒状头样2 肿瘤上皮-间质转化

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膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

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第二军医大学学报 2015年第4期36卷 378-382页

作者：王玉招刘音郭瀛军孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及... 详细信息

目的分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制。方法通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响。采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达。胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点。肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P<0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低。下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P<0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高。结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控。

关键词：膜联蛋白A7 肝细胞癌胰岛素样生长因子结合蛋白2 细胞增殖

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神经特异性基因表达的分子基础

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中华医学遗传学杂志 2001年第2期18卷 143-145页

作者：朱海英傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

哺乳动物中枢神经系统是非常复杂的异质性器官。关于神经特异性基因表达的调控的分子机理一直受到人们的关注。作者就近年来该研究领域取得的一些进展和成果做一综述。

关键词：神经特异性基因表达调控顺式作用元件反式转录因子基因表达

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小鼠p35^(nck5a)基因5′侧翼非编码区基因表达调控作用研究

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中华医学遗传学杂志 2001年第4期18卷 251-254页

作者：朱海英周常文傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的　探讨决定 Alzheimer's病 (AD)的相关基因 p35 nck5 a神经特异性表达的分子机理。方法通过构建荧光素酶表达载体 ,利用原代培养神经细胞进行瞬时表达实验寻找指导神经特异性表达的顺式作用元件 ,并通过引物延伸实验寻找转录起... 详细信息

目的　探讨决定 Alzheimer's病 (AD)的相关基因 p35 nck5 a神经特异性表达的分子机理。方法通过构建荧光素酶表达载体 ,利用原代培养神经细胞进行瞬时表达实验寻找指导神经特异性表达的顺式作用元件 ,并通过引物延伸实验寻找转录起始位点 ,通过染色质 DNase1高敏位点 (DNase1hypersensitivesite,DHSS)实验确定与 p35 nck5 a转录相关的 DNase1高敏位点。结果　瞬时表达实验结果显示在神经细胞和非神经细胞中 ,所构建的各载体的表达情况没有明显差异 ;在新生大鼠的脑组织和肝组织中存在染色质DNase 1高敏位点的差异 ,该位点大约位于脑基因组 p35 nck5 a编码区上游 - 40 0 bp处。引物延伸实验结果显示主要的转录起始位点的位置与 DNase1高敏位点的位置具有一致性 ,与瞬时表达实验结果也具有相关性。结论　以上结果提示在所克隆到的 p35 nck5 a5′侧翼序列中不存在决定该基因组织特异性表达的顺式作用元件。

关键词： P35^nck5a基因 DNase1高敏位点引物延伸实验基因表达基因控调阿尔茨海默病

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钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB在豚鼠体内的免疫保护性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第11期23卷 871-873页

作者：寇志华陈祖欢孙树汉郭瀛军张平武第二军医大学医学遗传学教研室

目的　观察钩端螺旋体DNA疫苗pcD flaB是否具有抗钩体交叉感染的保护作用。方法　将纯化后的钩体DNA疫苗pcD flaB 10 0 μg 2 0 0 μl肌肉注射豚鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 7d ,初次免疫后的第 2 1天分别攻击感染赖型、临海型和波摩那型钩体 ... 详细信息

目的　观察钩端螺旋体DNA疫苗pcD flaB是否具有抗钩体交叉感染的保护作用。方法　将纯化后的钩体DNA疫苗pcD flaB 10 0 μg 2 0 0 μl肌肉注射豚鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 7d ,初次免疫后的第 2 1天分别攻击感染赖型、临海型和波摩那型钩体 ,观察保护作用。结果　该疫苗对 3型钩体的保护率分别是 88.89%、10 0 %和 10 0 % ,总保护率为 96 .3% ,与对照组差异具有显著性。结论　DNA疫苗pcD flaB在豚鼠体内不但具有抗同型钩体 (临海型 )感染的作用 ,也具有较好的交叉保护作用。

关键词：钩端螺旋体 DNA疫苗 pcD-flaB 豚鼠体内免疫保护性

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核受体的研究进展

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Acta Genetica Sinica 2004年第4期31卷 420-429页

作者：王水良傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

核受体是配体依赖性转录因子超家族 ,与机体生长发育、细胞分化 ,以及体内许多生理、代谢过程中的基因表达调控密切相关。文中综述了核受体研究的一般概况以及核受体与脂生物学、核受体与肿瘤、核受体与辅调节因子等方面的研究进展。

关键词：核受体转录因子辅调节因子基因表达调控

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胎肝特异性癌胚RNA——AK003710的筛选及功能研究

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第二军医大学学报 2015年第3期36卷 233-240页

作者：王少冰孙树汉王芳第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中... 详细信息

目的筛选胎肝特异性癌胚RNA,探讨其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法对小鼠肝发育和肝再生的长链非编码RNA(lncRNA)芯片数据进行生物信息学分析,筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的候选lncRNA,利用实时定量PCR在小鼠肝癌组织中对候选lncRNA进行表达水平检测,综合芯片分析及实时定量PCR结果,选择表达差异最明显的lncRNA行进一步研究。首先在胎肝和肝再生模型中验证该lncRNA的表达,然后利用siRNA技术干扰该lncRNA,再通过EdU标记技术和Transwell实验分别检测细胞的增殖能力和侵袭能力。结果生物信息学分析筛选得到在胎肝和再生肝脏中均高表达的7条lncRNA,其中3条在小鼠肝癌组织中较正常肝组织高表达,3条表达无差异,1条无表达;高表达的3条lncRNA中,lncRNA-AK003710在小鼠肝发育和肝再生芯片中的差异表达倍数最高,可作为进一步研究对象。进一步验证显示lncRNA-AK003710在胎肝及多种肝损伤修复模型中表达上调;功能实验表明对lncRNA-AK003710靶向干扰后能降低小鼠肝癌细胞Hepa1-6的增殖和侵袭能力。结论 lncRNA-A003710在胎肝、再生肝组织及肝癌组织中均高表达,是胎肝特异性癌胚RNA,可调控肝癌细胞的增殖及侵袭过程,有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

关键词：长链非编码RNA 肝发育肝再生肝损伤肝肿瘤

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自噬在电离辐射诱导的小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用

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第二军医大学学报 2017年第10期38卷 1225-1230页

作者：杨文军黄金凤刘岩朱怡卿王芳孙树汉第二军医大学长海医院临床遗传科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用。方法将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8Gy)60Co辐射处理组。采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观... 详细信息

目的探讨自噬在电离辐射诱导小鼠精母细胞GC-2凋亡过程中的作用。方法将小鼠精母细胞GC-2分为空白对照组和不同剂量(2、4和8Gy)60Co辐射处理组。采用原位末端转移酶标记法(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过蛋白质印迹实验观察自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)和Beclin1表达水平的改变,使用荧光显微镜观察GC-2细胞内自噬小体的变化。用5mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理GC-2细胞2h再给予60 Co辐射处理,观察自噬抑制剂联合电离辐射对细胞凋亡率的影响以及自噬相关蛋白表达水平的改变。结果与空白对照组相比,GC-2细胞经60Co辐射处理后细胞凋亡率升高(P<0.05),荧光显微镜下可见细胞自噬体明显增多,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平增加(P<0.05)。预先用5mmol/L 3-MA处理GC-2细胞2h再给予60Co辐射处理,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ以及Beclin1蛋白表达水平与未经3-MA处理组相比降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论电离辐射可以诱导精母细胞发生自噬,抑制细胞自噬后可增强电离辐射对精母细胞的杀伤作用。

关键词：电离辐射精母细胞自噬细胞凋亡

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