检索结果-内蒙古大学图书馆

编码耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

第二军医大学学报 1997年第2期18卷 101-104页

作者：蔡在龙季朝能王学敏张洁董海沈仁权毛裕民复旦大学遗传学研究所第二军医大学基础医学部生物化学教研室

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然... 详细信息

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。并与ｘｙｌＥ基因编码的邻苯二酚２，３双加氧酶作了耐热性比较。结论：ｐｈｅＢ基因在大肠杆菌中获得了高表达，高表达后重组酶的耐热性未发生改变。

关键词： pheB基因耐热邻苯二酚双加氧酶大肠杆菌表达

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遗传性视网膜色素变性3型基因位点单拷贝探针库的构建

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 225-227页

作者：周炜缪为民朱冠山姚玉河焦炳华柴建华第二军医大学基础医学部微生物学教研室复旦大学遗传学研究所

目的：构建遗传性视网膜色素变性３型（ＲＰ３）基因位点的单拷贝探针库。方法：对包含ＲＰ３位点的酵母人工染色体（ＹＡＣ）ＨＯ５１２进行亚克隆，用人总ＤＮＡ杂交法去除重复顺序克隆。结果：构成ＲＰ３位点特异的单拷贝探针库。结... 详细信息

目的：构建遗传性视网膜色素变性３型（ＲＰ３）基因位点的单拷贝探针库。方法：对包含ＲＰ３位点的酵母人工染色体（ＹＡＣ）ＨＯ５１２进行亚克隆，用人总ＤＮＡ杂交法去除重复顺序克隆。结果：构成ＲＰ３位点特异的单拷贝探针库。结论：该库对于构建ＲＰ３位点精细的Ｃｏｓｍｉｄ克隆重叠群及最终识别ＲＰ３基因提供了一种有效的工具。

关键词：视网膜色素变性基因位点单拷贝探针库

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小鼠β趋化因子受体CCR_5基因的克隆

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 231-234页

作者：郭葆玉久野耕嗣向田直史原田明久松岛纲治第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室日本金泽大学癌症研究所

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用Ｍａｒａｔｈｏ... 详细信息

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用ＭａｒａｔｈｏｎＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ方法检测分析该基因，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，编码３５５个氨基酸，与人巨噬细胞炎性趋化蛋白５受体（ｈｕＭＩＰ－５Ｒ）同源性为８１％，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示该基因为单拷贝，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ结果显示小鼠巨噬细胞、脾脏等有表达。结论：克隆得到小鼠ＣＣＲ５基因，可作为研究ＨＩＶ－１感染机制及ＡＩＤＳ治疗有价值的实验模型。

关键词：受体 β趋化因子 CCR5基因基因克隆

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差别显示mRNA法的改良

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 383-385页

作者：戴建新王易伦刘宇健郭嘉陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重... 详细信息

差别显示ｍＲＮＡ法的改良戴建新，王易伦，刘宇健，郭嘉，陆德如分析一对细胞或组织在不同状态下基因表达的差异，是分子生物学研究领域的热点之一。目前，研究方法主要是：递减杂交［１］和差示杂交［２］；但这些方法技术难度大、重复率低且工作量大。差别显示ｍＲＮＡ...

关键词： mRNA 基因筛选聚合酶链反应

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基因xylE编码的邻苯二酚2，3－双加氧酶在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 306-312页

作者：蔡在龙王学敏毛积芳季朝能张洁董海沈仁权毛裕民上海第二军医大学基础医学部生物化学教研室上海复旦大学遗传学研究所

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并... 详细信息

目的：构建ｘｙｌＥ基因高表达菌株，为快速检测芳香类化合物污染提供可能。方法和结果：通过ＰＣＲ扩增，将位于质粒ｐＴＧ４０２上的ｘｙｌＥ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后进一步克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占全菌总蛋白的３４．２％。结论：ｘｙｌＥ基因在大肠杆菌中获得了高表达。

关键词： xylE基因邻苯二酚双加氧酶大肠杆菌亚克隆

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人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响

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第二军医大学学报 1995年第4期16卷 323-325页

作者：郭瀛军王易伦陆惠萍陆德如第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，... 详细信息

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。

关键词：促红细胞生成素密码子翻译基因表达大肠杆菌

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1，25（OH）_2D_3及其类似物调节人原始巨核白血病细胞系增殖分化的机制

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第二军医大学学报 1995年第6期16卷 507-512页

作者：宋亮年郭嘉程涛第二军医大学基础医学部病理生理学教研室第二军医大学基础医学部分子遗传学教研室第二军医大学长海医院血液内科

１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其两种新型类似物（ＭＣ９０３和ＥＢ１０８９）对人原始巨核白血病细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转录－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ... 详细信息

１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其两种新型类似物（ＭＣ９０３和ＥＢ１０８９）对人原始巨核白血病细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转录－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ的表达，强烈提示１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３对ＨＩＭｅｇ细胞的作用是由ＶＤＲ介导的。同时还发现，１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其类似物、维甲酸在调节ＨＩＭｅｇ细胞增殖分化过程中，Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平迅速降低，６ｈ时已基本达到最低水平，提示这些作用因子对ＨＩＭｅｇ细胞的抑制增殖和诱导分化作用是和Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达改变密切相关的。

关键词： 1,25(OH)2D3 白血病巨核系诱导分化

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建立pESnx／FL穿梭质粒致突变测试系统的实验研究

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第二军医大学学报 1994年第4期15卷 318-322页

作者：印木泉徐唯邱信芳薛京伦第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室复旦大学遗传学研究所

本研究用电穿孔法将带有邻苯二酚氧化酶基因（ｘＹ１Ｅ基因）的质粒ｐＥＳｎｘ转染至５种哺乳动物细胞（ＦＬ，ＨＴ，ＬＴＲ，ＰＡ３１７和Ｗｇ３－ｈ）。结果表明，质粒ｐＥＳｎｘ在５种细胞中均可形成抗性克隆。但是，仅ｐＥＳｎｘ／... 详细信息

本研究用电穿孔法将带有邻苯二酚氧化酶基因（ｘＹ１Ｅ基因）的质粒ｐＥＳｎｘ转染至５种哺乳动物细胞（ＦＬ，ＨＴ，ＬＴＲ，ＰＡ３１７和Ｗｇ３－ｈ）。结果表明，质粒ｐＥＳｎｘ在５种细胞中均可形成抗性克隆。但是，仅ｐＥＳｎｘ／ＦＬ克隆可获得每皿５０个以上的转化子和低于１０－４的自发突变率，符合穿梭质粒测试系统的要求。为进一步验证可用于检测致突变性，用已知可诱发点突变的致癌物亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理ｐＥＳｎｘ／ＦＬ克隆细胞。结果表明，ＭＮＮＧ的诱发突变率高于自发突变率２７．８倍，并有剂量－效应关系。突变子快速鉴定结果显示，质粒稳定地存在于突变子中，并无大片段缺失和分子量改变，证实ＭＮＮＧ诱变的是点突变。

关键词：邻苯二酚氧化酶基因致突变质粒

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