检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2000年第6期21卷 519-521页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病... 详细信息

自从发现质粒载体携带的基因能在小鼠肌细胞中表达 ,核酸免疫技术已愈来愈受到人们重视 ,并被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。仅在短短的几年时间内 ,有关的实验报道已涉及包括细菌、病毒、寄生虫等感染性疾病以及肿瘤等预防和治疗的研究。本文就核酸疫苗的免疫机制、优越性、安全性 ,以及目前的研究进展状况作一综述。

关键词：核酸类疫苗免疫机制免疫疗法

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稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 384-386页

作者：周凤娟戴建新胡振林孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了... 详细信息

目的：筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株，为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法：用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体，并通过脂质体转染 P815细胞，G418筛选。结果：构建了重组质粒pcDNA3－HBsAg（S），转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg（S）的存在，PCR扩增也证实HBSAg（S）基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论：获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株，为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。

关键词：乙肝DNA疫苗体外细胞感染 PCR方法乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株

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单核苷酸多态性在复杂性状疾病易感基因研究中的应用

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第二军医大学学报 2004年第2期25卷 140-142页

作者：陈蕊雯孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下... 详细信息

大多数常见病都是一些复杂性状的遗传病 ,致病机制是由多个遗传易感基因与环境因素相互作用所致。目前认为一些常见的遗传变异 ,主要是指单核苷酸多态性 (single nucleotide polym orphisms,SNPs)与复杂性状疾病的易感有关。本文在以下几个方面对 SNPs与复杂性状疾病易感基因研究的策略和方法学问题作了较为详细的综述 :(1 ) SNP特点及其有关网上资源 ;(2 )对直接测序法、单碱基延伸法、Taq Man法、基于实时动态荧光 (动力学 ) PCR的等位基因特异扩增法 ,变性高效液相色谱 (DHPL C)法和 OL A/ PCR的 SNPs基因分型方法的原理、通量和优缺点进行了比较 ;(3)

关键词：单核苷酸多态性复杂性状疾病易感基因发病机制基因组学

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猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1192-1194页

作者：吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗... 详细信息

目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。

关键词：猪白细胞介素4 基因克隆囊尾蚴 DNA疫苗佐剂作用

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猪囊尾蚴Annexin32的组织定位

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 830-832页

作者：王庆敏胡振林王中川孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白... 详细信息

目的 :用免疫组化方法对猪囊尾蚴抗原 Annexin32进行组织定位。方法 :首先将 Annexin32在大肠杆菌中进行表达 ,表达的 Annexin32蛋白经亲和层析、凝血酶切割纯化 ,以囊虫病病猪血清检测表达蛋白的抗原性 ;然后将纯化蛋白免疫新西兰白兔 ,获得抗 Annexin32的多克隆抗体 ;最后将新鲜剥离的囊尾蚴进行冰冻切片 ,用免疫组化方法进行定位研究。结果 :表达的 Annexin32蛋白可以被囊虫病病猪血清特异地识别。制备的多克隆抗体的效价为 1∶ 4 0万。免疫组化定位结果显示 ,Annexin32主要在囊壁中表达 ,头节部表达较少 ;囊尾蚴周边肌肉组织也有表达。结论 :Annexin32主要分布于囊尾蚴的囊壁 ,而且它可能是一种分泌性蛋白。

关键词：猪囊尾蚴 Annexin32 组织定位

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肿瘤基因治疗研究若干新进展

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1258-1260页

作者：贺艳王水良孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究... 详细信息

肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方面的研究进展作一综述。

关键词：肿瘤基因治疗病毒载体综述文献

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融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化

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第二军医大学学报 2004年第11期25卷 1205-1207页

作者：贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/... 详细信息

目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。

关键词：膜联蛋白亚家族单链尿激酶融合基因稀有密码子表达利福平

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lacⅠ 靶基因突变子的一种正向选择系统的建立

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 713-715页

作者：黎怀星卢洋姚真真傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：建立一种能正向选择ｌａｃⅠ靶基因突变子的选择系统。方法：比较了分别携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒和ｌａｃⅠ＋／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌在ＬＢ完全培养基、以葡萄糖为碳源的Ｍ９基本培养基和以乳糖为碳源... 详细信息

目的：建立一种能正向选择ｌａｃⅠ靶基因突变子的选择系统。方法：比较了分别携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒和ｌａｃⅠ＋／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌在ＬＢ完全培养基、以葡萄糖为碳源的Ｍ９基本培养基和以乳糖为碳源的Ｍ９／Ｌ基本培养基内的生长情况。结果：组成型ＤＨ１０Ｂ菌在Ｍ９／Ｌ固体培养基中只需培养２３ｈ便可观察到生长，而诱导型ＤＨ１０Ｂ菌则需培养８８ｈ才可观察到生长，但在ＬＢ和Ｍ９培养基内两者的生长速度却相同；当将少量的组成型ＤＨ１０Ｂ菌与大量的诱导型ＤＨ１０Ｂ菌混合接种于Ｍ９／Ｌ固体培养基上培养时，Ｍ９／Ｌ固体培养基能从约２．７×１０６的ｌａｃⅠ＋型ＤＨ１０Ｂ菌中将少量的ｌａｃⅠ－型ＤＨ１０Ｂ菌筛选出来。结论：本研究建立了一种在特定时间内只选择生长携带有ｌａｃⅠ－／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌落。

关键词：正向选择 lacⅠ靶基因基因突变子

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错配修复基因MLH1和MSH2多态性分析条件的优化

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第二军医大学学报 2006年第11期27卷 1276-1276,F0003页

作者：王玉招梅倩颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

DNA修复系统是与大肠癌发病密切相关的遗传因素,错配修复基因(mismatch repair genes,MMR)是最重要的一类DNA修复基因,其在维护基因组稳定的细胞内通路中发挥着重要的作用,其主要是通过剪切发生错配的核苷酸而对基因进行修复。[第一段]

关键词：基因错配 DNA修复多态性限制性片段长度

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膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 378-380页

作者：颜宏利孙树汉陈蕊雯杨湘越第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物... 详细信息

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。

关键词：膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶基因拼接基因表达重叠区扩增法大肠杆菌

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