检索结果-内蒙古大学图书馆

中华劳动卫生职业病杂志 2010年第7期28卷 482-487页

作者：许桂凤朱江波郑怡文朱玉平马玺里刘珍侯娟王飞张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;... 详细信息

目的建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;采用飞片法,将5种细胞的飞片放入同一培养皿,用体积分数为10%的FBS DMEM培养基培养7 d,用噻唑蓝（MTT）比色法比较原代细胞在单独培养和共培养时的生长情况.结果建立的大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞、真皮成纤维细胞分离方法稳定,细胞分离成活率均达90%,其中胶原酶消化法培养肝细胞的存活率达90.3%,两步消化法培养肾细胞的细胞存活率达91.9%,心肌细胞的胶原酶消化法细胞存活率达93.0%.3～15 d的心肌细胞搏动频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,差速贴壁法培养的肺泡巨噬细胞存活率可达90.8%,以胶原酶消化法培养的原代真皮细胞存活率达92.7%,细胞生长状态良好.5种原代细胞的多器官细胞共培养结果显示,共培养时细胞生长增殖情况良好,单独培养与共培养细胞生长曲线基本重合.结论所建立的大鼠多器官细胞共培养方法是成功的.

关键词：细胞培养模型毒理学体外研究

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小鼠腔前卵泡体外培养方法的建立

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卫生研究 2009年第2期38卷 153-158页

作者：万旭英朱玉平马玺里朱江波侯娟刘真王飞张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将... 详细信息

目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将体外卵母细胞的成熟情况(IVG)与体内卵母细胞的生长情况(IVM)进行比较,以判断体外培养方法是否成功。结果分离完整卵泡率为89.74%(376/419);培养12天卵泡存活率为96.81%(364/376),有腔形成率为48.94%(184/376);卵泡和卵母细胞直径显著增加。诱导排卵后卵丘细胞-卵母细胞复合体排出率为56.38%(212/376);培养卵泡经历从腔前卵泡到卵母细胞成熟和极体排出的形态学变化,也有部分卵泡不发生腔样结构改变。体外培养卵泡分泌E2和P激素与体内分泌特征一致。IVG组4.61%(10/217)卵母细胞不能恢复成熟[停止在生发泡期(GV期)],76.50%(166/217)停止减数分裂在生发泡破裂期(GVBD期),18.89%(41/217)卵母细胞停止在第2次减数分裂(MII期)(PB);而IVM组1.24%(3/241)的卵母细胞不能恢复成熟(停止在GV期),45.23%(109/241)停止减数分裂在GVBD,53.53%(41/241)卵母细胞停止在MII期(PB);卵母细胞染色体核型完整,无染色体数目和结构异常。结论本研究建立的小鼠腔前卵泡体外培养方法基本成功,可作为卵泡发育生理研究和毒理学研究的模型。

关键词：腔前卵泡体外培养小鼠

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荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内变化过程的影响

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卫生研究 2010年第5期39卷 531-535页

作者：王飞刘珍许桂凤侯娟张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙... 详细信息

目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对人支气管上皮细胞系BEAS-2B和人单核细胞系THP-1存活率的影响;激光共聚焦显微镜和透射电镜分别观察不同时间内荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯在细胞内的分布。结果荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对BEAS-2B和THP-1两种细胞存活率的变化趋势相同,均随着剂量增加细胞存活率降低;而且在相同的剂量组内,荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯的细胞存活率差异无显著性(P>0.05);两种纳米材料的细胞存活率剂量-效应曲线趋势和时间-效应曲线趋势也一致;两种纳米材料均可在接触BEAS-2B和THP-1细胞1h后进入细胞,在4h时已经进入细胞核内,在细胞内分布广泛。结论荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内动力学过程无明显影响,可以代替同尺寸未标记纳米聚苯乙烯用于细胞动力学研究。

关键词：荧光标记纳米聚苯乙烯细胞毒性毒征细胞分布细胞动力学

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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯及其代谢产物MEHP对体外大鼠卵泡发育的影响

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卫生研究 2010年第3期39卷 268-270,274页

作者：万旭英朱玉平马玺里朱江波郑怡文侯娟王飞刘珍张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的利用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)对卵泡体外发育的影响。方法机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。MEHP设2.5、5、10、20、40和80... 详细信息

目的利用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)对卵泡体外发育的影响。方法机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。MEHP设2.5、5、10、20、40和80μg/ml6个浓度,DEHP设33.7、67.5、125、250、500、1000nmol/L6个浓度,同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照和阴性对照。每组16～20个卵泡,3次重复。隔天换1/2液,在培养第10天诱导排卵,观察卵泡体外发育情况。结果DEHP对第11天卵泡存活率、有腔形成率、异常卵泡形成率和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率无明显的影响,与溶剂对照组差异无显著性(P>0.05)。第2天暴露>10μg/ml以上剂量的MEHP48h后,第11天卵泡存活率明显下降(54.76%±3.37%),与对照组(91.57%±1.32%)比较差异有显著性(P<0.05),剂量与卵泡存活率之间存在一定相关性(R2=0.92);COCs排出(24.99%±3.95%)明显减少,与对照组(52.78%±8.45%)比较差异有显著性(P<0.05);异常卵泡出现率(45.24%±3.37%)明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);暴露>20μg/mlMEHP有腔形成率(46.18%±1.67%)减少,与对照组(85.91%±5.03%)比较差异有显著性(P<0.05),且有明显剂量-反应关系。结论MEHP可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯卵泡发育环境毒理

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纳米级二氧化钛对体外大鼠腔前卵泡生长发育成熟的影响

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第二军医大学学报 2009年第8期30卷 869-873页

作者：侯娟万旭英王飞许桂凤刘珍张天宝第二军医大学基础部卫生毒理学教研室上海200433

目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5... 详细信息

目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5组:3个25nmTiO2(12.5、25和50μg/ml)组、阴性对照组、微米级TiO2对照组。培养第10天诱导排卵,观察卵泡发育和卵母细胞成熟情况。结果:随着纳米级TiO2剂量增加,卵泡存活率、有腔形成率及卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率呈下降趋势(P<0.05);与阴性对照组相比,微米级TiO2组对卵泡发育与卵母细胞成熟无明显影响;25μg/ml以上剂量纳米级TiO2组卵泡形态学明显异常,卵泡存活率及有腔形成率明显下降;50μg/ml纳米级TiO2可使处于成熟阶段的卵母细胞数减少。结论:25μg/ml剂量以上25nmTiO2可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育与卵母细胞成熟,而微米级TiO2在相同剂量下对卵泡的生长发育和卵母细胞的成熟无明显影响。提示纳米级TiO2有不同于微米级TiO2的毒作用性质,可能有雌性生殖毒性,应引起关注。

关键词：卵泡卵母细胞纳米级二氧化钛毒性试验

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Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活性

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 367-371页

作者：王梁华冯煜钟山朱玉平娄永华焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血... 详细信息

应用脂多糖 (LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强 ,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力 ,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性 .TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用 .实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用 .结果证实TLR2能介导LPS的功能 ,而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程。

关键词：脂多糖 TLR2 抗体巨噬细胞 TRAIL TNFα 吞噬活性激活抑制作用

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小鼠短指/缺指畸形肢体cDNA消减文库的构建

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中国药理学与毒理学杂志 2003年第4期17卷 281-285页

作者：陈蓉芳张天宝印木泉朱江波郭苗莉第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的　为筛选、克隆小鼠短指 /缺指畸形肢体的特异表达基因 ,构建了GD18小鼠畸形肢体 (短指 /缺指 )与正常肢体的差异表达的cDNA消减文库。方法　应用抑制消减杂交技术 (SSH ) ,结合PCRcDNA合成法 ,将从总RNA中合成的双链cDNA ,酶切成... 详细信息

目的　为筛选、克隆小鼠短指 /缺指畸形肢体的特异表达基因 ,构建了GD18小鼠畸形肢体 (短指 /缺指 )与正常肢体的差异表达的cDNA消减文库。方法　应用抑制消减杂交技术 (SSH ) ,结合PCRcDNA合成法 ,将从总RNA中合成的双链cDNA ,酶切成平均大小为 4 0 0～ 6 0 0bp的片段 ,经接头连接 ,两次消减杂交和两次抑制性PCR后 ,将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,菌液PCR筛选有插入片段的SSH克隆。结果　成功地构建了GD18小鼠畸形肢体(短指 /缺指 )差异表达的cDNA消减文库 ,从中挑取2 75个克隆进行菌液PCR分析 ,结果显示其中 2 5 5均得到 2 0 0～ 6 0 0bp插入片段。结论　SSH与PCR合成双链cDNA ,是一种自微量总RNA中构建高特异性的差异表达cDNA消减文库的有效方法。消减文库的构建 ,有助于筛选、克隆小鼠短指

关键词：短指少指基因表达基因文库

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基于荧光素酶报告基因的CHO细胞(抗)雄激素样物质检测方法的建立

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卫生研究 2005年第3期34卷 281-284页

作者：赵海涛朱江波朱勇飞王征马玺里张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的　建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法　通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CH... 详细信息

目的　建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法　通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CHO细胞,检测报告基因lucferase的表达,给予DHT、FLU后检测该系统的有效性和特异性,并用2 ,4 DDT、METH等受试物进行验证。结果　转染后的CHO细胞对DHT呈明显的剂量-反应关系,1×10 - 1 0 mol LDHT可出现明显的兴奋效应,至1×10 - 7mol L可达到最大反应值,而未转染雄激素受体质粒与DHT无明显反应,FLU可以显著抑制二氢睾酮的激动效应,说明检测系统有效、特异。验证结果表明3×10 - 7mol L以上2 ,4 DDT及3×10 - 7mol L以上METH可对雄激素受体活性产生抑制作用,2 ,4 DDT的抑制作用强于甲氧氯。结论　本试验建立的基于报告基因的体外(抗)雄激素检测系统是可行的,2 ,4 DDT、甲氧氯有明显的抗雄激素活性作用。

关键词：抗雄激素样活性中国仓鼠卵巢细胞人雄激素受体报告基因方法

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人胚肺成纤维细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立

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中国药理学与毒理学杂志 2001年第4期15卷 306-310页

作者：吴涛印木泉第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独... 详细信息

为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独立性生长及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测 .结果表明 :在促癌剂PMA作用下 ,WI38基因转染细胞发生了恶性转化 ,c Ha rasV12G基因使细胞对PMA的促癌敏感性增强 .由此可见。

关键词：基因转染细胞促癌剂佛波醇酯检测模型人胚肺成纤维细胞

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sHsps在小鼠正常腭发育和腭裂发生过程中的表达

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卫生研究 2005年第3期34卷 293-297页

作者：朱勇飞朱江波周宏元张天宝第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的　研究sHsps在正常腭发育及腭裂发生过程中的表达情况。方法　在GD10经口一次分别给予实验组孕小鼠80mg kg的视黄酸(RA)、对照组孕鼠等体积的植物油,并分别于GD15 GD17取两组胎鼠的腭,利用RT- PCR方法半定量检测实验和对照组中sHsp... 详细信息

目的　研究sHsps在正常腭发育及腭裂发生过程中的表达情况。方法　在GD10经口一次分别给予实验组孕小鼠80mg kg的视黄酸(RA)、对照组孕鼠等体积的植物油,并分别于GD15 GD17取两组胎鼠的腭,利用RT- PCR方法半定量检测实验和对照组中sHsps的表达丰度。结果　正常腭除Hspb10在GD17不表达外,其余Hsps基因在GD15 - GD17均有明显表达,Hsp2 0、Hsp2 5、Hsp2 7、Hsp32、Hspb2、Hspb3、Hspb7表达丰度基本恒定,Hsp30、Hspb5随胚龄的增加而表达丰度增高,Hsp10、Hsp2 2、Hspb4、Hspb9在GD16出现表达高峰。Hsp30、Hsp32、Hspb4、Hspb10在GD15 - GD17的表达丰度腭裂组明显高于正常组。Hsp10、Hsp6 0、Hspb5、Hspb9在GD15 - GD17的表达丰度腭裂组明显低于正常组。Hspb9、Hspb10在正常腭发育和腭裂发生过程中的表达模式明显不同。结论　15种Hsps除Hspb10在GD17不表达外,其余在GD15 - GD17正常腭发育过程中均有明显表达,但不同Hsps的表达特点有所不同;Hsp30、Hsp32、Hspb4、Hspb10在腭裂发生中可能主要起应激保护反应,Hsp10、Hsp6 0、Hspb5、Hspb9、Hspb10可能与腭裂的发生有关。

关键词：热休克蛋白基因视黄酸胚胎腭裂发育

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