检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：闫培宁第二军医大学

学位级别：博士

【背景】人硫酸酯酶1（hSulf-1）基因位于8号染色体长臂8q13.3上，大小约257Kb，开放阅读框架（open reading frame，ORF）长2616bp，编码871个氨基酸残基。氨基酸序列可分为4段：信号肽（23AA），硫酸酯酶结构域（373AA），亲水结构域... 详细信息

【背景】人硫酸酯酶1（hSulf-1）基因位于8号染色体长臂8q13.3上，大小约257Kb，开放阅读框架（open reading frame，ORF）长2616bp，编码871个氨基酸残基。氨基酸序列可分为4段：信号肽（23AA），硫酸酯酶结构域（373AA），亲水结构域（346AA）和C端结构域（109AA）。hSulf-1能够特异性水解硫酸乙酰肝素（HS）链上的6-氨基葡萄糖硫酸酯键，将6-O-氨基葡萄糖从HS链上解离下来。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）能够稳定肝素结合生长因子受体类信号通路，其功能发挥有赖于完整的HS链。当hSulf-1表达时，HSPG的硫酸化状态下降，信号通路稳定性下降，能够传导至胞内的有效信号减少，从而降低细胞增殖等。因此hSulf-1被认为是细胞功能下调基因，能够影响肝素结合类生长因子及wnt信号通路等。其在多种肿瘤组织，如肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌中表达下调，但在胰腺癌中表达上调，其变化与肿瘤具有相关关系且与部分肿瘤的预后相关。 hSulf-1在胆囊癌中的表达情况尚不清楚，其在胆囊中表达状态与肝素结合生长因子受体类信号通路的关系也不清楚。hSulf-1在间质（包括间质细胞和基质）中的表达也未见报道，因此其在间质中表达有无改变也不清楚。本研究采取临床手术中的胆囊癌肿瘤组织及非肿瘤组织、淋巴结组织，采用免疫组织化学的方法进行蛋白表达的原位检测，同时检测了几种常见的细胞信号通路蛋白，采用光密度软件测定蛋白表达光密度值，经过统计分析，分别观察hSulf-1在非肿瘤及肿瘤胆囊间质、上皮、淋巴结中的表达。并分析其表达对部分细胞信号通路的影响及其与部分信号通路蛋白的相互关系。通过干扰间质细胞hSulf-1表达进一步分析间质细胞hSulf-1表达改变后对肿瘤细胞趋化能力的影响。饮酒与人类生活息息相关，根据世界卫生组织报道，58%的成年人在最近的12个月内饮过酒。研究表明，乙醇与多种癌症的发生有关，但是乙醇与癌症侵袭转移的关系尚不明确：有文献认为二者不相关；也有文献认为饮用不同浓度的酒精对癌症侵袭转移的影响不同，高浓度抑制、低浓度促进、中等浓度不相关；此外也有文献认为中低浓度抑制、高浓度促进；尚有文献认为，摄入酒精的量是决定因素，重度酗酒者癌症侵袭转移加快，中等量或低等量饮酒则无明显影响。乙醇与癌症侵袭转移的相关关系有了明确的定论后，可以解决以下临床问题：1，为预防癌症的早期侵袭转移，健康成年人群是否有必要适量饮酒？2，已经明确诊断的癌症患者，本来有饮酒习惯者是否需要戒酒？本来无饮酒习惯者，是否有必要适量饮酒？在将来的实验研究中可以将低表达hsulf-1的胆囊癌细胞系进行转染使其正常表达hsulf-1，此时再检验乙醇刺激对胆囊癌细胞迁移侵袭的影响，从而可以判断hsulf-1有没有在该过程中发挥作用。第一部分hSulf-1在胆囊癌间质中表达下降【目的】检测临床手术中取得的胆囊癌患者组织标本间质组织中hSulf-1的表达，明确与非肿瘤间质组织相比，hSulf-1在胆囊癌间质中表达。【方法】取上海东方肝胆外科医院2012-2至2013-09收治的胆囊癌患者的胆囊肿瘤及其非胆囊癌组织，排除术后病理结果回报中报告为非胆囊癌者，共取得84组组织：胆囊肿瘤组织84例，胆囊非肿瘤组织84例。将组织经石蜡包埋，制作成组织芯片，每张芯片上84个组织点。采用免疫组化方法在组织芯片上检测hSulf-1及一系列相关蛋白。对结果采用IPP6.0软件进行光密度分析，对光密度值再采用SPSS20.0进行统计分析。【结果】配对t检验分析了hSulf-1在胆囊肿瘤间质组织及非肿瘤对照间质组织中的表达情况。在α=0.05水准，hSulf-1在非肿瘤胆囊间质组织及胆囊肿瘤间质组织中的光密度差异具有统计学意义。【结论】与非肿瘤胆囊间质组织比较，hSulf-1在胆囊癌间质组织中的表达下降。第二部分间质细胞hSulf-1表达改变影响其对肿瘤细胞趋化作用【目的】验证间质细胞中hsulf-1表达改变是否影响其对胆囊癌细胞的趋化作用。【方法】人胚肺成纤维细胞系MRC-5能够正常表达hsulf-1。采用shRNA-hsulf-1质粒转染MRC-5来抑制hsulf-1表达。随后将hsulf-1表达抑制的MRC-5与人胆囊癌细胞系EHGB-1进行transwell共培养。EHGB-1放在上室，MRC-5放在下室。【结果】shRNA-hsulf-1质粒转染MRC-5组，其上室细胞穿透小室的数目比阴性对照及空白对照数目多。【结论】hSulf-1在间质细胞MRC-5中表达下降后，间质细胞MRC-5对胆囊癌细胞EHGB-1的趋化能力增强。第三部分胆囊癌上皮h

关键词：间质细胞胆囊癌人硫酸酯酶-1 细胞迁移细胞侵袭

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幼年期大鼠铅暴露改变突触功能可塑性及结构可塑性损害海马相关的学习和记忆

幼年期大鼠铅暴露改变突触功能可塑性及结构可塑性损害海马相关的...

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：王涛官瑞丽刘明朝骆文静第四军医大学预防医学系劳动与环境卫生学教研室

【目的】铅是一种环境毒物,铅暴露导致各种神经行为改变,比如学习记忆损害,青春期儿童的行为暴力倾向增加。以前大量的研究集中与发育早期铅暴露(孕期至哺乳期)对神经行为的影响。在我们这项研究中,我们通过对幼年期大鼠铅暴露(幼年期... 详细信息

【目的】铅是一种环境毒物,铅暴露导致各种神经行为改变,比如学习记忆损害,青春期儿童的行为暴力倾向增加。以前大量的研究集中与发育早期铅暴露(孕期至哺乳期)对神经行为的影响。在我们这项研究中,我们通过对幼年期大鼠铅暴露(幼年期至成年期)。【材料和方法】我们采用行为学方法,对大鼠恐惧学习记忆,大鼠运动功能,疼痛状态进行了检测。采用电生理方法检测了海马突触可塑性,AMPA电流和NMDA受体电流功能。采用形态学方法研究了突触结构的改变最终验证其神经行为学改变及其相关性。【结果】我们的结果表明,幼年期铅暴露导致成年大鼠恐惧条件化记忆损害以及焦虑样症状,而运动及痛觉感觉并没有明显改变。电生理研究发现,铅暴露大鼠诱导长时程增强受到影响,而这可能与兴奋性突触传递改变有关。另外我们发现NMDA及AMPA受体电流受到抑制,然而GABA突触传递并没有受到影响。Westem blot结果显示,磷酸化的GluR1及GR2A表达降低。另外,通过形态学研究发现,铅暴露大鼠树突棘密度减少20%,进一步分析发现,树突棘减少主要集中与海马的放射层,对树突棘形态进行量化分析发现,树突棘头部直径减少,树突棘长度增加,呈现不成熟状态。【结论】我们的结果表明,幼年期铅暴露导致大鼠学习记忆能力降低,但对基础的运动及痛觉无显著性影响。铅暴露主要影响突触可塑性,这与AMPA受体及NMDA受体功能与表达数量呈相关性。另外铅暴露导致树突棘数量及形态发生变化。这些变化与神经行为学变化紧密相关。

关键词：树突棘恐惧条件记忆海马铅突触可塑性

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1,1-二氨基-2,2-二硝基乙烯对小鼠精子畸形的影响

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环境与健康杂志 2015年第6期32卷 546-547页

作者：高永超王鸿刘志永孙超岳红夏洁芳牛浩高俊宏兵器工业卫生研究所生物效应与毒理研究室陕西西安710065 第四军医大学第一附属医院妇产科生殖医学中心

为评价1,1-二氨基-2,2-二硝基乙烯(FOX-7)对小鼠精子畸形的影响,将小鼠随机分为6组,分别为阳性对照组、溶剂对照(4%淀粉溶液)组和34.82、69.64、139.29、348.22 mg/kg FOX-7染毒组及阳性对照(40 mg/kg环磷酰胺)组,每组12只。采用灌胃方... 详细信息

为评价1,1-二氨基-2,2-二硝基乙烯(FOX-7)对小鼠精子畸形的影响,将小鼠随机分为6组,分别为阳性对照组、溶剂对照(4%淀粉溶液)组和34.82、69.64、139.29、348.22 mg/kg FOX-7染毒组及阳性对照(40 mg/kg环磷酰胺)组,每组12只。采用灌胃方式进行染毒,每日1次,连续染毒5 d。首次染毒35 d后,观察精子畸形情况。结果显示,与溶剂对照组比较,139.29、348.22 mg/kg FOX-7染毒组小鼠的精子畸形率均较高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着FOX-7染毒剂量的升高,小鼠的精子畸形率呈上升趋势。提示FOX-7可引起小鼠精子发生畸形。

关键词： 1,1-二氨基-2,2-二硝基乙烯(FOX-7) 精子畸形

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严重烧伤伤员的转运

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中华烧伤杂志 2015年第4期31卷 241-243页

作者：彭毅志第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

近年来突发性重大烧伤事故频发，其中2009年6月5日成都公交车燃烧造成45例伤员；2010年11月15日上海胶州路高层公寓火灾造成127例伤员；2013年6月7日厦门公交车燃烧造成34例伤员；2014年5月12曰宜宾公交车燃烧造成44例伤员；特别严重的... 详细信息

近年来突发性重大烧伤事故频发，其中2009年6月5日成都公交车燃烧造成45例伤员；2010年11月15日上海胶州路高层公寓火灾造成127例伤员；2013年6月7日厦门公交车燃烧造成34例伤员；2014年5月12曰宜宾公交车燃烧造成44例伤员；特别严重的是2014年8月2日昆山粉尘爆炸事故，当场死亡75人，烧伤伤员185例，平均烧伤总面积95％TBSA，平均Ⅲ度创面面积达82％TBSA，90％的伤员合并吸入性损伤。

关键词：烧伤病人转送时机

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miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究

miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：曹子鹏康蓓佩赵芳王迪雅苏鹏王晓静骆文静第四军医大学军事预防医学系劳动与环境卫生学教研室

【目的】研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究。【方法】采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型;采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞铅暴露模型;采用实时荧光定量qRT-PCR方法检测miR-... 详细信息

【目的】研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究。【方法】采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型;采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞铅暴露模型;采用实时荧光定量qRT-PCR方法检测miR-34b和突触小泡膜蛋白vamp2 mRNA的表达水平;采用Western blot方法检测VAMP2蛋白的表达水平;采用荧光素酶报告基因系统检测miR-34b对vamp2 mRNA3'-UTR区稳定性的影响;采用免疫电镜技术观察发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触小泡膜蛋白VAMP2表达水平的影响;采用透射电镜技术检测发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触囊泡形成的影响。【结果】铅暴露组大鼠海马组织中miR-34b表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(p<0.01),且高剂量暴露组高于低剂量暴露组,差异具有统计学意义(p<0.05)。铅暴露还影响PC12细胞和HT22细胞中miR-34b的表达,且表达水平随着染铅剂量的增加而升高(p<0.05)。采用生物信息学方法对miR-34b的靶基因进行分析,结果显示突触小泡膜蛋白VAMP2作为miR-34b靶分子的可能性较大。向PC12细胞中转染miR-34b的抑制剂,突触小泡膜蛋白VAMP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高。荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-34b能够与vamp2 mRNA的3'-UTR区特异结合影响其稳定性。铅暴露组大鼠海马组织中VAMP2 mRNA和蛋白表达水平较对照组下降。与对照组相比,PC12细胞和HT22细胞处理24h和48h后,VAMP2 mRNA和蛋白表达水半下降。免疫电镜方法检测结果显示,发育期铅暴露后海马区突触结构内VAMP2蛋白表达显著下调;透射电镜检测结果显示,发育期铅暴露能够显著减少大鼠海马区神经元内突触囊泡的数量。【结论】铅暴露通过诱导miR-34b表达进而影响下游靶分子突触小泡膜蛋白VAMP2的表达以及海马区神经元内突触囊泡的形成。

关键词：铅 miR-34b VAMP2 突触囊泡神经毒性

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miR-34bNAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究

miR-34bNAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：曹子鹏康蓓佩赵芳王迪雅苏鹏王晓静骆文静第四军医大学军事预防医学系劳动与环境卫生学教研室

[目的]研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究. [方法]采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型;采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞铅暴露模型;采用实时荧光定量qRT-PCR方法检测miR-34b... 详细信息

[目的]研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究. [方法]采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型;采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞铅暴露模型;采用实时荧光定量qRT-PCR方法检测miR-34b和突触小泡膜蛋白vamp2 mRNA的表达水平;采用Western blot方法检测VAMP2蛋白的表达水平;采用荧光素酶报告基因系统检测miR-34b对vamp2 mRNA 3'-UTR区稳定性的影响;采用免疫电镜技术观察发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触小泡膜蛋白VAMP2表达水平的影响;采用透射电镜技术检测发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触囊泡形成的影响. [结果]铅暴露组大鼠海马组织中miR-34b表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(p＜0.01),且高剂量暴露组高于低剂量暴露组,差异具有统计学意义(p＜0.05).铅暴露还影响PC12细胞和HT22细胞中miR-34b的表达,且表达水平随着染铅剂量的增加而升高(p＜0.05).采用生物信息学方法对miR-34b的靶基因进行分析,结果显示突触小泡膜蛋白VAMP2作为miR-34b靶分子的可能性较大.向PC12细胞中转染miR-34b的抑制剂,突触小泡膜蛋白VAMP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高.荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-34b能够与vamp2 mRNA的3'-UTR区特异结合影响其稳定性.铅暴露组大鼠海马组织中VAMP2 mRNA和蛋白表达水平较对照组下降.与对照组相比,PC12细胞和HT22细胞处理24h和48h后,VAMP2 mRNA和蛋白表达水平下降.免疫电镜方法检测结果显示,发育期铅暴露后海马区突触结构内VAMP2蛋白表达显著下调;透射电镜检测结果显示,发育期铅暴露能够显著减少大鼠海马区神经元内突触囊泡的数量.[结论]铅暴露通过诱导miR-34b表达进而影响下游靶分子突触小泡膜蛋白VAMP2的表达以及海马区神经元内突触囊泡的形成.

关键词：铅 miR-34b VAMP2 突触囊泡神经毒性

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复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星牙周缓释制剂对大鼠睾丸毒性的机制研究

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第6期25卷 354-358,341页

作者：董正谋刘鲁川敖琳湖北省红安县人民医院口腔科湖北红安438400 第三军医大学大坪医院野战外科研究所口腔科重庆400042 第三军医大学预防医学院卫生毒理学教研室重庆400038

目的:观察复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星(COPM)牙周缓释制剂对大鼠睾丸毒性的作用机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为阴性对照组和低、中、高剂量组(n=10),每日分别按1、4、8 g/kg-1的剂量灌服COPM牙周缓释制剂,阴性对照组每日按体质量灌... 详细信息

目的:观察复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星(COPM)牙周缓释制剂对大鼠睾丸毒性的作用机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为阴性对照组和低、中、高剂量组(n=10),每日分别按1、4、8 g/kg-1的剂量灌服COPM牙周缓释制剂,阴性对照组每日按体质量灌服相应体积的双蒸水,连续42 d。所有大鼠处死后,分别计算附睾系数,检查精子计数、活动率和畸形率;透射电镜观察生精细胞的超微结构;考马斯亮蓝法测定睾丸组织中乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活力;RT-PCR检测睾丸组织中雄激素结合蛋白(ABP)、抑制素-α(inhibin-α)基因的m RNA表达水平。结果:高剂量组睾丸、附睾系数减小,精子活力降低、计数减少、畸形率增加(P<0.05),生精细胞超微结构出现不同程度损害;高剂量组睾丸组织中的LDH、LAL、ACP和高、中剂量组的γ-GT活力降低;高剂量组睾丸组织中的ABP和inhibin-αm RNA表达水平下降(P<0.05)。结论:高剂量COPM牙周缓释制剂对大鼠睾丸有一定的毒性;睾丸组织中LDH、ALP、ACP、γ-GT的活力下降,ABP和inhibin-αm RNA的表达减少可能是其毒性作用机制之一。

关键词：牙周缓释制剂睾丸超微病理组织酶基因表达

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小胶质细胞活化调节GluR1磷酸化在慢性不可预期性应激致认知损伤中的作用

小胶质细胞活化调节GluR1磷酸化在慢性不可预期性应激致认知损伤...

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：官瑞丽刘明朝陈景元骆文静第四军医大学军事预防医学系军队劳动与环境卫生学教研室

【目的】研究慢性不可预期性应激的认知损伤作用,明确慢性不可预期性应激引发认知伤的部分机制以及米诺环素的保护作用。【材料和方法】慢性不可预期性应激(chronic unpredictable stress,CUS)及米诺环素干预动物模型建立:选取21天SD大... 详细信息

【目的】研究慢性不可预期性应激的认知损伤作用,明确慢性不可预期性应激引发认知伤的部分机制以及米诺环素的保护作用。【材料和方法】慢性不可预期性应激(chronic unpredictable stress,CUS)及米诺环素干预动物模型建立:选取21天SD大鼠,随机分为对照组,对照+米诺环素组,CUS组,CUS+米诺环素组;常规饮食适应3天后,各组给予不同处理:对照组常规饲养;对照+米诺环素组饮水中给予米诺环素,根据大鼠每日摄入水量调节每日摄入米诺环素50mg/Kg/d;CUS组接受下列应激:食水剥夺(夜晚,12h),昼夜颠倒(24h),饲养笼倾斜45度(夜晚,12h),单笼饲养(24h),2h束缚,4度冷暴露(2h),强迫游泳(15min);CUS+米诺环素组在大鼠接受应激的同时根据大鼠每日摄入水量调节每日摄入米诺环素50mg/Kg/d(食水剥夺时除外)。暴露持续时间为21d,每种应激每周内随机出现一次。Morris水迷宫:用Morris水迷宫视频跟踪分析系统进行水迷宫实验,应激3周后开始检测,每只大鼠每天训练4次,每次采用不同的入水点,每次训练1min。结果以大鼠寻找站台的潜伏期、在目标象限的时间及距离表示。离体海马脑片诱发电位记录:取孵育后脑片置于半浸式恒温浴槽的尼龙网上,浴槽内恒温32℃。循环通入95%O2+5%CO2混合气,ACSF恒速灌流(1-2ml/min)。通过监视器将双极金属钨丝刺激电极置于CA3区Schaffer侧支路径上,刺激电极经隔离器与刺激器(AMPI)相连接。记录刺激所诱发的场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)和PS并统计数据。形态学检测小胶质细胞活化:参照免疫荧光染色,以一抗OX42标记小胶质细胞,激光共聚焦下观察记录实验结果。Western blot检测蛋白表达:配制12%或10%的分离胶和5%的积层胶;每孔上样20μl。电泳80V/30min,120V/90min后,250mA/90min将凝胶中蛋白转移至NC膜;以5%脱脂牛奶室温封闭1h。4℃孵育一抗(anti-GluR1,anti-P-GluR1(Ser845),anti-P-GluR1(Ser845))过夜;室温孵育二抗1.5h;在暗室中用凝胶成像分析仪扫描各免疫印迹条带灰度值并进行分析。【结果】1.慢性不可预期性应激能够导致认知损伤;2.认知损伤伴随着小胶质细胞的活化以及GluR1 845、831位点磷酸化水平的降低。3.同时给予米诺环素干预后,小胶质细胞的活化、GluR1磷酸化水平的降低以及认知损伤得到显著缓解。【结论】1.慢性不可预期性应激能够导致认知损伤,可能是通过激活小胶质细胞从而干预了谷氨酸受体的磷酸化水平,进而影响了海马部位神经元的突触可塑性;2.米诺环素干预能够通过拮抗小胶质细胞活化从而恢复谷氨酸受体的磷酸化水平以及海马部位神经元的突触可塑性,从而对认知损伤产生保护作用。

关键词：慢性不可预期性应激小胶质细胞 G1uR1 米诺环素

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锰诱导的NLRP3/caspase-1炎症体通路的活性反应对中枢神经系统的影响

锰诱导的NLRP3/caspase-1炎症体通路的活性反应对中枢神经系统的...

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：王迪雅骆文静第四军医大学军事预防医学系军队劳动与环境卫生学教研室

【目的】研究慢性锰中毒引起的神经炎症反应对大脑中枢神经系统学习与记忆能力的影响。以慢性锰中毒的小鼠动物模型为基础,分析锰刺激下中枢神经系统中海马区以NLRP3/caspase-1炎症体所介导的固有免疫反应,具体分析该炎症体通路的激活... 详细信息

【目的】研究慢性锰中毒引起的神经炎症反应对大脑中枢神经系统学习与记忆能力的影响。以慢性锰中毒的小鼠动物模型为基础,分析锰刺激下中枢神经系统中海马区以NLRP3/caspase-1炎症体所介导的固有免疫反应,具体分析该炎症体通路的激活机制及神经炎症反应的通路机制;阐明神经炎症对大脑中枢神经系统学习与记忆能力的影响;进而为寻找控制炎症发展的关键靶点提供实验依据。【材料和方法】通过皮下注射氯化锰构建亚急性的小鼠锰中毒模型,采用原子荧光光谱法检测小鼠血锰和脑锰的浓度,采用条件恐惧箱实验法评估小鼠学习和记忆能力;通过免疫荧光化学法检测NLRP3炎症体在小鼠海马区的表达和分布;通过Western blot检测NLRP3、caspase-1炎症体,IL-1β,组织蛋白酶B(cathepsin B)蛋白的变化;通过透射电镜检测海马区细胞溶酶体损伤的情况。【结果】皮下注射氯化锰7天后,小鼠的血锰和脑锰与对照组(注射氯化钠组)相比明显升高,条件恐惧箱实验证明实验组小鼠学习与记忆能力与对照组相比明显下降;免疫荧光化学染色表明:实验组小鼠海马区的小胶质细胞活化,大量活化的小胶质细胞强烈表达NLRP3炎症体;透射电镜显示:与对照组相比,实验组海马区细胞出现了大量功能紊乱的溶酶体,其表现为溶酶体内出现高密度的微粒,自噬小体增加。而蛋白实验证明:与对照组相比,实验组中海马组织cathepsin B的蛋白表达明显升高,NLRP3蛋白表达升高;caspase-1在未被激活的情况下以pro-caspase-1的形式(45kDa)存在于细胞浆中,而在实验组中caspase-1蛋白发生剪切,出现活化状态下的caspase-1(p20),同时胞浆中的pro-IL-1β(36kDa)也发生剪切,成为成熟的IL-1β(17kDa)。【结论】慢性锰中毒导致小鼠学习记忆能力下降,而中枢神经系统中海马区与学习记忆能力密切相关;锰刺激能激活小鼠海马区的小胶质细胞活化,并激活以NLRP3/caspase-1所介导的炎症体通路,释放炎性因子IL-1β,参与固有免疫反应。我们进一步深入研究了锰激活NLRP3/caspase-1炎症体通路的激活机制。cathepsinB的释放证明了在锰刺激下,海马区出现了大量功能紊乱的溶酶体,且cathepsinB是激活NLRP3/caspase-1炎症体通路的重要分子。因此,我们推断锰刺激下,海马区出现了大量功能紊乱的溶酶体,溶酶体的损伤释放cathepsin B激活NLRP3/caspase-1炎症体通路释放IL-1β,诱发神经炎症。大量的IL-1β蓄积,慢性刺激中枢神经系统的海马区,进而引起学习记忆能力的下降。

关键词： NLRP3炎症体神经炎症锰中毒固有免疫反应

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PSD-95参与大鼠孕期铅暴露对海马突触影响的初步研究

PSD-95参与大鼠孕期铅暴露对海马突触影响的初步研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：赵再华郑刚骆文静陈景元沈学锋第四军医大学军事预防医学院军队劳动与环境卫生学教研室

【目的】研究发育期铅暴露大鼠海马组织PSD-95(Post-synaptic density protein 95)蛋白表达改变对海马突触数量的影响,初步探讨铅暴露损伤学习记忆功能的机制。【材料和方法】清洁级成年雌雄SD大鼠各12只,体重在250～300g,随机分为对照... 详细信息

【目的】研究发育期铅暴露大鼠海马组织PSD-95(Post-synaptic density protein 95)蛋白表达改变对海马突触数量的影响,初步探讨铅暴露损伤学习记忆功能的机制。【材料和方法】清洁级成年雌雄SD大鼠各12只,体重在250～300g,随机分为对照组和铅暴露组,每组雌雄各6只,通过饮用0.02%醋酸铅水溶液建立发育期铅暴露模型,利用原子吸收分光光度仪检测大鼠血铅浓度,透射电镜技术检测大鼠海马突触数目,蛋白印记技术检测大鼠海马组织中VGLUT(vesicular glutamate transporter)、VGAT(vesicularγ-aminobutyric acidtransporter)和PSD-95的蛋白表达。【结果】对照组和铅暴露组雄性21d新生鼠体重分别为55.73±4.23g和56.01±5.97g,无显著差异(P>0.05);对照组与铅暴露组雄性21d新生鼠血铅浓度分别为1.02±0.21μg/dL和30.12±3.48μg/dL,与对照组相比铅暴露组血铅水平明显升高(p<0.01);对照组与铅暴露组雄性21d新生鼠海马区域单位面积突触数目分别为32.79±2.03和23.46±1.97,与对照组相比铅暴露组突触数目显著减少(p<0.01);铅暴露后,与对照组相比,铅暴露组雄性21d新生鼠海马组织VGAT的蛋白表达量没有明显变化(p>0.05),而VGLUT和PSD-95的蛋白表达量明显减少(p<0.01)。【结论】发育期铅暴露可能是通过干扰PSD-95的蛋白表达,影响兴奋性突触的形成,导致兴奋性突触数量的减少,进而影响兴奋性突触的传递效率,损伤学习记忆功能,提示对于PSD-95蛋白的干预可能是治疗铅暴露损伤儿童学习记忆的新方法。

关键词：铅暴露海马突触 PSD-95

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