检索结果-内蒙古大学图书馆

温州医学院学报 2008年第2期38卷 115-118页

作者：沈贤沈淑蓉薛向阳林富林朱冠保方国恩温州医学院第一附属医院普外科浙江温州325000 第二军医大学附属长海医院普外科上海200433 温州医学院微生物学教研室浙江温州325035

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)在多脏器功能障碍综合征(MODS)发生过程中的变化趋势,探讨MODS发生机制及高容量血液滤过(HVHF)防治MODS的理论依据。方法:采用失血性休克复苏+内毒素血症复合因素建立猪MODS模型,将19只健康雄性家... 详细信息

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)在多脏器功能障碍综合征(MODS)发生过程中的变化趋势,探讨MODS发生机制及高容量血液滤过(HVHF)防治MODS的理论依据。方法:采用失血性休克复苏+内毒素血症复合因素建立猪MODS模型,将19只健康雄性家猪随机分成MODS组和HVHF组,HVHF组动物内毒素注射后予血液滤过,血滤采用F50聚砜膜滤器,超滤量3 L/h。Western blot法检测血浆HMGB1蛋白含量变化,并通过与各自基础值的比较,了解HMGB1蛋白相对变化趋势。结果:HVHF组2例发生MODS,占20%(2/10),显著低于MODS组88.9%(8/9)(P<0.01),主要器官功能明显改善。HMGB1蛋白水平于内毒素注射后1 h无明显升高,至24 h两组均显著升高,后呈缓慢下降趋势。HVHF组,HMGB1蛋白相对于基础值水平升高幅度明显低于MODS组。结论:HMGB1蛋白等炎症介质的过度表达是MODS发生的本质原因之一;HVHF能够降低血循环中HMGB1等炎症介质的峰值浓度,有效遏制过度的炎症反应,防止MODS发生。

关键词：多器官功能衰竭血液滤过 HMGB1蛋白

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携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

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生物工程学报 2007年第5期23卷 862-866页

作者：陈志辉赵平吴淑梅曹洁张斌万谟彬柯金山戚中田第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院实验诊断科上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现:①SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3+CD4+T细胞无明显改变;②SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示:携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式(结构以及磷酸化修饰)的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白减毒伤寒沙门菌疫苗免疫应答

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丙型肝炎病毒高变区及其变异机制

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生命的化学 2007年第2期27卷 119-122页

作者：秦照玲戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2所含的3个高变区(HVR1/2/3)是HCV基因组中变异程度最高的部分,参与病毒识别、黏附和入侵等过程。了解HVR的特点、变异规律及其生物学意义,不仅有利于阐明HCV持续感染及耐药机制,还可为未来HCV疫苗和新型... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2所含的3个高变区(HVR1/2/3)是HCV基因组中变异程度最高的部分,参与病毒识别、黏附和入侵等过程。了解HVR的特点、变异规律及其生物学意义,不仅有利于阐明HCV持续感染及耐药机制,还可为未来HCV疫苗和新型治疗药物的设计提供理论依据。

关键词：丙型肝炎病毒 E2蛋白高变区变异机制

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TNF-α对子宫内膜间质细胞VEGF表达的影响

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生殖与避孕 2007年第7期27卷 450-453,493页

作者：王建军李怀芳廖小玲同济大学附属同济医院妇产科上海200065 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的子宫内膜异位症(EMs)在位内膜间质细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用MTS法分析TNF-α对来自EMs和非EMs症各10例患者的在位子宫内膜间质细胞生长的影响;并以荧光定量PCR、Western blot和定量ELISA检测不同浓度TNF-α作用下间质细胞VEGF的表达情况。结果:TNF-α呈剂量依赖方式促进EMs患者子宫内膜间质细胞的生长,并显著上调VEGF的表达;但对非EMs患者的子宫内膜间质细胞无上述作用。结论:TNF-α能明显促进EMs患者在位内膜间质细胞的生长并促进其VEGF的表达。

关键词：子宫内膜异位症(EMs) 间质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 血管内皮生长因子(VEGF)

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噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

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中国药理学通报 2007年第3期23卷 403-406页

作者：卢海妹周波潘卫贾建安王锦红温宗梅何俊陈露邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行... 详细信息

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 蛋白酶耐药突变噬菌体展示文库

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六种粘细菌095B06次生代谢产物的分离、鉴定及初步生物学活性研究

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第二军医大学学报 2007年第3期28卷 266-271页

作者：施晓琼许强芝刘小宇韩文菊刘新利焦炳华李越中第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433 山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室济南250100

目的：研究粘细菌的活性次生代谢产物的分离、鉴定及生物学活性。方法：利用稻瘟霉模型筛选活性菌株,对活性菌株Myxococcus xanthus 095B06发酵液的甲醇提取物采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等手段进行分离纯化化学成分,通过... 详细信息

目的：研究粘细菌的活性次生代谢产物的分离、鉴定及生物学活性。方法：利用稻瘟霉模型筛选活性菌株,对活性菌株Myxococcus xanthus 095B06发酵液的甲醇提取物采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等手段进行分离纯化化学成分,通过^1HNMR1、^13CNMR和ESI-MS对化合物进行结构鉴定,利用纸片扩散法和四甲基偶氮唑盐比色法对单体化合物进行生物活性评价。结果和结论：从粘细菌095B06发酵液中分离鉴定了4个大环内酯类化合物、1个甾醇类化合物及1个生物碱类化合物,它们分别为Avermectin A1a（1）、Avermectin A2a（2）、Avermectin B1a（3）、Avermectin B2a（4）、麦角甾-7,22-双烯-3,5,6-三醇（赛勒维甾醇）（5）和4-喹啉羧酸（6）。化合物1-5为首次从粘细菌中分离得到,且化合物2和4对肿瘤细胞SMMC-7721具有较强的抑制作用,其IC50均为5μg/ml。

关键词：粘球菌目代谢产物生物学活性

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庚型肝炎病毒抑制人类免疫缺陷病毒感染及其机制

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微生物与感染 2007年第1期2卷 56-58页

作者：曹明媚戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)是10年前发现的单正链RNA病毒,属黄病毒科,病毒基因组RNA长约9.4kb,含1个开放读码框架,编码2900左右的氨基酸。目前大部分研究提示HGV是非致病性的,因此有学者建议称其为GBV-C以区别于肝炎病毒,本文中一并称为HG... 详细信息

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)是10年前发现的单正链RNA病毒,属黄病毒科,病毒基因组RNA长约9.4kb,含1个开放读码框架,编码2900左右的氨基酸。目前大部分研究提示HGV是非致病性的,因此有学者建议称其为GBV-C以区别于肝炎病毒,本文中一并称为HGV。HGV在人群中有很高的感染率,传播途径与人类免疫缺陷病毒(HIV)相似,且更倾向于血液与垂直传播。HGV常与人类免疫缺陷病毒(HW)合并感染,约20%－50%的HW感染者中HGVRNA阳性。[第一段]

关键词：人类免疫缺陷病毒肝炎病毒病毒感染病毒抑制正链RNA病毒机制开放读码框架病毒基因组

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沙利度胺对子宫内膜异位症的内膜间质细胞体外表达VEGF的影响

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中国新药与临床杂志 2007年第9期26卷 641-645页

作者：王建军李怀芳赵平同济大学附属同济医院妇产科上海200065 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤... 详细信息

目的:观察沙利度胺(ThD)对子宫内膜异位症病人内膜间质细胞的增殖及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:刮取子宫内膜异位症病人的子宫内膜组织,经体外分离、培养,用波形蛋白单抗进行免疫组化染色鉴定,应用四唑盐(MTS)分析肿瘤坏死因子α(TNF-α)和ThD对间质细胞生长的影响,以实时荧光定量PCR、Western Blot和定量ELISA分析在存在外源TNF-α的情况下,不同浓度ThD对间质细胞表达VEGF的影响。结果:TNF-α能促进子宫内膜间质细胞的增殖和分泌VEGF,而ThD能剂量依赖性抑制内膜间质细胞的增殖,并逆转TNF-α对VEGF的上调作用。结论:ThD可抑制体外培养的子宫内膜异位症内膜间质细胞的增殖及其VEGF的表达和分泌,提示ThD对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。

关键词：沙利度胺子宫内膜异位症体外研究血管内皮生长因子

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基于16S rDNAs的快速检测血液细菌污染的荧光定量PCR研究

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2007年第4期1卷 203-209页

作者：王永智薛利军任浩赵平朱诗应李冕戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433

目的探讨快速筛选血液及血液制品中细菌污染的方法。方法对20余种常见致病性细菌的16SrDNAs进行多序列比对,设计扩增细菌16SrDNAs基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)通用引物。以12种致病菌、2种真菌、1种支原体、1种病毒和人基因组DNA为模板,... 详细信息

目的探讨快速筛选血液及血液制品中细菌污染的方法。方法对20余种常见致病性细菌的16SrDNAs进行多序列比对,设计扩增细菌16SrDNAs基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)通用引物。以12种致病菌、2种真菌、1种支原体、1种病毒和人基因组DNA为模板,验证通用引物检测细菌的特异性。通用引物扩增金黄色葡萄球菌16SrDNA靶片段,构建标准质粒pMDT-Bfr,并建立FQ-PCR定量标准曲线。分别以金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作为革兰阳性和革兰阴性细菌代表菌,以其不同浓度的DNA为模板进行FQ-PCR反应,检验该方法的敏感性。抽提梯度稀释的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌模拟血液细菌污染标本的总DNA作为FQ-PCR反应模板,检验基于16SrDNAs的FQ-PCR作为血液细菌污染检测方法的敏感性。结果设计的FQ-PCR通用引物有较高的特异性,仅能检测出细菌的16SrDNAs;用该方法检测革兰阳性和革兰阴性菌,对于浓度在103拷贝/μl以上的16SrDNAs基因都可以准确定量;以该方法检测血液细菌污染模拟标本,灵敏度可达到105CFU/ml。结论初步建立了以16SrDNAs作为FQ-PCR靶基因快速检测血液细菌污染的方法。该方法特异性强、灵敏度高、成本低廉,具有很好的研究价值与应用前景。

关键词：细菌污染 16S rDNAs 荧光定量PCR

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HCV2a(JFH1)NS5A蛋白在原核和真核细胞中的表达、鉴定及分析

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热带医学杂志 2007年第11期7卷 1039-1043,F0004页

作者：王永智任浩丁惠赵平薛利军潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433

目的在原核与真核细胞中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)2a型JFH1(japanese fulminanthepatitis 1)株NS5A蛋白,分析JFH1NS5A蛋白与其它基因型NS5A蛋白间的差异,为进一步研究NS5A蛋白在HCV病毒复制中的作用奠定基础。方法PCR特... 详细信息

目的在原核与真核细胞中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)2a型JFH1(japanese fulminanthepatitis 1)株NS5A蛋白,分析JFH1NS5A蛋白与其它基因型NS5A蛋白间的差异,为进一步研究NS5A蛋白在HCV病毒复制中的作用奠定基础。方法PCR特异扩增JFH1NS5A基因,克隆入pET-32a和pEGFP-N1载体中,构建JFH1NS5A的原核和真核重组表达质粒pET-JFH1NS5A和pEGFP-JFH1NS5A。将pET-JFH1NS5A转化大肠杆菌BL21(DE3),pEGFP-JFH1NS5A转染HEK293T细胞,在原核与真核系统中进行表达,并以SDS-PAGE、荧光显微术和Westernblot方法检测。利用PubMedBLAST软件对JFH1与HCV1a、1b、2b和2c型NS5A蛋白间的同源性进行了分析。结果酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pET-JFH1NS5A和pEGFP-JFH1NS5A。SDS-PAGE电泳检测到融合蛋白在原核细胞中的表达,荧光显微镜观察和Westernblot检测到了GFP-JFH1NS5A融合蛋白在HEK293T细胞中表达。BLAST分析显示,JFH1和H77、HC-J4、HCV-J8和BEBE1病毒株NS5A蛋白的同源性分别为57%、60%、68%和74%。结论JFH1NS5A蛋白在原核与真核细胞中表达成功,为研究HCVNS5A在JFH1株病毒高效复制中的作用提供了材料。

关键词：丙型肝炎病毒 JFH1株 NS5A蛋白表达鉴定

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