检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1243-1247页

作者：周波贾建安温宗梅邓松华蒋少华陈秋莉潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR... 详细信息

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

关键词： HIV-1 蛋白酶切割位点序列随机化噬菌体展示文库

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RNA干扰与抗病毒感染

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微生物学杂志 2005年第5期25卷 83-86页

作者：曹明媚戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的生物细胞内同源基因的转录后基因沉默(PTGS)现象,是一种古老的生物抵抗外在感染的防御机制。RNAi因其在维持基因组稳定、调控基因表达和保护基因组免受外源核酸侵入等方面发挥的重要作用,已被... 详细信息

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的生物细胞内同源基因的转录后基因沉默(PTGS)现象,是一种古老的生物抵抗外在感染的防御机制。RNAi因其在维持基因组稳定、调控基因表达和保护基因组免受外源核酸侵入等方面发挥的重要作用,已被广泛用于探索基因功能、基因治疗和新药的研发。外源导入siRNA引发的RNAi可以特异性抑制病毒的复制与感染,为抗病毒感染治疗开辟了一条新的途径。

关键词： RNA干扰小干扰RNA 病毒复制病毒感染

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丙型肝炎病毒样颗粒疫苗的研究现状

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国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册） 2005年第1期28卷 5-7,4页

作者：朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒 (HCV)的高度变异性与缺乏合适的体外细胞培养系统这两大因素制约了HCV疫苗的研发。近年来在昆虫细胞内合成的病毒样颗粒 (VL P)受到了较大关注。本文从 VL P的形成及其理化特性、抗原性与免疫原性、表面结构、与细胞相互... 详细信息

丙型肝炎病毒 (HCV)的高度变异性与缺乏合适的体外细胞培养系统这两大因素制约了HCV疫苗的研发。近年来在昆虫细胞内合成的病毒样颗粒 (VL P)受到了较大关注。本文从 VL P的形成及其理化特性、抗原性与免疫原性、表面结构、与细胞相互作用等方面进行综述 ,分析 VL

关键词：丙型肝炎病毒病毒样颗粒真核细胞疫苗

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用体内激活的启动子调控HCV核心抗原表达可增强重组鼠伤寒沙门氏菌的免疫原性

用体内激活的启动子调控HCV核心抗原表达可增强重组鼠伤寒沙门氏...

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第八次全国生物制品学术会议

作者：廖小玲赵平曹洁潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中.体外培养时,Mg2+能够剂量依赖性抑... 详细信息

为提高抗原表达质粒在重组伤寒沙门氏菌中的稳定性以增强重组伤寒沙门氏菌诱导的免疫应答,克隆鼠伤寒沙门氏菌pagC基因启动子,以其为转录调控元件构建HCV核心抗原表达质粒,转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中.体外培养时,Mg2+能够剂量依赖性抑制该重组菌表达HCV核心抗原.将该重组菌和组成性表达的重组菌分别口服接种BALB/c小鼠,观察质粒的稳定性和小鼠的免疫应答.结果表明,体内激活的pagC基因启动子能明显提高质粒在重组鼠伤寒沙门氏菌中的稳定性和增强重组菌诱导的体液和细胞免疫应答,这为发展高效免疫、成本低廉的口服丙肝疫苗提供了一个新思路.

关键词：体内激活启动子减毒鼠伤寒沙门氏菌丙型肝炎病毒免疫应答丙肝疫苗

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葡萄糖苷酶Ⅰ特异性siRNA-EGFP真核表达载体的构建及表达

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武汉大学学报（医学版） 2005年第2期26卷 190-193,i002页

作者：李冬青章晓联戚中田武汉大学医学院免疫学系武汉430071 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的:构建葡萄糖苷酶Ⅰ(glucosidaseⅠ, GluⅠ)特异性siRNA真核表达载体。方法:根据 siRNA靶序列选取原则,设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶ⅠcDNA的寡聚DNA,退火并连接至载体 pSilencer1.0 U6,再将 U6 启动子及下游插入片断一起切下,克隆至... 详细信息

目的:构建葡萄糖苷酶Ⅰ(glucosidaseⅠ, GluⅠ)特异性siRNA真核表达载体。方法:根据 siRNA靶序列选取原则,设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶ⅠcDNA的寡聚DNA,退火并连接至载体 pSilencer1.0 U6,再将 U6 启动子及下游插入片断一起切下,克隆至真核表达载体 pEGFP C1,通过限制性酶切和测序对重组表达载体进行鉴定,最后将该质粒转染至HeLa细胞,共聚焦荧光显微镜观察其表达。结果:①限制性酶切和测序结果表明成功构建了带有EGFP基因的鼠GluⅠ特异性的siRNA真核表达载体 pC 1U6glu; ②共聚焦荧光显微镜观察结果表明p C1U6glu成功转染至HeLa细胞。结论:pC 1U6glu的成功构建及表达为进一步利用 siRNA研究葡萄糖苷酶Ⅰ的功能和治疗肿瘤奠定基础。

关键词：葡萄糖苷酶Ⅰ siRNA 真核表达载体

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小干扰RNA对庚型肝炎病毒基因在人Huh-7细胞中表达的抑制作用

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中国科学（C辑） 2004年第4期34卷 343-349页

作者：曹明媚任浩赵平潘卫赵兰娟戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的生物细胞内同源基因的转录后基因沉默现象, 是近年来兴起的一项研究生物基因调控与功能的崭新技术. 庚型肝炎病毒(HGV)是一单正链RNA病毒, 复制时不与宿主细胞基因组整合, 尤其适合用于RNAi的研... 详细信息

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的生物细胞内同源基因的转录后基因沉默现象, 是近年来兴起的一项研究生物基因调控与功能的崭新技术. 庚型肝炎病毒(HGV)是一单正链RNA病毒, 复制时不与宿主细胞基因组整合, 尤其适合用于RNAi的研究. 构建了含HGV完整结构基因并携带筛选标志潮霉素基因的真核表达载体***, 转染Huh-7细胞后, 筛选获得稳定表达HGV 结构蛋白的Huh-7细胞株(Huh-7-EH). RT-PCR和Western blot检测证实, HGV结构基因能在Huh-7-EH细胞中转录、表达, 并能进行剪切和翻译后修饰. 以体外转录法制备了2对靶向HGV E2基因的siRNA(1-E2 siRNA和2-E2 siRNA), 将其导入Huh-7-EH细胞中, 采用Western blot和克隆形成实验证实, HGV 1-E2 siRNA和2-E2 siRNA均能特异性抑制HGV结构蛋白的表达, 抑制作用可维持1周以上. 其中2-E2 siRNA的抑制作用更强, 转染后对Huh-7-EH细胞潮霉素抗性克隆形成的抑制率达到了99%. Huh-7-EH细胞转染siRNA后对潮霉素敏感, 说明HGV E2 siRNA不仅使HGV E2区的mRNA降解, 还可使融合在HGV E2区下游的潮霉素mRNA降解. 综上所述, 本实验建立的稳定表达HGV结构蛋白的Huh-7-EH细胞株, 能作为用于研究HGV复制和RNAi的细胞模型; HGV结构基因区的siRNA可同时抑制HGV结构蛋白及其?

关键词：小干扰RNA 庚型肝炎病毒结构基因细胞模型基因表达

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SARS疫苗研究的动态

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第12期24卷 1011-1013页

作者：赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

一、动物模型问题　　Fouchier等[1]首先将SARS-CoV经呼吸道感染猕猴(Cynomolgus macaque),发现猕猴能产生SARS症状,肺组织出现典型的人类SARS病理改变.该发现不仅为确认SARS的病原体提供了佐证,也表明猴子可用作抗SARS药物及疫苗研究... 详细信息

一、动物模型问题　　Fouchier等[1]首先将SARS-CoV经呼吸道感染猕猴(Cynomolgus macaque),发现猕猴能产生SARS症状,肺组织出现典型的人类SARS病理改变.该发现不仅为确认SARS的病原体提供了佐证,也表明猴子可用作抗SARS药物及疫苗研究的动物模型,中国学者在猴体重复出类似的结果.但随后,至少3家北美的实验室在重复该试验时遇到问题:无一只猴子出现明显的临床症状,猴子的肺部也未发现明显的病理改变.猴子的遗传背景可能影响其对SARS-CoV的易感性,故有些研究者已经放弃了以猴子作为SARS的动物模型[2]。

关键词： SARS疫苗猴体抗SARS药物 SARS病疫苗研究病理改变肺组织猕猴猴子发现

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庚型和丙型肝炎病毒的全长cDNA克隆在体内外的表达与复制(英文)

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第二军医大学学报 2004年第4期25卷 389-393页

作者：王宏卫潘欣戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 W... 详细信息

目的 :研究 HGV和 HCV的复制和表达。方法 :利用 HGV全长 c DNA克隆 (HGVqz)及 HCV1 a/ 1 b嵌合体 c DNA克隆分别构建表达质粒 p3.1 HGV和 p3.1 HCV并转染张氏肝细胞 ,以 HGVqz克隆建立 HGV转基因小鼠。分别应用 RT- PCR、免疫组化及 Western印迹分析病毒正、负链 RNA,蛋白表达和剪切。结果 :在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞及 HGV转基因小鼠某些组织中可检出相应病毒的负链 RNA,但在转染 p3.1 HGV的张氏肝细胞中未能检出 HGV负链 RNA。Western印迹在转染 p3.1 HCV的张氏肝细胞中检测到针对 HCV NS3蛋白、相对分子质量约 70 0 0 0的特异性条带 ,在 HGV转基因小鼠某些组织中检测到 2条特异性条带 ,相对分子质量约 4 2 0 0 0和 1 0 0 0 0 0 ,分别相当于 HGV E2蛋白及其剪切中间体。然而 ,在转染p3.1 HGV的张氏肝细胞中检测到针对 HGV E2蛋白的特异性条带 ,其相对分子质量约为 31 0 0 0 0 ,相当于 HGV整个前体蛋白。结论 :HGV的表达与复制在体内、外存在差异。细胞内某些特异性因子在病毒前体蛋白剪切中起重要作用 ,HGV和 HCV前体蛋白剪切所需宿主因子可能存在差异。

关键词：庚型肝炎病毒全长cDNA克隆表达复制丙型肝炎病毒

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HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 962-965页

作者：朱诗应赵平任浩赵兰娟戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fa... 详细信息

目的 :构建含 HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白 E2基因的重组杆状病毒表达载体 ,研究其表达和抗原性。方法 :以含 HCV全长 c DNA克隆的 p GEM- HCJ4质粒为模板 ,PCR扩增全长的 HCV核心抗原基因和截短的 E2基因片段 ,插入转座载体 p Fast Bac HTa构建重组转座质粒 p FB- CE2 t,转化 DH10 Bac大肠杆菌 ,获得重组杆状病毒穿梭质粒 Bacmid- CE2 t,以之转染昆虫 Sf9细胞进行外源基因的表达 ,并对其抗原性进行 EL ISA检测。结果 :SDS- PAGE和 Western blot分析表明Bacmid- CE2 t在 Sf9细胞表达了 HCV C- E2蛋白 ,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的 C蛋白和截短的 E2蛋白。纯化后的蛋白能分别与 HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应。结论 :HCV核心蛋白和截短的

关键词：肝炎病毒,丙型核心蛋白截短的E2蛋白昆虫Sf 9细胞

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SARS-CoV核衣壳蛋白抗原性鉴定和基因免疫研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第8期24卷 591-594页

作者：柯金山赵平张景熙秦照玲于嘉屏戚中田第二军医大学附属长征医院实验诊断科上海200003 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院呼吸科

目的　了解SARS冠状病毒 (SARS CoV)核衣壳蛋白 (N蛋白 )的抗原性及其基因疫苗的免疫原性。方法　用大肠杆菌表达SARS CoV的N蛋白 ,用SARS患者恢复期血清对其进行抗原性鉴定。再构建N蛋白基因疫苗 ,肌肉注射接种小鼠 ,检测小鼠血清中的... 详细信息

目的　了解SARS冠状病毒 (SARS CoV)核衣壳蛋白 (N蛋白 )的抗原性及其基因疫苗的免疫原性。方法　用大肠杆菌表达SARS CoV的N蛋白 ,用SARS患者恢复期血清对其进行抗原性鉴定。再构建N蛋白基因疫苗 ,肌肉注射接种小鼠 ,检测小鼠血清中的抗N蛋白IgG抗体、脾细胞增殖和迟发型超敏反应。结果　大肠杆菌重组表达的SARS CoVN蛋白具有强抗原性 ,其基因疫苗能在小鼠有效诱导N蛋白特异性抗体和CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞免疫应答。结论　SARS CoV的N蛋白可作为重要的SARS血清学诊断抗原 ,并对于SARS的特异性预防和治疗有潜在的应用价值。

关键词： SARS-CoV核衣壳蛋白抗原性基因免疫基因疫苗 SARS冠状病毒

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