检索结果-内蒙古大学图书馆

蛋白激酶与蛋白磷酸酶在细胞增殖分化中的机制研究

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第二军医大学学报 2004年第5期25卷 550-552页

作者：刘善荣刘厚奇戚中田赵兰娟王凤玫冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室 Burnham Institute

细胞生长发育和癌变过程中有众多复杂的信号转导途径以及信号分子参与,其中最基本的生化反应过程是系列蛋白质(信号分子)的磷酸化.

关键词：蛋白激酶蛋白磷酸酶细胞增殖细胞分化

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重组人淋巴毒素随机点突变组合文库的构建

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生物工程学报 2004年第1期20卷 43-48页

作者：沈毅珺潘卫徐容潘欣王罗春王征曹峰谭靖伟吴劲松吴芳刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 上海复旦张江生物医药股份有限公司上海201203

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因... 详细信息

构建重组人淋巴毒素 (rhLT)随机点突变组合文库以进行体外分子进化及结构和功能的研究。应用含随机核苷酸序列的引物 ,通过OverlapPCR的方法分别对rhLT的 4 6、10 6和 130位氨基酸进行定点随机突变 ,获得各单点随机突变体库。通过基因操作将这三个单点随机突变体库拼接并克隆于pMD_18T载体建立三点组合突变体文库 ,DNA测序鉴定突变位点的随机性和多样性 ,原核表达该变异体库 ,体外测定生物学活性。成功获得rhLT三点随机点突变组合文库 ,其转化克隆数达到 1 5× 10 5,是多样性理论值的 4 5倍。 5 0个样品的序列分析显示各个位点的核苷酸和氨基酸序列的突变都呈随机性分布。对原核表达的 30个样品进行生物学活性测定 ,结果 70 % (2 1个 )的样品无活性、2 3 3% (7个 )的样品活性低于rhLT、6 7% (2个 )的样品活性高于rhLT。成功构建了rhLT随机点突变组合文库 ,该库不仅在一级结构上具有良好的随机性和多样性 ,而且具有生物学活性的多样性 ,为应用噬菌体展示等高通量筛选策略对淋巴毒素进行体外分子进化和结构与功能的深入研究打下了基础。

关键词：淋巴毒素随机突变分子进化点突变组合文库

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基因治疗载体的研究进展

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国外医学（肿瘤学分册） 2004年第1期31卷 22-26页

作者：曹明媚戚中田第二军医大学微生物学教研室，上海200433

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等 ,其中病毒载体又新出现了牛痘病... 详细信息

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等 ,其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等。但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的 ,还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体。

关键词：基因治疗载体研究进展基因靶向转移腺相关病毒腺病毒逆转录病毒恶性肿瘤

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丙型肝炎疫苗相关研究进展

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肝脏 2004年第4期9卷 258-260页

作者：赵平戚中田上海第二军医大学微生物学教研室 200433

丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus，HCV)是经血液传播的肝炎的主要病原体之一，目前全球约有1．7亿HCV感染者。HCV感染者自然痊愈较为少见，大部分演变为慢性肝炎。病毒与免疫应答共存是HCV慢性感染的一个重要特点，HCV抗原的特异性体液... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus，HCV)是经血液传播的肝炎的主要病原体之一，目前全球约有1．7亿HCV感染者。HCV感染者自然痊愈较为少见，大部分演变为慢性肝炎。病毒与免疫应答共存是HCV慢性感染的一个重要特点，HCV抗原的特异性体液与细胞免疫应答均可在慢性HCV感染者体内检测到。然而这些免疫应答对HCV的持续复制似乎并无遏制力，这个特点也决定了发展丙型肝炎疫苗必然面临重重困难。

关键词：丙型肝炎疫苗慢性HCV感染相关研究进展细胞免疫应答痊愈 HCV抗原体内检测丙型肝炎病毒慢性肝炎血液传播

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丙型肝炎病毒受体及其感染机制

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生命的化学 2004年第3期24卷 205-207页

作者：秦照玲曹洁戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

病毒与宿主细胞的吸附是病毒感染的第一步 ,其相互作用决定了病毒的宿主范围和组织、细胞的易感性。丙型肝炎病毒 (HCV)受体的研究。

关键词：丙型肝炎病毒受体感染机制

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丙型肝炎疫苗相关研究的进展

丙型肝炎疫苗相关研究的进展

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第六次全国微生物学与免疫学大会

作者：赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒是经血液传播的肝炎的主要病原体之一,目前全球的HCV感染者约1.7亿.HCV感染自然痊愈较为少见,大部分演变为慢性感染.病毒与免疫应答共存是HCV慢性感染的一个重要特点,HCV抗原特异性体液与细胞免疫应答均可在HCV慢性感染者... 详细信息

丙型肝炎病毒是经血液传播的肝炎的主要病原体之一,目前全球的HCV感染者约1.7亿.HCV感染自然痊愈较为少见,大部分演变为慢性感染.病毒与免疫应答共存是HCV慢性感染的一个重要特点,HCV抗原特异性体液与细胞免疫应答均可在HCV慢性感染者体内检测到,然而这对于HCV的持续复制似乎并无遏制之力,这个特点也决定了发展丙型肝炎疫苗必然面临重重困难.HCV为单股正链RNA病毒,其基因组全长约9.5Kb,编码一个开放阅读框架,翻译成的一个多聚蛋白前体被宿主和病毒自身蛋白酶加工为结构蛋白非结构蛋白(NS3,NS4和NS5等).病毒RNA的频繁变异可能是HCV得以长期与免疫应答相抗衡的主要手段,也为人类对其的控制带来了难题.毫无疑问,用疫苗诱生中和抗体是预防病原微生物感染的最有效的特异性预防措施,然而,以HCV某一种或联合几种抗原作为疫苗接种动物模型,虽然能诱导相应的抗体反应,但并不能产生疫苗所要求的保护作用.于是,求助于细胞免疫应答成为人们的又一选择.随着对HCV生物学及其与人体相互作用过程了解的日益深入,种种初现希望的丙肝疫苗策略也开始浮出水面.本文对丙肝研究进展进行了介绍。

关键词：丙型肝炎肝炎疫苗微生物学免疫学

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HCV结构蛋白重组杆状病毒表达载体的构建

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嘉兴学院学报 2004年第3期16卷 101-103页

作者：李菲朱诗应嘉兴学院生物与化学工程学院浙江嘉兴314001 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒 ( HCV)结构蛋白的核心蛋白 ( C)和包膜蛋白 2 ( E2 )含有多个 T细胞表位和中和抗体表位 ,可诱导机体产生保护性免疫应答。该实验用 PCR扩增 HCV结构区基因 ,克隆到载体 p Fast Bac1中 ,构建了重组杆状病毒表达载体 p FB1 -... 详细信息

丙型肝炎病毒 ( HCV)结构蛋白的核心蛋白 ( C)和包膜蛋白 2 ( E2 )含有多个 T细胞表位和中和抗体表位 ,可诱导机体产生保护性免疫应答。该实验用 PCR扩增 HCV结构区基因 ,克隆到载体 p Fast Bac1中 ,构建了重组杆状病毒表达载体 p FB1 -CEE,为

关键词：丙型肝炎病毒结构蛋白杆状病毒表达栽体克隆

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噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

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第14次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：沈毅珺潘卫许燕王征杨彤谭靖伟吴劲松吴芳曹峰刘彦君第二军医大学基础医学部微生物学教研室(上海) 上海复旦张江生物医药股份有限公司(上海) 第二军医大学基础医学部微生物学教研室(上海) 上海复旦张江生物医药股份有限公司(上海)

淋巴毒素(Lymphotoin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106~F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相比TN... 详细信息

淋巴毒素(Lymphotoin,LT)通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性.对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT)R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106~F110区域随机突变体库.噬菌体库与固相比TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80﹪的克隆与TNFR1受体特异性结合,25﹪的克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT.将结合力高的4个突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30﹪,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90﹪.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试为下一步的蛋白结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.

关键词：淋巴毒素随机突变噬菌体展示亲和筛选抗肿瘤活性

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新型噬菌体展示载体pCANTAB5S的构建

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安徽医科大学学报 2004年第2期39卷 83-86页

作者：徐容潘卫沈毅陈秋莉潘欣冯春芝戚中田刘彦君邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海200433 复旦张江生物医药股份公司上海200000

目的　进一步改造噬菌体展示载体 ,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库。方法　以 pCANTAB5X IFN α2b重组质粒为模板 ,在上游引物中引入XbaⅠ、SacⅠ酶切位点 ,在下游引物中引入SacⅠ、StuⅠ、SalⅠ酶切位点 ,将用该引物扩增的IFN... 详细信息

目的　进一步改造噬菌体展示载体 ,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库。方法　以 pCANTAB5X IFN α2b重组质粒为模板 ,在上游引物中引入XbaⅠ、SacⅠ酶切位点 ,在下游引物中引入SacⅠ、StuⅠ、SalⅠ酶切位点 ,将用该引物扩增的IFN α2b衔接片段PCR产物克隆到pMD18 T中 ,再将该片段用XbaⅠ和SalⅠ酶切并将之插入pCANTAB5L的XbaⅠ和SalⅠ位点中 ,经SacⅠ酶切 ,线性载体片段自连 ,构成新型噬菌体展示载体 pCANTAB5S。结果　限制酶切位点SacⅠ被引入到噬菌体展示载体 ,并校正了pCANTAB5L载体StuⅠ、SalⅠ等位点的读框。结论　成功构建了含读框正确的SacⅠ等多个克隆位点的新型噬菌体展示载体pCANTAB5S ,可用于各种外源随机多肽文库的有效展示。

关键词：噬菌体 pCANTAB5S 遗传学质粒遗传载体肽库

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腺病毒介导mIFN-β基因转染的小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性

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安徽医科大学学报 2004年第2期39卷 97-100页

作者：吴云徐容曹广文潘卫陈秋莉沈毅蔡春晓邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海200433 复旦张江生物医药股份公司上海200000

目的　研究腺病毒 (Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性。方法　用Ad为载体将mIFN β基因导入B16细胞 ,观察mIFN β基因转染的B16细胞的体外增殖能力及免疫原性的改变。结果　当MOI为 5 0～ 10 0 ,即可获得... 详细信息

目的　研究腺病毒 (Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性。方法　用Ad为载体将mIFN β基因导入B16细胞 ,观察mIFN β基因转染的B16细胞的体外增殖能力及免疫原性的改变。结果　当MOI为 5 0～ 10 0 ,即可获得较高的转染效率 ,达 90 %± 1% ,转染细胞能表达分泌mIFN β并具有生物学活性 ;AdmIFN β感染对B16细胞的增殖能力无影响 ,但能显著提高细胞表面MHC Ⅰ类抗原的表达。结论　Ad载体具有较高的转移效率 ,并能使其携带的mIFN β基因有效表达 ;AdmIFN β转染的B16细胞的免疫原性显著增强。提示利用Ad载体携带有效的目的基因来治疗肿瘤甚至开发瘤苗是可行的。

关键词：腺病毒 mIFN-β基因转染小鼠黑色素瘤体外生物学特性瘤细胞

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