检索结果-内蒙古大学图书馆

疾病控制杂志 2003年第2期7卷 103-105页

作者：张寿国潘卫李慧邓松华仇小芳朱扬安徽医科大学病理生理学教研室安徽合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海200433 上海复旦大学医学院上海200032

目的　研究输血后肝炎病人的基因型 ,探讨 HCV抵抗 IFN疗效的作用机制。方法　以RT- PCR从慢性丙肝病人血清中扩增一段 4 86 bp的 c DNA片段作目的基因 ,插入 PQE30的多克隆位点 ,构建重组质粒 PQE30 - NS5 A- 1U 1D。结果　应用限制酶... 详细信息

目的　研究输血后肝炎病人的基因型 ,探讨 HCV抵抗 IFN疗效的作用机制。方法　以RT- PCR从慢性丙肝病人血清中扩增一段 4 86 bp的 c DNA片段作目的基因 ,插入 PQE30的多克隆位点 ,构建重组质粒 PQE30 - NS5 A- 1U 1D。结果　应用限制酶酶切和测序分析 ,证实 PQE30 -NS5 A- 1U1D中克隆基因是 HCVJ的 NS5 A部分序列 ,核苷酸和氨基酸序列同源性均在 90 %以上 ,包含有干扰素敏感决定区 (ISDR)。结论　血清学抗体检测 NS5 A片段对 HCV诊断有独特的应用价值。

关键词： C型肝炎样病毒属遗传学序列分析

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信号肽和辅助性T细胞表位增强HBV核心抗原DNA疫苗诱导的免疫应答

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生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 341-346页

作者：赵平赵兰娟曹洁洪海燕戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学微生物学教研室上海200433

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HB... 详细信息

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HBcAg的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明前者诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过后者 ,且更趋向于T辅助细胞 1(Th1)型免疫应答 ,故其对慢性HBV感染的治疗可能有潜在的应用价值

关键词：乙型肝炎病毒 DNA疫苗信号肽辅助性T淋巴细胞表位免疫应答

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庚型肝炎病毒基因组RNA的实验转染

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中华传染病杂志 2002年第3期20卷 144-147,I001页

作者：任浩朱分禄戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　研究庚型肝炎病毒 (HGV)对恒河猴的致病性及其在恒河猴体内的复制和表达。方法　体外转录制备全长HGV基因组RNA ,肝内注射感染BY1猴 ,9个月后取其阳性血清感染BM 1猴 ,7个月后取BM 1阳性血清感染BB1。采用RT PCR、原位杂交、定量... 详细信息

目的　研究庚型肝炎病毒 (HGV)对恒河猴的致病性及其在恒河猴体内的复制和表达。方法　体外转录制备全长HGV基因组RNA ,肝内注射感染BY1猴 ,9个月后取其阳性血清感染BM 1猴 ,7个月后取BM 1阳性血清感染BB1。采用RT PCR、原位杂交、定量PCR和免疫学、血清酶学、组织病理学等方法 ,对HGV的感染性及致病性进行了研究。结果　BY1、BM1和BB1实验猴感染后 ,分别在第 3、8和 3周血清HGVRNA阳转 ,持续存在最长达 2 1周。血清丙氨酸转移酶 (ALT)均升高 ,最高达 418IU/L。感染后血清中均检测出抗 HGV。肝组织检查呈现轻度肝炎样变 ,并检测到HGVmRNA和HGVE2蛋白在肝组织中的表达。结论　体外转录的HGV基因组RNA对恒河猴具有感染性 ,可在恒河猴中传代感染并引起肝组织轻微炎症改变。恒河猴对HGV感染敏感。

关键词：庚型肝炎病毒基因组RNA 实验转染恒河猴

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丙型肝炎病毒感染与细胞异常信号转导

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中国科学基金 2002年第1期16卷 23-27页

作者：赵兰娟戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

细胞信号转导异常同人类疾病的关联是目前生命科学研究的热点之一,对揭示疾病发生的本质具有极其重要的作用。一些病毒的致病机制即源于其抗原所致宿主细胞内信号转导的紊乱,病毒抗原通过蛋白质-蛋白质间相互作用而调控细胞内信号分子... 详细信息

细胞信号转导异常同人类疾病的关联是目前生命科学研究的热点之一,对揭示疾病发生的本质具有极其重要的作用。一些病毒的致病机制即源于其抗原所致宿主细胞内信号转导的紊乱,病毒抗原通过蛋白质-蛋白质间相互作用而调控细胞内信号分子的生物活性。丙型肝炎病毒是丙型肝炎的致病因子,其感染的明显特征为引起严重肝脏疾病及易于慢性迁延且无满意的治疗药物。迄今关于丙型肝炎发病机制和病毒持续存在的分子基础仍不清楚。病毒蛋白通过干扰宿主细胞内信号转导级联反应而致异常信号转导很可能为其致病机制,故丙型肝炎病毒各种蛋白对宿主细胞信号转导影响的研究将有助于从一全新角度深入了解其致病机制,从而提出病毒致病的新模式。

关键词：丙型肝炎病毒致病机制细胞信号导异常

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HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 576-582页

作者：赵平姜春鹏赵兰娟温新宇戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433 东北农业大学生物工程系哈尔滨150030

构建编码HBV包膜核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因... 详细信息

构建编码HBV包膜核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度 ,发现融合基因DNA疫苗诱生抗体的效率明显不及单基因DNA疫苗 ,但其能诱导更强、更持久的细胞免疫应答 ,表明HBV包膜核心蛋白融合基因DNA疫苗对于治疗慢性乙型肝炎可能比单基因DNA疫苗更为有效 .

关键词： HBV 包膜-核心蛋白融合基因 DNA疫苗诱导小鼠细胞免疫应答

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从噬菌体展示的构象限制性随机肽库中筛选有trkB结合活性的小肽

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中国科学（C辑） 2002年第5期32卷 463-470页

作者：马仲才吴晓兰曹明媚潘卫朱分禄戚中田陈景山第二军医大学微生物学教研室上海200433 Department of Psychology

脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）能够促进多种神经元的存活和分化,在神经退行性疾病的治疗中具有广阔的应用前景,但由于其分子量大而无法穿过血脑屏障,限制了其临床应用.以表达于NIH 3T3细胞上的BDNF受体... 详细信息

脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）能够促进多种神经元的存活和分化,在神经退行性疾病的治疗中具有广阔的应用前景,但由于其分子量大而无法穿过血脑屏障,限制了其临床应用.以表达于NIH 3T3细胞上的BDNF受体trkB 为靶分子,从噬菌体展示的随机肽库中筛选与trkB有亲和力的小肽,采用不表达trkB的 NIH 3T3细胞预吸附和最后一轮筛选以 1μg/mL的 BDNF竞争性洗脱策略,使能与trkB天然构象结合、又能有效拮抗BDNF与trkB结合的特异性噬菌体得到了有效富集,获得了5种trkB结合小肽,它们有核心序列CRA/TXφXXφXXC（X代表随机残基,φ为T,L或I）.对展示有5种外源小肽的噬菌体进行了初步生物活性测定,未发现有BDNF样活性,反而能剂量依赖性地拮抗BDNF的生物功能.依据其中一个克隆序列（C1）合成的肽也证实有拮抗BDNF的作用,表明获得的5种小肽可能为trkB受体拮抗剂.这些trkB拮抗性小肽在治疗神经母细胞瘤和慢性痛以及神经生物学研究中具有应用前景,同时也为构建二级噬菌体展示肽库、继续筛选BDNF模拟小肽奠定了基础.

关键词：噬菌体展示随机肽库脑源性神经营养因子 trkB 拮抗剂

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HGV RNA基因组感染HepG2细胞的研究

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微生物学通报 2002年第1期29卷 60-64页

作者：任浩朱分禄戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HG... 详细信息

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HGV在HepG2细胞中的复制和表达。HepG2细胞在转染后24h便可在培养上清液中检测到HGV负链RNA,传代感染的细胞及培养上清液中可检测到HGV正、负链RNA。在90d内传代20余次,均能检测到HGV的复制。免疫组化和Western　blot可检测到HGV E2蛋白在感染细胞中的表达。HGV感染细胞经冻存后复苏,仍能检测到 HGV RNA。故 HGV RNA基因组能够在HepG2细胞中复制和表达,此细胞模型有可能用于HGV的复制与感染防治的研究。

关键词：庚型肝炎病毒 HGV RNA基因组 HepG2细胞复制表达

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噬菌体表面展示人干扰素-α 2b

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 403-406页

作者：吴晓兰潘卫马仲才陈秋莉武文斌曹明媚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a... 详细信息

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a的活性相当，并能被 IFN-α单抗中和。结论：hlFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达，即成功地建立了噬菌体展示外源肽（hIFN-α）的技术平台。

关键词：人干扰素-α 抗病毒活性噬菌体表面展示

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表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究

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自然科学进展 2002年第9期12卷 997-1000页

作者：赵平曹洁曹明媚朱诗应戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核... 详细信息

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核心蛋白IgG及迟发型超敏反应、T细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应,结果表明该重组菌能有效诱导免疫应答,尤其能高效诱导细胞免疫应答,这为研制高效免疫、成本低廉、接种方便的HCV疫苗提供了一个新的可行途径。

关键词： HCV核心蛋白小鼠丙型肝炎病毒核心蛋白减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗免疫原性免疫应答基因表达重组菌

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脑源性神经营养因子与帕金森病

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神经解剖学杂志 2002年第1期18卷 87-90页

作者：马仲才潘卫戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

帕金森病(PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)多巴胺(DA)能神经元的进行性退化变性，由于其机制还不清楚，因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,... 详细信息

帕金森病(PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)多巴胺(DA)能神经元的进行性退化变性，由于其机制还不清楚，因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)由Barde等于1982年在猪脑中首次发现，其氨基酸序列有55%～60%与神经生长因子(nerve growth factor, NGF)完全相同，也属神经营养素(neurotrophin)家族的成员，BDNF可通过其高亲和力受体trkB和低亲和力受体p75~(NTR)发挥生物活性，能够促进多种神经元的存活，尤其对DA能神经元有很强的营养和保护作用，因而受到了广泛的关注，被认为是治疗PD的新一代药物。但是对于BDNF在PD发生、发展中的作用和意义一直未有定论，近年来的一些研究结果为该问题提供了一些有意义的答案。

关键词：神经元保护作用脑源性神经营养因子帕金森病

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