检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2001年第4期22卷 331-333页

作者：倪武任浩缪晓辉戚中田叶朝阳第二军医大学长征医院感染病科上海200003 基础医学部微生物学教研室 3. 长征医院肾内科长征医院肾内科

目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病... 详细信息

目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病毒抗体 (抗 - HCV)。结果 :患者血清 TTV DNA总阳性率为 2 7.5 %。对其中 1例 PCR扩增产物测序 ,结果与其他TVV分离株如 GH1、TA2 78、TTVCHN1和 TTVCHN2的核苷酸序列同源性为 89%～ 10 0 % ,推测的氨基酸序列同源性为87%～ 10 0 %。抗 - HCV阳性与阴性患者的 TTV DNA阳性率无明显差异。所有患者均未见 AL T明显升高。结论 :血液透析患者存在较严重的 TTV感染 ,TTV感染与 HCV感染无明显相关性 ,未发现 TTV感染导致 AL T明显升高的证据。

关键词： TT病毒血液透析基因分析序列分析

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pcDNA3-EGFP基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究

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徐州医学院学报 2001年第6期21卷 468-470页

作者：荆鑫赵剑祝云利潘欣周维江吴海山第二军医大学长征医院骨科上海200003 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　探讨外源性pcDNA3-EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法　用增荧光绿色蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)cDNA作为报告基因 ,采用重组真核表达载体系统 (pcDNA3-EGFP)以脂质体法转染原代骨髓间充质干细... 详细信息

目的　探讨外源性pcDNA3-EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞的可行性。方法　用增荧光绿色蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)cDNA作为报告基因 ,采用重组真核表达载体系统 (pcDNA3-EGFP)以脂质体法转染原代骨髓间充质干细胞 ,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果　经荧光显微镜下观察证实 :成功地对骨髓间充质干细胞实现了基因转染 ,持续表达时间超过 8周 ;没有发现明显的细胞毒作用及对细胞活力的显著影响。结论　采用真核转染技术可以介导外源基因转染骨髓间充质干细胞 ,为今后采用基因增强组织工程方法治疗肌肉、骨骼系统疾病提供了实验基础。

关键词：基因转染骨髓间充质干细胞 pcDNA3-EGFP 动物实验肌肉组织缺损骨骼组织缺损修复基因治疗

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同个体中HCV高变区1序列变异的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2001年第5期17卷 489-489页

作者：方芳潘卫戚中田第二军医大学附属东方肝胆外科医院实验诊断科上海200438 第二军医大学基础部微生物学教研室上海200438

ＨＣＶ高变区１ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｏｎｅＨＶＲ１基因变异可能与病毒逃避宿主免疫选择作用有关，是病毒在体内持续存在及ＨＣＶ感染易慢性化的重要原因之一１。近年来研究发现，ＨＶＲ１基因可能对ＨＣＶ的免疫预... 详细信息

ＨＣＶ高变区１ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｏｎｅＨＶＲ１基因变异可能与病毒逃避宿主免疫选择作用有关，是病毒在体内持续存在及ＨＣＶ感染易慢性化的重要原因之一１。近年来研究发现，ＨＶＲ１基因可能对ＨＣＶ的免疫预防有重要作用２，３。为此，我们选择了长期、多次进行血液透析的ＨＣＶ感染者作为研究对象，动态观察了ＨＶＲ１的序列变异。以研究其变异极其规律有重要意义。１材料和方法研究对象：血透析患者的血清，由上海医科大学附属中山医院血液透析中心提供。引物设计、ＨＣＶＲＮＡ的提取、逆转录巢式ＰＣＲ、ＤＮＡ序列的测定及相关试剂、仪器参见文献４。２结果５例血透析患者ＨＣＶＨＶＲ１核苷酸及氨基酸序列的变异结

关键词：丙性肝炎病毒高变区1 序列变异

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HGV RNA转录体的感染性研究

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肝脏 2001年第S1期6卷 111-页

作者：任浩朱分禄王路朱诗应戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室 200433

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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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核酸疫苗作为治疗性疫苗的前景

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免疫学杂志 2000年第2期16卷 155-157页

作者：赵平戚中田杜平第二军医大学微生物学教研室上海200433

联系核酸疫苗的免疫机理和慢性病毒感染的发生机制 ,对将核酸疫苗用作慢性病毒感染的治疗性疫苗的发展前景作一简要阐述。

关键词：核酸疫苗树突状细胞免疫刺激 DNA

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人CEA启动子调控ADP核糖化毒素基因治疗大肠癌

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肿瘤 2000年第3期20卷 167-170页

作者：曹广文潘欣张晓琴陈秋莉封岩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　应用ADP核糖化细菌毒素基因探讨对CEA阳性大肠癌的组织特异性基因疗法。方法　从铜绿假单孢菌基因组DNA和质粒 pET15b DT中分别克隆假单孢菌外毒素Ⅱ +Ⅲ区基因 (PEA)和白喉外毒素A链 (DTA)基因 ,引入Kozak序列 ,终止信号和酶切位... 详细信息

目的　应用ADP核糖化细菌毒素基因探讨对CEA阳性大肠癌的组织特异性基因疗法。方法　从铜绿假单孢菌基因组DNA和质粒 pET15b DT中分别克隆假单孢菌外毒素Ⅱ +Ⅲ区基因 (PEA)和白喉外毒素A链 (DTA)基因 ,引入Kozak序列 ,终止信号和酶切位点 ,测序后置于CEA启动子调控下克隆到逆转录病毒载体中。研究体外表达和裸鼠体内抗肿瘤能力。结果　体外荧光素酶共转染试验证明CEA启动子调控的毒性基因在CEA阳性大肠癌细胞中可以特异抑制报告基因表达。在裸鼠模型中 ,构建物与脂质体共转染肿瘤瘤体内可以使人大肠癌选择性消退 ,而对CEA阴性的肾癌模型无显著作用。

关键词：大肠肿瘤基因治疗 ADP核糖化毒素 ECA启动子

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庚型肝炎病毒NS3蛋白在昆虫细胞中的表达

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病毒学报 2000年第3期16卷 273-275页

作者：朱分禄任浩朱诗应宋燕斌戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

The recombinant GBV-C/HGV NS3 protein was expressed in Sf9 insect cells and analyzed by SDS-PAGE. A protein band about Mr 43810 was demonstrated on polyacrylamide gel electrophoresis and this protein amounted to more than 30% of the total cell proteins. Recombinant NS3 protein was purified by Ni-NTA column. Western blot showed that this recombinant protein could react with GBV-C/HGV RNA positive mixed sera. The recombinant GBV-C/HGV NS3 protein could be used to detect GBV-C/HGV infection and will supply material for study of structure and function of this protein.

关键词： GBV-C/HGV NS3蛋白 Sf9昆虫细胞表达庚型肝炎

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庚型肝炎病毒全基因组cDNA噬菌体随机展示肽库的构建与鉴定

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 842-845页

作者：吴晓兰潘卫戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,... 详细信息

目的 :构建能用于抗原表位筛选的庚型肝炎病毒 (HGV)全基因组 c DNA噬菌体随机展示肽库。方法 :将 DNase 部分消化的 HGV全基因组 c DNA随机片段 ,克隆到噬菌粒载体 p CANTAB5 X中 ,使 HGV抗原以融合蛋白的形式随机展示于噬菌体表面 ,并用原位杂交、限制性酶切及 DNA测序等方法鉴定所建文库的随机性和完整性。结果 :所建肽库的容量为5 .34× 10 4个菌落形成单位 ,滴度为 1.41× 10 1 4 TU/ ml。原位杂交结果证明在 HGV基因组的不同区域均有阳性菌落 ,酶切鉴定和 DNA测序结果显示插入片段的长度和片段来源区域具有随机性。结论 :所建肽库具有良好的完整性、随机性及实用性 ,为进一步研究奠定了基础。

关键词：噬菌体随机肽展示肽库庚型肝炎 HGV cDNA

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庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

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第二军医大学学报 2000年第1期21卷 16-19页

作者：任浩朱分禄朱诗应宋燕斌戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选... 详细信息

目的：研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＨＴａ，转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，３７℃振荡培养４ｈ使发生转座，于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞，将转染上清再次感染ｓｆ９细胞，以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分析、检测重组蛋白。结果：序列测定证实克隆的基因片段是ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的ＮＳ５基因片段，且阅读框架正确。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示在相对分子质量４．１５×１０４处有重组蛋白的表达条带，薄层扫描占总蛋白量的１１．７％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ发现重组蛋白可与ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ阳性患者混合血清发生较强的免疫反应。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ５重组蛋白可以用于ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染的检测。

关键词： NS5蛋白庚型肝炎 GBV-C/HGV 基因表达

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