检索结果-内蒙古大学图书馆

热带医学杂志 2012年第10期12卷 1171-1174页

作者：朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩... 详细信息

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。

关键词：蜡样芽胞杆菌群 rpoB基因实时定量PCR

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rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

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中国微生物学会第二届全国芽胞杆菌研究与应用学术研讨会

作者：朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海 200433

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBR green实时定量PCR...

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBR green实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序.结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bp DNA片段,而各种对照菌株均未见扩增.序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88％.以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32× 101 +7.45× 100)拷贝.结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群的快速而准确的检测.

关键词：

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鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用

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解放军医学杂志 2011年第10期36卷 1023-1026页

作者：潘欣李广波李晗蔡家麟陈龙沈下贤刘培培吴鉴今第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi... 详细信息

目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW264.7细胞,将阳性细胞命名为RAW-DT,用pDsRed2-Perxi质粒转染RAW264.7细胞,阳性细胞命名为RAW-D。采用Alexa Fluor 350对结合单抗的鼠伤寒沙门菌显色,用Alexa Fluor 488对iNOS进行显色,并在荧光显微镜下观察。用鼠伤寒沙门菌感染RAW-DT细胞,以观察鼠伤寒沙门菌与TassC和过氧化物酶体的关系;用鼠伤寒沙门菌感染RAW-D细胞,以观察iNOS与过氧化物酶体和鼠伤寒沙门菌的关系。结果免疫荧光观察显示,呈现绿色荧光的TassC-GFP有膜性结构,可与标记了红色荧光的过氧化物酶体共定位;感染1h的RAW-DT胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可招募TassC-GFP和过氧化物酶体;感染1h的RAW-D胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可与iNOS和过氧化物酶体共定位;在1h的观察期间,一旦鼠伤寒沙门菌进入巨噬细胞,膜性小泡(SCV)周围即可募集较多过氧化物酶体。结论野生型鼠伤寒沙门菌可诱导巨噬细胞产生iNOS,iNOS和TassC均可与过氧化物酶体结合,可能具有一定的杀菌作用。

关键词：巨噬细胞沙门菌鼠伤寒靶向沙门菌分泌的spiC蛋白(TassC) 一氧化氮合酶Ⅱ型过氧化物酶体类

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人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子诱导机体免疫应答的研究进展

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中华传染病杂志 2011年第12期39卷 762-764页

作者：张华群杨界曹洁第二军医大学微生物学教研室上海200433

反式转录激活因子（***）是HIVl在感染早期产生的一种重要调节蛋白，它可与HIV-1RNA基因组的反式激活效应元件（transactivatingresponsiveregion，TAR）结合，促进HIV-1的转录及复制，在HIV-1感染及致病中发挥重要作用。

关键词：转录激活因子人类免疫缺陷病毒-1 机体免疫应答 HIV-1感染 RNA基因组调节蛋白反式激活

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人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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病毒学报 2011年第6期27卷 580-586页

作者：张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大... 详细信息

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 Tat蛋白缺失突变原核表达免疫原性

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丙型肝炎病毒F蛋白在病毒复制和致病中的作用

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中国生物制品学杂志 2011年第3期24卷 349-353页

作者：王文博任浩第二军医大学微生物学教研室全军生物侦检与防护重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科,是有包膜的单正链RNA病毒。HCV基因组约有9 600个碱基,编码的单一开放读码框(Open reading frame,ORF)翻译出约3 000个氨基酸残基的多聚蛋白前体,在宿主细胞及病毒蛋白酶的作用下,剪... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科,是有包膜的单正链RNA病毒。HCV基因组约有9 600个碱基,编码的单一开放读码框(Open reading frame,ORF)翻译出约3 000个氨基酸残基的多聚蛋白前体,在宿主细胞及病毒蛋白酶的作用下,剪切成至少10种结构蛋白和非结构蛋白。近年来,一种新的病毒蛋白在一些实验室相继被发现,称为读码框移位蛋白(Alternative reading frame protein,ARFP),或称为F蛋白(Frameshift protein),也有学者称之为Core+1蛋白。F蛋白是由核心基因读码框移位产生的,虽然从发现至今已有10余年,但其生物学功能仍不明确,对其在肝脏疾病和肝细胞癌的发生发展中的作用及其对HCV复制和感染的影响尚有争议。本文就F蛋白的发现、产生机制、抗原性、生化特性及生物学功能等作一综述。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白重叠读码框核糖体漂移病毒复制毒力

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丙型肝炎病毒高变区1中介导感染的关键氨基酸残基鉴定

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微生物与感染 2011年第4期6卷 225-230页

作者：解冰劳文光刘文宇关默刘小青陶清源王岩赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白氨基端的高变区1(HVR1)由27个氨基酸组成,是HCV蛋白中变异频率最高的肽段。HVR1含中和抗体表位,同时对HCV细胞侵入起重要作用,其结构与功能的关系目前尚不清楚。本研究对H77株包膜蛋白基因中的HVR1进行了一... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白氨基端的高变区1(HVR1)由27个氨基酸组成,是HCV蛋白中变异频率最高的肽段。HVR1含中和抗体表位,同时对HCV细胞侵入起重要作用,其结构与功能的关系目前尚不清楚。本研究对H77株包膜蛋白基因中的HVR1进行了一系列缺失突变,然后将突变体表达质粒与假病毒包装质粒共转染人胚肾(HEK)293T细胞,用蛋白免疫印迹法检测细胞中HCV包膜E2蛋白的表达,用荧光定量聚合酶链反应检测培养上清液中的HCV假病毒(HCVpp)含量,以人肝癌细胞Huh7.5为靶细胞检测HCVpp的感染力。结果显示,缺失整个HVR1或HVR1中部分氨基酸残基对HCV包膜蛋白表达及HCVpp产量均无明显影响,但对HCVpp感染力产生不同影响。缺失第16～24位氨基酸残基导致HCVpp感染力增强,缺失第1～8位或1～12位氨基酸残基仅部分降低HCVpp感染力,缺失第13～15位和25～27位中的任意一个氨基酸残基均导致HCVpp感染力低于原型的5%。结果提示,HVR1中第13～15位和25～27位的6个氨基酸是介导HCV感染的关键氨基酸残基。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 侵入细胞关键氨基酸残基

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TassC结合过氧化物酶体对早期受染巨噬细胞内的鼠伤寒沙门菌的影响

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微生物学杂志 2011年第3期31卷 12-16页

作者：潘欣蔡家麟李广波李晗陈龙吴鉴今第二军医大学微生物学教研室上海200433

探讨鼠伤寒沙门菌在感染鼠巨噬细胞早期与细胞器的相互作用。用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,结合多抗的溶酶体标志物溶酶体相关膜蛋白-1用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色,以观察标记了绿色荧光蛋白的TassC与溶酶体的关系;用p... 详细信息

探讨鼠伤寒沙门菌在感染鼠巨噬细胞早期与细胞器的相互作用。用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,结合多抗的溶酶体标志物溶酶体相关膜蛋白-1用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色,以观察标记了绿色荧光蛋白的TassC与溶酶体的关系;用pTassC-GFP和pDsRed2-Perxi质粒共转染RAW264.7细胞,以观察TassC-GFP与过氧化物酶体的关系;用SYTO42标记鼠伤寒沙门菌,感染用pTassC-GFP和pDsRed2-Perxi质粒共转染的RAW264.7细胞,以观察细菌与TassC和过氧化物酶体的关系。免疫荧光显示TassC-GFP不与鼠巨噬细胞RAW264.7中的溶酶体结合,但与标记了红色荧光的过氧化物酶体共定位;感染1 h的RAW264.7胞内SYTO42标记的鼠伤寒沙门菌吞噬泡可招募TassC-GFP和过氧化物酶体。这些发现提示在鼠伤寒沙门菌感染早期过氧化物酶体携带杀菌成分通过TassC介导可参与发挥一定的杀菌作用。

关键词：巨噬细胞鼠伤寒沙门菌 TassC 过氧化物酶体

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医学微生物学设计性实验教学初探

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基础医学教育 2011年第9期13卷 833-835页

作者：王文赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

以第二军医大学医学微生物学开展的设计性实验教学为例,分析和探讨了开展设计性实验对于提高学员综合能力的促进意义,并就开展设计性实验教学的组织实施交流了一些经验和体会。

关键词：医学微生物学教学方法设计性实验素质教育

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IL-28B基因多态性在丙型肝炎患者治疗中的作用

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世界华人消化杂志 2011年第7期19卷 661-666页

作者：许刚任浩中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海市200433

Interleukin(IL)-28B(interferon lambda3,IFN-λ3)是一类属于IFN-λ家族的新型白介素,编码基因位于19号染色体上.近期的多项研究阐述了IL-28B的基因多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)在丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者治疗上的重要性,并成功的定位了两个关联性最强的SNPs:rs12979860-IL-28B上游3kb处,rs8099917-IL-28B上游8kb处.IL-28B的基因多态性具有很好的临床应用前景,根据其基因型可以预测患者的自愈率,以及对聚乙二醇干扰素-α(PEG-IFN-α)和利巴韦林(ribavirin,RBV)联合治疗的持续应答率,从而有助于确定HCV感染者的个性化治疗方案.

关键词：白介素-28B 单核苷酸多态性丙型肝炎治疗

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