检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2003年第10期24卷 1081-1085页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融... 详细信息

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。

关键词：线粒体亮氨酰tRNA合成酶基因表达动力学纯化酶促动力学参数

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人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G点突变对其亮氨酰化活性的影响

引用

遗传 2003年第4期25卷 383-387页

作者：汪振诚王学敏金由辛缪明永韩伟国焦炳华中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNA^(Leu(UUR))基因,体外转录生成相应的tRNA^(Leu(UUR)),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNA^(Leu(UUR))与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNA^(Leu(UUR))的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNA^(Leu(UUR))的K_m/K_(cat)仅为突变型tRNA^(Leu(UUR))的63.9％,A3243G点突变使tRNA^(Leu(UUR))接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。

关键词：人线粒体tRNA^Leu(UUR) 基因点突变氨酰化

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人生长激素基因组DNA在家蚕BmN细胞中的瞬时表达

引用

第二军医大学学报 2003年第7期24卷 765-768页

作者：张昕泂胡惠民董良陆长德第二军医大学基础医学部生物化学和分子生物学教研室上海200433 中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所上海200031

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印... 详细信息

目的 :探讨内含子对外源基因在真核细胞中表达的作用。方法 :直接将含有 4个内含子和自身信号肽的 1.5 kb全长人生长激素基因直接克隆至真核表达载体 pc DNA3.0 ,然后利用脂质体转染家蚕 Bm N细胞 ,收取细胞上清 ,PAGE电泳和Western印迹分析鉴定表达产物 ;将全长基因序列、缺失第 1内含子基因序列和 c DNA序列的表达载体 ,分别转染细胞后检测各片段表达产物之间的差异。结果 :测序结果表明人生长激素基因组 DNA在细胞内正确转录、剪接。蛋白质电泳分析和免疫学检测证明转染细胞能够有效合成并分泌蛋白质。 EL ISA检测发现 3种基因片段中 ,全长的基因序列在表达效果上要高于后两者 (P<0 .0 5 ) ,其中缺失第 1内含子的序列表达效率较 c DNA序列明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :在家蚕细胞中能够正确表达带有自身内含子和信号肽的人源蛋白基因 ;

关键词：人生长激素基因组 DNA 家蚕 BmN细胞瞬时表达基因表达

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急性镉中毒大鼠睾丸氧化损伤机制的研究

引用

第二军医大学学报 2002年第1期23卷 64-66页

作者：周雍金慧英冯伟华胡惠民郑尊印木泉第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学卫生毒理学教研室上海200433

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝... 详细信息

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。

关键词：镉中毒氧化还原金属硫蛋白大鼠睾丸损伤

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急性镉中毒大鼠肝脏氧自由基的细胞化学定位研究

急性镉中毒大鼠肝脏氧自由基的细胞化学定位研究

引用

第九次全国生物物理大会学术会议

作者：周雍吴越叶煦亭杨志峰郑尊第二军医大学基础部生化与分子生物学教研室细胞生物学教研室

近年来,氧化损伤是有关镉中毒机制研究的热点之一。由于氧自由基存在时间极短,转化迅速,细胞化学定位较为困难,且急性镉中毒模型中氧自由基的水平相对较低,至今未有明确的形态学证据。HO在氧自由基代谢中占重要地位,且存在时间长(达几毫...

近年来,氧化损伤是有关镉中毒机制研究的热点之一。由于氧自由基存在时间极短,转化迅速,细胞化学定位较为困难,且急性镉中毒模型中氧自由基的水平相对较低,至今未有明确的形态学证据。HO在氧自由基代谢中占重要地位,且存在时间长(达几毫秒),可作为氧自由基总体情况的反映指标。

关键词：

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