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1995年发现的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)，是肿瘤坏死因子超家族成员之一，属于Ⅱ型跨膜蛋白。本研究中，尝试将人TRAIL114-281三聚体的三个单体的氨基酸片段以两段柔性氨基酸短臂(GGGS)3，头尾相连，使之融合成为一条多肽链scTRAIL，即：TRAIL114-281-(GGGS)3-TRAIL114-281-(GGGS)3-TRAIL114-281，以增强抗肿瘤的效果。通过PCR和限制性内切酶酶切、连接技术，获得编码单链化蛋白scTRAIL的基因序列，构建了含编码人scTRAIL基因的重组质粒，在宿主菌*** BL2I中得到了较高水平的表达，并用麦芽糖结合蛋白亲和层析柱对表达产物进行了初步纯化，获得了融合了麦芽糖结合蛋白标签的可溶性重组蛋MBP-scTRAIL。用ICR小鼠作为实验动物，腹腔注射MBP-scTRAIL溶液，连续观察14天，检测其急性毒性。结果表明，MBP-scTRAIL的抗肿瘤活性明显高于MBP-TRAIL114-281;在动物急毒实验中，MBP-scTRAIL未对实验动物表现毒性，对正常机体组织无损伤。预示着该蛋白在肿瘤临床治疗上具有良好的应用前景。

关键词： MBP-scTRAIL蛋白蛋白表达基因治疗抗肿瘤效果

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胰腺癌肿瘤干细胞的分离与鉴定

胰腺癌肿瘤干细胞的分离与鉴定

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第17届全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：孙铭娟吴惠娟王梁华焦炳华第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海 200433

本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

关键词：胰腺癌肿瘤干细胞集落形成无血清培养法生物学特性

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醛固酮诱导心室重构作用及机制

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心肺血管病杂志 2011年第2期30卷 174-176页

作者：叶周恒杨玉鹤许骥王梁华第二军医大学研究生管理大队学员六队上海200433 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室

醛固酮（Aldosterone,ALD）是一种盐皮质激素,血清中的醛固酮主要由肾上腺皮质球状带合成释放,通过肾集合管、汗腺及结肠调节水盐代谢。1988年芝加哥心血管研究中心,Karl Weber的小组在制作醛固酮-高盐模型时发现通过醛固酮注射可有心... 详细信息

醛固酮（Aldosterone,ALD）是一种盐皮质激素,血清中的醛固酮主要由肾上腺皮质球状带合成释放,通过肾集合管、汗腺及结肠调节水盐代谢。1988年芝加哥心血管研究中心,Karl Weber的小组在制作醛固酮-高盐模型时发现通过醛固酮注射可有心脏左心室重构的副作用,

关键词：心室重构醛固酮作用机制

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真核表达载体pcDNA3.1-3a的构建及其在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中的表达

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中国临床神经外科杂志 2011年第9期16卷 541-544页

作者：秦怀洲张治国王举磊吴琳李立宏高国栋第四军医大学第二附属医院神经外科西安710038 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032

目的在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因。方法以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模... 详细信息

目的在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因。方法以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc/his标签序列的目的区段--甲基化酶催化结构域3a,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1;以EcoRⅠ、EcoRⅤ双酶切和PCR方法对构建的表达载体进行鉴定,并通过测序证明载体构建正确,同时检测甲基化酶3a在SK-N-SH细胞中的表达。结果通过PCR方法获得了含有甲基化酶催化结构域的真核表达载体pcDNA3.1-3a,并通过免疫印记方法验证了在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞样品中用抗his标签抗体可以特异性识别目的蛋白。结论正确构建了甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,其可在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中表达。

关键词： DNA甲基化酶真核表达载体神经母细胞瘤

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DR6可能介导了重组S5a/angiocidin对THP-1的作用

DR6可能介导了重组S5a/angiocidin对THP-1的作用

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：王铮王梁华陆健昇孙铭娟范晨周鸿飞乐媛焦炳华中国人民解放军第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室

目的:筛选获得介导重组人S5a/angiocidin诱导人单核细胞白血病细胞THP-1凋亡、增殖抑制和分化的相互作用分子(受体)。方法:1、应用NEB公司pMAL原核表达与纯化系统,高效表达与细菌麦芽糖结合蛋白(MaltoseBinding Protein,MBP)融合的重组M... 详细信息

目的:筛选获得介导重组人S5a/angiocidin诱导人单核细胞白血病细胞THP-1凋亡、增殖抑制和分化的相互作用分子(受体)。方法:1、应用NEB公司pMAL原核表达与纯化系统,高效表达与细菌麦芽糖结合蛋白(MaltoseBinding Protein,MBP)融合的重组MBP-S5a/angiocidin;2、MBP pull-down捕获与S5a/angiocidin

关键词： THP-1 DR6 S5a/angiocidin

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^(60)Co照射后SMMC-7721细胞线粒体DNA部分D-loop区辐照损伤的初步研究

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医学研究生学报 2011年第3期24卷 250-255页

作者：王洁汪茂荣王学敏解放军第八一医院解放军肝病中心南京医学硕士研究生210002 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的变化可能损害氧的利用,导致细胞的氧化和减少能量的产生,从而引起肿瘤细胞的凋亡。文中观察SMMC-7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后,线粒体DNA部分D-loop区碱基的损伤规律及特定的断裂... 详细信息

目的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的变化可能损害氧的利用,导致细胞的氧化和减少能量的产生,从而引起肿瘤细胞的凋亡。文中观察SMMC-7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后,线粒体DNA部分D-loop区碱基的损伤规律及特定的断裂敏感点。方法根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LM-PCR)及基因扫描来检测其断裂程度、位点及规律。结果在接受不同剂量γ射线照射后,通过ligation-media-ted PCR(LM-PCR)和基因扫描检测,发现各剂量都有相同大小的片段,即存在相同的断裂位点,且这些位点并非随机分布,位点的损伤频率也随着剂量的增加而呈现递增趋势。同时,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点,且在一定范围内出现了双链断裂。结论线粒体DNAD-loop区在60Co照射后,产生的一系列断裂敏感位点和双链断裂及本身特有的突变位点,可能对SMMC-7721细胞辐射后的细胞凋亡起到重要作用,推测mtDNA很有可能是电离辐射易感的靶点,mtDNA的变化能够作为肿瘤细胞辐照前后损伤的一个重要指标。

关键词：线粒体DNAD-loop区断裂敏感点双链断裂 γ射线辐照 SMMC-7721细胞

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丹参酮ⅡA对阿尔茨海默病模型大鼠海马MMP-2、iNOS表达及自由基释放的影响

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第二军医大学学报 2010年第4期31卷 380-384页

作者：蒋平陈鸣吕军陈翀焦炳华第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的探讨中药丹参酮ⅡA(TanⅡA)对AD模型大鼠学习记忆、海马内基质金属蛋白酶(MMP-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及自由基释放的影响及作用机制。方法采用β-淀粉样蛋白(Aβ)定向注射法建立AD大鼠模型,并使用TanⅡA干预,通过观察大... 详细信息

目的探讨中药丹参酮ⅡA(TanⅡA)对AD模型大鼠学习记忆、海马内基质金属蛋白酶(MMP-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及自由基释放的影响及作用机制。方法采用β-淀粉样蛋白(Aβ)定向注射法建立AD大鼠模型,并使用TanⅡA干预,通过观察大鼠学习记忆能力、定量分析大鼠海马MMP-2和iNOS基因及蛋白表达差异及表达相关性、自由基释放量的影响以阐明其作用机制。结果与正常对照组相比,Aβ注射法所建立AD模型大鼠海马内iNOS及MMP-2的表达显著增高(P<0.05),两者的表达在mRNA及蛋白水平均正相关(P<0.05)。AD大鼠海马内诱导释放的一氧化氮(NO)、ONOO-及活性氧(ROS)自由基含量显著增高(P<0.05),同时AD模型组大鼠的学习记忆能力明显下降。而TanⅡA(50mg/kg)干预可显著降低AD大鼠海马内的NO、ONOO-及ROS含量,并降低iNOS(P<0.05)及MMP-2蛋白的表达(P<0.01),明显改善AD模型大鼠的学习记忆能力。结论TanⅡA可有效缓解AD症状,作用机制可能与抑制AD诱导的iNOS及MMP-2蛋白的表达,减少氧化性毒害自由基的产生,抑制氧化应激损伤有关。

关键词：阿尔茨海默病基质金属蛋白酶2 诱导型一氧化氮合酶丹参酮ⅡA

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NF-κB通过调控早期反应基因-2参与小鼠肝再生启动

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第二军医大学学报 2010年第2期31卷 123-127页

作者：陈欢许青董瑞琦杨生生缪明永焦炳华第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的结合基因芯片技术、生物信息学分析和染色质免疫共沉淀技术分析小鼠肝再生启动阶段的差异表达基因,并探讨其调控方式。方法采用小鼠全基因组基因表达谱芯片检测并验证肝再生启动阶段2组差异表达基因;应用基于TRANSFAC数据库的PAINT... 详细信息

目的结合基因芯片技术、生物信息学分析和染色质免疫共沉淀技术分析小鼠肝再生启动阶段的差异表达基因,并探讨其调控方式。方法采用小鼠全基因组基因表达谱芯片检测并验证肝再生启动阶段2组差异表达基因;应用基于TRANSFAC数据库的PAINT对差异表达基因进行转录调控分析;最后运用染色质免疫共沉淀技术验证NF-κB的潜在靶基因。结果肝切后4 h小鼠差异表达基因共332个(上调127个,下调205个),其中早期反应基因-2(immediate earlyresponse 2,IER2)上调约5倍;对所有差异表达基因进行PAINT分析,预测到多个转录因子如Stat家族和NF-κB均参与差异表达基因调控网络;免疫共沉淀技术证实IER2受NF-κB调控。结论NF-κB可能通过调控IER2参与肝再生启动。

关键词：微阵列分析肝再生 IER2 NF-κB

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源于海洋真菌的抗肿瘤天然产物

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生命的化学 2010年第1期30卷 86-91页

作者：龙聪卢小玲刘军华高云焦炳华刘小宇第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

海洋真菌因其特殊的生存环境和代谢机制而具有产生新型生物活性物质的潜力。近年来随着对海洋微生物研究的深入,从海洋真菌中发现了越来越多的具有抗肿瘤活性且结构新颖的天然产物。这些海洋真菌有的分离自海水、海泥或海洋沉积物,有的... 详细信息

海洋真菌因其特殊的生存环境和代谢机制而具有产生新型生物活性物质的潜力。近年来随着对海洋微生物研究的深入,从海洋真菌中发现了越来越多的具有抗肿瘤活性且结构新颖的天然产物。这些海洋真菌有的分离自海水、海泥或海洋沉积物,有的来自于海洋生物体。本文综述了近几年来从海洋真菌中分离得到的抗肿瘤天然产物的研究状况。

关键词：海洋真菌抗肿瘤天然产物

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