检索结果-内蒙古大学图书馆

目的:探讨热休克时细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA减少的机制。方法:利用RT-PCR半定量的方法研究热休克时人肝癌SMMC-7721细胞GR mRNA的总体变化。制备GR基因跨外显子3、4、5的RNA探针和GR基因内含子E的RNA探针,... 详细信息

目的:探讨热休克时细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA减少的机制。方法:利用RT-PCR半定量的方法研究热休克时人肝癌SMMC-7721细胞GR mRNA的总体变化。制备GR基因跨外显子3、4、5的RNA探针和GR基因内含子E的RNA探针,对热休克后不同时间的细胞进行原位杂交,激光扫描共聚焦显微镜观察,计算机图像分析系统进行分析,研究GR mRNA转录、降解及前体剪接的变化。结果:RT-PCR实验证实,热休克反应时SMMC-7721细胞GRmRNA含量降低。原位杂交实验证实,SMMC-7721细胞热休克时,外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值(GRmRNA和GR mRNA前体的量)比未热休克处理组低(P<0.05);加放线菌素D抑制转录后进行热休克反应,内含子探针杂交显色所得的积分灰度值(GR mRNA前体的量)比单纯加放线菌素D(未进行热休克组)高,而外显子探针杂交显色所得的积分灰度值(GR mRNA的量)比单纯加放线菌素D组低(P<0.05)。结论:热休克反应时GR mRNA转录过程受抑,GR mRNA前体剪接过程存在障碍,GR mRNA降解加快。

关键词：糖皮质激素受体 mRNA 热休克反应

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神经元特异性烯醇化酶

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生命的化学 2008年第4期28卷 439-442页

作者：邱全曜缪明永第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室

神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)是烯醇化酶的一种同工酶,该酶不仅参加糖酵解反应,而且还具有神经营养因子作用,对神经系统疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后等也有重要作用。本文将从NSE的理化特性、生物学功能和临床... 详细信息

神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)是烯醇化酶的一种同工酶,该酶不仅参加糖酵解反应,而且还具有神经营养因子作用,对神经系统疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后等也有重要作用。本文将从NSE的理化特性、生物学功能和临床应用等方面对其进行阐述。

关键词：神经元特异性烯醇化酶同工酶神经保护作用神经营养作用标志物

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人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

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中国肿瘤生物治疗杂志 2008年第3期15卷 259-263页

作者：高云王梁华任娜孙铭娟郭爱云焦炳华第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(14... 详细信息

目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(147-312),对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500μg的重组蛋白,纯度为电泳纯。重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。

关键词：内皮-单核活化多肽2 克隆表达抗肿瘤增殖抑制凋亡

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叔丁醇治疗SD大鼠硒性白内障的疗效观察

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第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1056-1059页

作者：李静薛炼张军黄才国李闻捷第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433 济南军区总医院实验诊断科济南250031 第二军医大学长海医院中心实验室上海200433

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴... 详细信息

目的:探讨叔丁醇外用滴眼液对SD大鼠硒性白内障模型(模拟老年性白内障)的治疗作用。方法:建立SD大鼠硒性白内障模型,并将实验大鼠右眼作为药物干预组,左眼作为对照组;用自行配制的叔丁醇外用滴眼液(浓度分别为25、50、75mmol/L)按时滴眼(1滴/次,3～5次/d);每日进行肉眼观察,并于用药后第5日及第10日用裂隙灯显微镜观察大鼠双眼晶状体核性病变,每日用游标卡尺(最小刻度值0.02mm)测量大鼠双眼晶状体核性斑块最大直径的改变。另选未建模的SD大鼠,用100mmol/L的叔丁醇滴眼液滴眼(1滴/次,3～5次/d),观察药物有无毒性及其他不良反应。结果:硒性白内障大鼠用药眼晶状体核性混浊斑块直径小于对照眼(P<0.01);用药眼核性混浊斑块混浊程度低于对照眼;叔丁醇滴眼液毒性低,刺激性小。结论:叔丁醇滴眼液对SD大鼠硒性白内障有一定的治疗作用。

关键词：叔丁醇烷基化作用亚硒酸钠白内障

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心肺复苏后大鼠脑线粒体通透性转换孔开放对线粒体呼吸功能的影响

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中华危重病急救医学 2008年第11期20卷 -页

作者：马宇洁杨兴易林兆奋缪明永张雷宁波空军总医院重症监护科北京100036 第二军医大学附属长征医院急救科上海200003 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200044

目的研究大鼠心肺复苏(CPR)后神经细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)开放对线粒体呼吸功能的影响,并探讨其可能机制.方法建立窒息加冰KC1致大鼠心搏骤停(CA)/CPR动物模型,在自主循环恢复(ROSC)后3、6、12、24、48和72 h断头处死大鼠制备... 详细信息

目的研究大鼠心肺复苏(CPR)后神经细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)开放对线粒体呼吸功能的影响,并探讨其可能机制.方法建立窒息加冰KC1致大鼠心搏骤停(CA)/CPR动物模型,在自主循环恢复(ROSC)后3、6、12、24、48和72 h断头处死大鼠制备大脑皮质内线粒体匀浆.采用分光光度法测定线粒体MPTP的开放程度,用Clark氧电极法分析线粒体呼吸功能,并电镜下观察线粒体超微结构.结果 CA/CPR后大鼠神经细胞线粒体功能明显受损,线粒体呼吸Ⅲ态(R3)速率下降;ROSC后神经细胞MPTP持续处于开放状态,开放程度并不是瞬间增至最大,而是具有时间依赖性.具体表现为:ROSC后6h内神经细胞MPTP开放程度保持低水平,6 h以后开始迅速大量开放,12 h开放程度达到最大,24 h开放程度略有缩小,表明线粒体开始收缩.至48 h开放程度再次加大.72 h又明显缩小,但未达到正常水平(P均＜0.05).虽然线粒体R3速率下降.但线粒体呼吸Ⅳ态(R4)速率升高,呼吸控制率(RCR)和磷/氧(P/O)比值明显下降;随着ROSC时间延长,RCR和P/O比值持续在低水平状态(P＜0.05或P＜0.01).透射电镜下观察细胞有明显损伤.相关分析表明,MPTP开放与RCR呈明显正相关(r=0.025,P＜0.05).结论 CPR后MPTP开放是加重神经细胞能量代谢障碍的主要原因,在ROSC后早期即12 h以内如能及时应用抑制MPTP开放的策略,可能会使神经细胞的线粒体功能朝着良性方向发展.为神经功能的恢复赢得机会.

关键词：大鼠心肺复苏线粒体线粒体通透性转换孔线粒体呼吸功能

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东海洋山港沿岸土壤、海水样本中Ⅰ型PKS基因的初步筛选鉴定与功能分析

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微生物学通报 2008年第9期35卷 1359-1366页

作者：董晓毅王梁华孙铭娟宗英焦豫良焦炳华中国人民解放军第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复... 详细信息

为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复序列后,共获得了23条不同的KS片段(长度为630bp^690bp),提交GenBank皆获登录号,其中19条来自土壤(DQ640993、DQ640997、DQ641926、DQ641927、DQ673137~DQ673151),4条来自海水(DQ673151,EF554859~EF554861),由核苷酸序列推断出的氨基酸序列保守,与GenBank中已知KS基因片段的相似度在45%到85%之间,种系发生分析表明,其中14条KS片段(来源于海水的KS片段皆在其中)应来源于典型的KS群,而剩余9条则来源于杂合的PKS/NRPS(Non-ribosomal peptide synthetase,非核糖体多肽合成酶)群。另外,几条KS基因特征明显,可用于进一步的研究。

关键词：未获得培养微生物聚酮合酶酮缩合酶土壤海水

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葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶表达的调控作用(英文)

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中西医结合学报 2008年第10期6卷 1017-1023页

作者：李燕巍蔡在龙沈慰杨生生俞超芹第二军医大学长海医院中医科上海200433 第二军医大学长海医院实验中心上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time poly... 详细信息

目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用。方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测药物对RL95-2细胞P450arom mRNA表达水平的影响。以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2(PⅡ)转录起始位点上游序列。PCR产物定向克隆到报告基因载体pGL3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实。瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下mRNA及蛋白表达的变化。结果:与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450arom mRNA表达(P<0.01),抑制作用在6、12 h较显著(P<0.01)。经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒(-1 017,-763,-543,-234^+8 bp)。瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素(10-7mol/L)刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平。结果表明,-763^-543 bp间的活性被抑制(P<0.05),通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1(c-jun/c-fos)。利用RT-PCR、Western blotting及荧光素酶活性检测发现葛根素(10-7mol/L)对AP-1(c-jun/c-fos)的抑制作用平行于对P450arom的作用。结论:低浓度葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶基因表达的抑制作用很可能是受上游调控转录因子AP-1(c-jun/c-fos)的影响。

关键词：葛根素芳香化酶P450 子宫内膜异位症

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提高生物化学教学效果的体会

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2008年第3期10卷 278-279页

作者：刘小宇黄才国冯伟华缪明永焦炳华第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室

在长期的生物化学与分子生物学教学实践中发现学生对这门课感到“恐惧”，原因主要在于代谢部分内容繁杂和分子生物学部分内容抽象。针对学生的这种心理，提出了“轻轻松松学生化”的口号，在教学实践中相应地采取了穿插生化发展史、联... 详细信息

在长期的生物化学与分子生物学教学实践中发现学生对这门课感到“恐惧”，原因主要在于代谢部分内容繁杂和分子生物学部分内容抽象。针对学生的这种心理，提出了“轻轻松松学生化”的口号，在教学实践中相应地采取了穿插生化发展史、联系医学实际和采用多媒体辅助教学的方法，使学生提高了学习兴趣，从被动学习转为主动学习，收到了良好的教学效果。

关键词：生物化学教学改革教学效果

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