检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈希中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

目的:中药中的化学成分是中医发挥临床治疗作用的物质基础,表型性状是其代谢成分的外在表现,表型性状和内在化学成分是评判药材质量的客观指标。全面表征这些化学成分的差异及其空间分布规律,并寻找成因,能够为探索中药材品质形成机制... 详细信息

目的: 中药中的化学成分是中医发挥临床治疗作用的物质基础,表型性状是其代谢成分的外在表现,表型性状和内在化学成分是评判药材质量的客观指标。全面表征这些化学成分的差异及其空间分布规律,并寻找成因,能够为探索中药材品质形成机制、实现品质调控提供多维度的数据,具有重要价值。基于此,本研究以国家中医药管理局重点发展的名贵中药西红花为研究对象,通过对不同产地西红花表型特征进行评价,并与内在质量进行关联分析,揭示真正具有品质指征性的关键性状,实现对现有商品规格标准的有益补充;通过代谢组学和质谱成像技术,阐明不同产地西红花差异的内在物质基础并可视化其分布,为西红花品质鉴别提供了新的视角;通过高通量测序-代谢组学关联分析,探讨植物微生物环境影响药材品质的因素,为阐明西红花品质形成的机制奠定基础。方法: 本研究通过将不同产地西红花表型性状与活性成分含量相关联,挖掘表征成分含量的“关键性状”;基于UPLC-QTOF-MS的高通量代谢组学技术对西红花中化学成分进行全面表征并挖掘不同产地的差异代谢物;运用DESI-MSI可视化的特点,明确西红花中各类化合物在不同部位和不同产地之间的空间分布特点。在此基础上,基于高通量测序技术,探索西红花中内生细菌对西红花化学成分积累的影响。结果: 1、通过性状与活性成分含量关联分析发现,西红花总长、色度值、干重和弯曲度是影响西红花品质的关键性状。提出了基于色度值的新的质量判别标准,初步建议西红花中a*值<5.5,L*值<35.5,对应于西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ总含量<10%,判定为不合格;a*值5.5-6,L*值35.5-36,对应西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ总含量为10%-20%,判定为3级;a*值6-8,L*值36-36.5,对应西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ总含量为20-30%,判定为2级;a*值>8,L*值>36.5,对应西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ总含量>30%,判定为1级。上述结果为完善西红花商品标准、进一步量化品质鉴别方法提供了科学理论依据。 2、通过代谢组学技术,在正负离子下分别筛选到了7个和16个共同差异代谢物,涵盖了类胡萝卜素、萜类、黄酮及黄酮衍生物、有机酸等多种类别,揭示了非西红花素类成分,特别是萜类、黄酮及其衍生物、有机酸等,在区分国内西红花中的显著作用,突破了传统上主要关注西红花素类成分的研究局限,丰富了对西红花品质差异内在物质基础的认知。 3、运用DESI-MSI对不同产地西红花球茎及柱头中代谢物的空间分布进行可视化。首次尝试并优化了球茎和柱头这两种特殊植物样本的质谱成像前处理方法。对于柱头样品,采用了PTFE板和滤纸板结合印压的方法;对于球茎样品,采取50μm的切片厚度进行成像。我们的研究首次为球茎及柱头这两种特殊植物器官的代谢物分布研究提供了可行的技术路线。质谱成像结果表明,在西红花柱头的不同部位中,有机酸和氨基酸主要集中在柱头前端,而黄酮、维生素、糖类和植物甾醇则大多分布在柱头尾部。此外,在球茎部分,蜀黍氰苷6’-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、芹菜素衍生物等代谢物主要位于顶芽,而氨基酸这一重要的能量和物质供应源则主要积累在球茎中。在不同产地番红花样本的比较中,上海崇明地区的番红花球茎和柱头的代谢物丰度普遍较高,其中植物甾醇在上海柱头样本中的丰度尤为显著。相比之下,浙江产地的柱头样本中有机酸和氨基酸的丰度相对较低。值得注意的是,研究还观察到西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅲ这两个关键的差异代谢物在不同产地柱头样本间存在分布规律的差异,这与之前代谢组学实验的结果相一致。我们首次对代谢物在番红花整个发育周期中的空间分布进行了报道,为理解番红花内代谢物的生物合成、积累及其与西红花品质间的潜在联系提供了新的视角。 4、此外,本课题还首次全面阐述了不同产地西红花的内生细菌群落结构,找到了53个具有显著差异的菌群。其中最为关键的为生丝单胞菌属(Hyphomonas)和柠檬酸杆菌属(Citrobacter),因其与西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅲ的相对含量呈显著正相关性,为阐明西红花品质形成的生物因素提供了理论基础。结论: 本研究寻找到了能指征西红花活性成分含量的关键性状,建立了一种联合代谢组学和质谱成像技术的策略,对不同产地西红花代谢物的差异及其分布特征进行了阐释;通过高通量测序,全面阐述了西红花用药部位柱头中内生细菌的组成,并筛选到了影响差异代谢物形成的关键菌群,为西红花品质成因的研究提供了理论基础。本研究为西红花的品质评价和标准化提供了科学依据,为质量形成机制提供了新的见解。

来源：评论

成人源性甲状腺类器官的构建、鉴定及体外培养方案的优化

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作者：盛琪轩中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

一、背景及目的甲状腺疾病是最常见的内分泌系统疾病,发病率呈逐年升高趋势,当前甲状腺器官发生机制和甲状腺疾病的发病机制尚未完全阐明,治疗方法选择有限且停滞不前,究其根源,高度模拟甲状腺疾病的研究模型缺乏是重要原因。类器官是... 详细信息

一、背景及目的甲状腺疾病是最常见的内分泌系统疾病,发病率呈逐年升高趋势,当前甲状腺器官发生机制和甲状腺疾病的发病机制尚未完全阐明,治疗方法选择有限且停滞不前,究其根源,高度模拟甲状腺疾病的研究模型缺乏是重要原因。类器官是一种体外培养的模拟活体器官的新型3D模型,其构成和功能与来源组织、器官高度相似,在疾病建模、再生医学、药物开发等众多研究领域优势显著。成人源性甲状腺类器官(adult-derived thyroid organoid,ADTO)是利用甲状腺成体干细胞(adult stem cells,ASCs)作为种子细胞,在特定三维细胞外基质及多种信号分子的协同作用下培养而成,不仅模拟了干细胞发育到甲状腺的生理过程,还能模拟甲状腺疾病的复杂病理生理状况,这些为研究机体甲状腺发育和疾病发病机制提供了前所未有的机会。此外,甲状腺类器官具有内分泌功能,为再生医学治疗甲减带来了新希望。目前,已有一些国外研究初步建立了人或鼠类甲状腺组织来源的类器官体外三维培养体系,然而在国内,关于成人原代甲状腺组织来源的ADTO培养技术的研究较少,且不同实验室间培养基组成存在差异,最佳的培养基组成和浓度尚未明确,有待进一步实验探索。因此,在本项目中,我们拟追踪并优化前人关于成人甲状腺组织来源的类器官的培养方法,建立一套更高效、经济的ADTO培养体系,并从组织形态学、分子标志物特征和内分泌功能三方面评估此模型与原代甲状腺组织的一致性,以期为甲状腺器官发育和甲状腺疾病的基础研究提供思路。二、方法选取成人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)患者癌旁正常甲状腺组织,经消化、分离得到甲状腺细胞,以基质胶包埋细胞,设计不同Noggin、EGF浓度和小分子抑制剂组合的ADTO培养基进行类器官培养及传代,显微镜下观察第1代和第2代类器官形成效率和出芽情况,探索并优化ADTO的体外培养方案。采用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,H-E)染色观察类器官模型的组织学形态,免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色检测类器官模型中甲状腺特异性标志物NK2同源框蛋白1(NK2 homeobox protein 1,NKX2.1)、配对盒基因8(paired-box 8,PAX8)和甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)表达情况,评估类器官模型与正常甲状腺组织的一致性。使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测类器官模型上清液中甲状腺素(thyroxine,T4)和三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)水平,鉴定其是否具有激素分泌功能。三、结果 (1)在甲状腺类器官培养体系中,提高关键细胞因子Noggin和EGF浓度及联用3种小分子抑制剂后,第1代和第2代类器官模型出芽更多、球体更大,类器官形成效率更高。 (2)从7例PTC患者的手术标本中成功建立了8例ADTO模型。 (3)H-E染色结果显示,ADTO模型中可见大量由单层立方上皮细胞围成的滤泡结构,与人体甲状腺组织结构特征相似。 (4)免疫组织化学染色结果显示,ADTO模型中甲状腺标志物NKX2.1、PAX8和TG阳性,与来源组织生物标志物特征一致。 (5)ELISA检测结果显示,在ADTO模型上清液中可见T3、T4分泌,表明其具有甲状腺激素分泌能力。四、结论 (1)在ADTO培养体系中,提高Noggin和EGF浓度及联用多种小分子抑制剂后,更有利于ADTO的体外构建。 (2)本研究成功构建了一套完整的包含ADTO培养、传代和冻存的体外三维培养体系。 (3)构建的ADTO模型与原代甲状腺组织一致性较高,为甲状腺器官发育和甲状腺疾病的基础研究提供了技术支持。

来源：评论

Mdivi-1对脓毒症肠屏障功能的保护作用与机制研究

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作者：汤春琼中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

脓毒症是机体对感染的反应失调,严重时会引发危及生命的器官功能障碍[1]。脓毒症肠道屏障功能受损,肠道通透性增加,内毒素以及微生物发生移位并进入循环,是导致多器官功能障碍综合征（MODS）的重要启动因素。肠道屏障功能包括机械屏障... 详细信息

脓毒症是机体对感染的反应失调,严重时会引发危及生命的器官功能障碍[1]。脓毒症肠道屏障功能受损,肠道通透性增加,内毒素以及微生物发生移位并进入循环,是导致多器官功能障碍综合征（MODS）的重要启动因素。肠道屏障功能包括机械屏障、免疫屏障、化学屏障以及生物屏障,各种屏障功能之间交互作用共同参与脓毒症肠道屏障功能损伤的发生。目前针对脓毒症肠道屏障功能损伤临床缺乏有效的防治措施,需要建立针对性防治措施以提高脓毒症的整体治疗效果。免疫屏障是肠道的第二道“防线”,其中肠巨噬细胞是免疫屏障的重要组成部分。肠巨噬细胞大多来自血液循环中的单核细胞,主要定植于肠黏液层,对局部微生物及死细胞等发挥吞噬和降解作用,并产生相关介质促进肠上皮细胞的更新[2]。巨噬细胞对细胞微环境变化反应灵敏,在不同的刺激下,可分化为不同表型的巨噬细胞。脓毒症初期,大量炎症因子释放,M1型巨噬细胞增多并释放促炎因子,进一步加重脓毒症;脓毒症恢复期,M2型巨噬细胞数量增加,释放的抗炎因子增多,从而缓解炎症[3]。有文献报道,调节巨噬细胞M1/M2极化可减轻脓毒症引起的肝损伤[4]。脓毒症诱导的急性肺损伤也可以通过调节巨噬细胞极化得到缓解[5]。脓毒症期间炎症因子大量产生[6,7],促使巨噬细胞M1极化增多,有文献报道脓毒症期间M1型巨噬细胞的增加导致肠道细胞的凋亡率增加,加重脓毒症肠道损伤,进一步增加肠道通透性[8,9]。M1型巨噬细胞的减少和M2型巨噬细胞的增加能促进脓毒症肠道紧密连接蛋白的表达,减轻脓毒症炎症因子的表达,进而发挥改善脓毒症肠屏障通透性的作用[10]。研究发现线粒体功能障碍会抑制M2型巨噬细胞的生成。调节巨噬细胞线粒体形态和功能促使巨噬细胞M1极化,从而导致复发性流产。据此本研究推测能否通过调控巨噬细胞极化对脓毒症肠屏障功能发挥保护作用?尚不清楚。线粒体是体内能量生产的主要细胞器,文献报道显示线粒体功能改变在先天性免疫和适应性免疫调控中发挥关键作用。生理状态下,线粒体一直处于分裂与融合的动态平衡,是维持正常线粒体功能的关键环节[11],由多种因素导致线粒体分裂过度或融合不足可引起线粒体碎片化,线粒体形态异常是导致线粒体功能障碍的重要机制[12]。本实验室前期研究发现脓毒症后多种细胞包括肠上皮细胞、巨噬细胞、心肌细胞等线粒体呈现明显的碎片化。基础研究表明线粒体动力蛋白相关蛋白1（Dynamin-related protein 1,Drp1）是主要的促线粒体分裂蛋白,聚集在线粒体外膜处从而导致线粒体发生裂变[13]。Mdivi-1是Drp1抑制剂,可有效抑制线粒体分裂。同时有研究发现,Mdivi-1能改善线粒体动力,进而改善东莨菪碱诱导的记忆力减退[14];Mdivi-1还可抑制线粒体分裂缓解动脉粥样硬化[15]。Mdivi-1能否通过调控巨噬细胞极化对脓毒症肠屏障功能发挥保护作用?目前尚不清楚。本研究通过盲肠结扎穿孔术（CLP）制备SD大鼠脓毒症模型,脂多糖（LPS）刺激巨噬细胞制备细胞模型,分别从动物水平和细胞水平上研究线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症肠屏障功能的保护作用及具体机制。研究内容主要包括以下三个部分:（1）脓毒症大鼠肠道巨噬细胞的转录组学改变;（2）Mdivi-1对脓毒症肠屏障功能的保护作用;（3）Mdivi-1保护脓毒症肠屏障功能的机制。【研究内容】第一部分脓毒症大鼠肠道巨噬细胞的转录组学改变 SD大鼠行CLP建立脓毒症模型,术后12h,在距胃幽门7cm处取小肠组织50mg进行单细胞转录组测序,通过经典标记物分群获得肠巨噬细胞转录组学数据。通过Mito Carta3.0平台（https://***/）获得线粒体相关基因,分析脓毒症肠巨噬细胞转录组中与线粒体相关的转录改变,采用KEGG富集、GO分析、Venn图分析与线粒体功能和形态相关改变的基因,为后续研究奠定基础。第二部分Mdivi-1对脓毒症肠屏障功能的保护作用 ***-1对脓毒症巨噬细胞线粒体形态和功能的影响基于第一部分结果发现线粒体分裂相关基因在脓毒症肠道巨噬细胞中有重要改变,在此部分实验中,取线粒体分裂抑制剂Mdivi-1观察其对脓毒症肠道巨噬细胞极化与肠屏障功能的影响。为了研究Mdivi-1对脓毒症巨噬细胞线粒体形态及功能的影响,在细胞水平上取RAW264.7细胞系,通过500ng/m L LPS刺激巨噬细胞12h模拟脓毒症,Mdivi-1治疗组是在LPS刺激细胞12h后再加入10μmol/L Mdivi-1处理1h,正常对照组仅采用无血清培养基培养12h。在激光共聚焦显微镜下观察巨噬细胞线粒体形态、线粒体膜电位、巨噬细胞ROS变化,用Seahorse检测线粒体呼吸功能,通过ATP试剂盒检测巨噬细

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白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的击倒抗性与代谢抗性机制研究（双翅目：蚊科）

白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的击倒抗性与代谢抗性机制研究（双...

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作者：袁浩中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

白纹伊蚊(Aedes albopictus)广泛分布于全球温带、亚热带和热带地区,可传播登革热、寨卡病毒病、黄热病、基孔肯雅热等多种疾病,媒介控制是防控蚊媒病的重要环节。因此,应用化学杀虫剂控制蚊媒病的传播已成为普遍情况,而长期大量使用杀... 详细信息

白纹伊蚊(Aedes albopictus)广泛分布于全球温带、亚热带和热带地区,可传播登革热、寨卡病毒病、黄热病、基孔肯雅热等多种疾病,媒介控制是防控蚊媒病的重要环节。因此,应用化学杀虫剂控制蚊媒病的传播已成为普遍情况,而长期大量使用杀虫剂已导致白纹伊蚊对杀虫剂敏感性下降,使蚊虫的防控产生失败风险,已成为重要的公共卫生问题。多项研究表明白纹伊蚊产生杀虫剂抗性是多种机制共同作用的结果,其中最重要的是击倒抗性和代谢抗性。本研究检测和分析了白纹伊蚊现场群体在菊酯类杀虫剂选择压力下击倒抗性基因的进化趋势;使用转录组测序,在现场高抗性群体中筛选与代谢抗性相关的代谢解毒酶基因表达变化情况;利用RNAi技术,验证筛选的细胞色素P450基因介导的代谢抗性机制在白纹伊蚊对溴氰菊酯杀虫剂抗药性产生中的作用。本研究从击倒抗性和代谢抗性两个方面,探讨了白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂抗性的产生机制,为解决白纹伊蚊的杀虫剂抗药性治理问题提供了新的思路。取得以下主要结果: 1.现场采集了上海市16个群体的白纹伊蚊,检测了658只白纹伊蚊的VGSC基因部分片段的突变情况,发现在V1016、I1532和F1534位点存在非同义突变,突变类型有V1016G、I1532T、F1534S、F1534C和F1534I。首次在白纹伊蚊中发现了新的VGSC基因突变类型F1534I,在上海群体中首次报告了V1016G和F1534C。统计发现总的突变频率为80.55%,除奉贤区群体全部为野生型外,其他15个群体均存在不同程度的突变。 2.对上海白纹伊蚊群体VGSC基因不同的突变类型及其频率进行统计,V1016位点突变等位基因为GGA/G(7.14%),I1532位点突变等位基因为ACC/T(3.42%),F1534位点的3种突变等位基因分别为TCC/S(62.77%)、TGC/C(1.06%)和ATC/I(0.15%)。未发现3个位点同时突变的个体情况,两个位点同时突变的个体有86个(13.07%),V1016和F1534位点同时突变的个体最多,共60个(9.12%)。通过与以往资料的比较分析上海白纹伊蚊群体VGSC基因突变进化趋势,显示各群体的VGSC基因突变类型增多,且突变频率升高。 3.获得VGSC基因Domain Ⅲ内的内含子5种类型,分别为内含子A(83 bp)、B(68 bp)、C(80 bp)、D(72 bp)和E(70 bp)。在本研究638个个体中,内含子B最多,占87.30%,其次是A,占12.07%,其他类型较少,统计发现具有内含子B的个体,明显有F1534位点突变倾向。 4.应用上海枫泾(FJ)、朱家角(ZJJ)和嘉定(JY)的对溴氰菊酯抗性高的白纹伊蚊群体,转录组测序获得接触0.4%溴氰菊酯药膜组和空白药膜组的差异表达基因,3个群体的差异表达基因分别为7354个(FJ群体)、6728(ZJJ群体)、1416(JY群体),共同上调的基因69个、下调的53个。q RT-PCR验证部分基因的结果显示与转录组测序的表达趋势相同。 5.对差异表达基因进行GO显著富集分析,结果显示FJ群体主要富集在催化活性、氧化还原酶活性等酶活性相关代谢过程,ZJJ群体主要富集在结合、细胞过程等代谢相关过程,而JY群体富集数量明显较多的是细胞膜、质膜、膜固有成分、膜整体成分等膜相关的GO term,3个群体的差异表达基因GO富集结果存在差异。 6.筛选与代谢抗性相关的细胞色素酶P450、谷胱甘肽-S-转移酶、羧酸/胆碱酯酶、UDP-葡萄糖醛酸基转移酶和ABC转运蛋白基因的差异表达情况,显示FJ群体上调的基因99个,下调31个,ZJJ群体上调57个,下调11个,JY群体上调12个,下调9个。3个群体中仅有注释为CYP4C1的LOC109418974基因同时下调,无同时上调的基因。若分析2个群体的情况,发现在FJ和ZJJ群体中,同时上调的有28个基因,其中CYP450s有CYP12A2、CYP28A5、CYP4D2、CYP6A14、CYP6A2、CYP9F2、CYP9B2。 7.以筛选获得的转录本LOC109398898(基因注释为CYP28A5)作为目的基因,设计了相应的si RNA,对白纹伊蚊FJ群体雌性成蚊进行显微注射。对注射后的白纹伊蚊进行q RT-PCR检测,结果显示目的基因的表达大幅下降,接触溴氰菊酯进行生物测定后,与对照组(42.91%)相比,死亡率明显上升(82.44%)。结果提示干扰CYP28A5基因的表达,可能会影响白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性产生。本研究对上海市各区白纹伊蚊群体VGSC基因进行了全面测定,首次在上海市发现了V1016G和F1534C突变,发现了新的突变类型F1534I,表明上海市白纹伊蚊群体对菊酯类杀虫剂的击倒抗性发展处于快速进化的阶段

来源：评论

线粒体DNA编码肽MOTS-c对鱼藤酮诱导多巴胺神经元变性损伤的保护作用及机制研究

线粒体DNA编码肽MOTS-c对鱼藤酮诱导多巴胺神经元变性损伤的保护...

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作者：张启夫中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景:鱼藤酮来自于鱼藤属植物的根部和茎叶,过去一直以来被视为安全有效的生物源性农药,广泛被应用于农业杀虫和鱼塘清理。近年来,大量的流行病学和实验室研究显示,鱼藤酮暴露与散发性帕金森病发病有关。鱼藤酮进入细胞内可以靶向... 详细信息

研究背景: 鱼藤酮来自于鱼藤属植物的根部和茎叶,过去一直以来被视为安全有效的生物源性农药,广泛被应用于农业杀虫和鱼塘清理。近年来,大量的流行病学和实验室研究显示,鱼藤酮暴露与散发性帕金森病发病有关。鱼藤酮进入细胞内可以靶向线粒体复合体I,选择性损伤中脑多巴胺能神经元,引起神经元的退行性变。课题组前期大量的研究显示鱼藤酮染毒多巴胺神经元可以导致线粒体稳态失衡、线粒体DNA的拷贝数和完整性均发生明显改变。线粒体衍生肽MOTS-c是近年来发现的一种由线粒体DNA开放阅读框编码的小分子多肽,在体内发挥多种生物学功能,比如调节细胞内糖代谢和脂代谢、抑制炎症反应、改善线粒体功能以及延缓衰老。MOTS-c改善胰岛素抵抗和营养物质代谢紊乱,进而产生机体抗氧化应激和抗炎症反应的作用。MOTS-c在非应激条件下定位于细胞核外,细胞应激情况下,MOTS-c可由线粒体易位至细胞核内,激活抗氧化应激防御反应,调节细胞内物质代谢,维持细胞正常的稳态。此外,MOTS-c还可以调节能量代谢,改善线粒体功能,提高机体抗氧化应激能力。虽然文献已报道,MOTS-c功能失调与多种衰退性疾病有密切关系,但MOTS-c功能失调在神经退行性疾病比如帕金森病中的作用未见报道。氧化应激可能是导致帕金森病的主要机制之一,在帕金森患者黑质中检测到DNA和蛋白质高度氧化,脂质过氧化水平增加,谷胱甘肽减少。研究发现,Nrf2抗氧化元件信号通路在保护细胞免受内源性和外源性氧化应激方面起到重要作用。文献报道,Nrf2基因过表达或者激活可以缓解α-突触核蛋白聚集造成的多巴胺神经元损伤效应。在MPTP小鼠模型中也观察到,Nrf2基因敲低加剧了MPTP所致的多巴胺神经元氧化损伤。同样,Nrf2丢失增加了神经毒物的易感性。因此,Nrf2可能是缓解多巴胺神经元变性损伤的有效策略之一。在与线粒体交流的细胞器中细胞核备受关注,因为它能调控适应性基因的表达。多种核编码的线粒体靶向蛋白可作为传递线粒体信号的手段存在于细胞核中。而目前mt DNA固有编码的因子主动迁移到细胞核的蛋白报道很少。MOTS-c是一种线粒体编码的肽,可以动态易位至细胞核内,调节代谢应激适应性核基因表达。研究发现,内源性MOTS-c在氧化刺激下可易位至细胞核内,通过与抗氧化元件Nrf2结合,启动抗氧化系统以抵抗氧化应激损伤。而内源性和外源性MOTS-c在鱼藤酮诱导的多巴胺神经元变性损伤中的作用机理证据不足。因此,探索MOTS-c在鱼藤酮诱导的多巴胺神经元变性中的机理作用有望成为潜在的治疗策略手段具有重要意义。研究目的: 基于以上研究背景,我们通过构建鱼藤酮暴露诱导的多巴胺神经元变性损伤动物模型和细胞模型,探讨线粒体DNA编码肽MOTS-c在鱼藤酮诱导的多巴胺神经元变性损伤中的作用和潜在的机制。研究方法: 第一部分:动物实验 (1)体内构建鱼藤酮慢性暴露诱导多巴胺神经元变性损伤动物模型:将体重约为300-350g的SD雄性大鼠随机分为3组:对照组(Con)、鱼藤酮中毒组(Rot)组、MOTS-c+Rot处理组,每组各15只大鼠。Rot组颈背部注射鱼藤酮(2mg/kg/day持续3d,1mg/kg/day持续7d,0.5mg/kg/day持续20d,共计30d)构建鱼藤酮诱导的多巴胺神经元变性损伤动物模型,MOTS-c+Rot组大鼠腹腔给与MOTS-c(5mg/kg/day)干预和颈背部皮下注射对应的等剂量的Rot,持续时间30d。 (2)通过旷场试验和转棒实验分析,观察外源性MOTS-c干预对鱼藤酮暴露大鼠神经行为学的影响; (3)采用H&E染色、免疫组织化学和蛋白免疫印迹分析,探究外源性MOTS-c干预对鱼藤酮暴露大鼠多巴胺神经元变性损伤的影响; (4)通过检测丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力,评价外源性MOTS-c干预对鱼藤酮暴露大鼠纹状体组织氧化应激损伤的影响; (5)使用蛋白免疫印迹检测分析,观察外源性MOTS-c干预对鱼藤酮暴露SD大鼠纹状体组织Nrf2/Keap1调控的抗氧化系统相关蛋白表达的影响。第二部分:细胞实验 (1)构建鱼藤酮染毒多巴胺神经元变性损伤的细胞模型。实验分为对照组(Con)和鱼藤酮中毒组(Rot,1.0μM,课题组前期摸索所得),分别通过免疫荧光染色和蛋白免疫印迹实验,观察鱼藤酮暴露对内源性MOTS-c在细胞亚细胞器内分布和表达的影响。 (2)不同剂量鱼藤酮(0.1μM、0.5μM、1.0μM、1.5μM)暴露PC12细胞24h,通过蛋白免疫印迹实验和ELISA检测,观察不同浓度鱼藤酮暴露对内源性MOTS-c表达和分泌影响。 (3)通过CCK-8和LDH检测,分析外源性MOTS-c干预对鱼藤酮暴露PC12细胞活力和LD

来源：评论

沪地龙多重位点特异性PCR鉴定和基原间质量评价研究

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作者：李雷中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(***)、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体,广地龙是对前1种的习称,沪地龙是对后3... 详细信息

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(***)、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体,广地龙是对前1种的习称,沪地龙是对后3种的习称,临床应用广泛,对心脑血管疾病疗效确切。沪地龙相当于一味多基原药材,但现科学研究与临床应用多不对其作基原区分,混而用之的现象较为严重。随着科技发展和对中药认识的不断深入,发现多基原药材的不同基原存在药效上的差异,基原混用不利于临床功效和制剂产品质量的均一性和稳定性。而且,国家食品药品监督管理局药品审评中心发布的《中药新药用药材质量控制研究技术指导原则(试行)》(2020年第31号)中明确指出使用多基原药材应固定使用其中之一或固定使用比例;还在《中药新药研究各阶段药学研究技术指导原则(试行)》(2020年第37号)中也提出中药新药要明确药材使用基原。因此,有必要建立沪地龙鉴定方法明确其基原,开展基原间质量差异研究,厘清差异所在,为临床合理化用药提供理论依据,从而提高临床用药的合理性、有效性和稳定性,也为含地龙药物研发与质量评价提供参考。一、研究方法: 本研究以沪地龙3个基原为研究对象: (一)通过文献和实地调研的方法,对沪地龙应用和发展的历史沿革、资源分布特点、采收时间、炮制方法、市场占有情况和人工养殖情况进行调研,并收集样品。 (二)应用传统鉴定方法和COI条形码鉴定方法对收集到的样本进行鉴定,对所得序列进行系统发育分析,计算3个基原种内种间遗传距离,并提取各基原的特征序列;依据线粒体全基因序列差异设计3个基原的特异性PCR鉴别引物,构建多重位点特异性PCR鉴定方法。 (三)应用高效液相色谱法建立沪地龙3个基原水溶性成分指纹图谱,运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)软件分别对基原内和基原间的相似度进行评价。 (四)对沪地龙3个基原的尿苷、色氨酸、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷和鸟苷等6种小分子水溶性成分含量进行测量并应用聚类分析、正交偏最小二乘判别分析和主成分分析法进行含量差异比较分析,并依据主成分得分对各批次样本进行综合性评价。 (五)对水溶性成分中的蛋白含量进行测定,应用非参数检验方法比较基原间含量差异;使用SDS-PAGE方法建立蛋白指纹图谱,依据条带分子量构建“条带矩阵”,应用聚类分析、正交偏最小二乘判别分析对3个基原间蛋白种类差异进行比较分析。 (六)应用纤维蛋白平板法,分别以蚓激酶和尿激酶为参照品,对3个基原的纤溶生物活性进行测定,应用单因素方差分析法比较基原间纤溶生物活性差异。二、研究结果: (一)沪地龙资源调查。沪地龙以华东、华中地区为主产区,资源分布广泛,物种特征与本草记载的药用蚯蚓特征相符。通俗环毛蚓和威廉环毛蚓在生存环境、形态特征等方面较为相似,而与栉盲环毛蚓易于区分,但加工成药材后三者外观形态相近,难以区分。物种调查发现上海、江苏、安徽、湖北、湖南、河南和浙江等地市场流通基原以通俗环毛蚓为主。沪地龙市场占有率和价格均低于广地龙,且无单一基原药材销售。沪地龙人工养殖技术未取得实质性突破。 (二)COI条形码序列分析。通俗环毛蚓与威廉环毛蚓种间遗传距离为0.070,与栉盲环毛蚓为0.190,栉盲环毛蚓与威廉环毛蚓种间遗传距离为0.180。通俗环毛蚓种内遗传距离为0.000～0.031,威廉环毛蚓种内遗传距离为0.000～0.061,栉盲环毛蚓种内遗传距离为0.000～0.002。通俗环毛蚓提取到2条特征性序列,威廉环毛蚓和栉盲环毛蚓各提取到1条。建立的多重位点特异性PCR方法能根据扩增片段的长度鉴定沪地龙基原。 (三)HPLC指纹图谱相似度。3个基原与对照图谱的相似度在0.910～0.939之间,16批通俗环毛蚓与其对照图谱的相似度在0.921～0.988之间,各批次间的相似度为0.831～0.983;12批威廉环毛蚓与其对照图谱的相似度在0.718～0.970之间,其中小于0.90的3批次,各批次间的相似度为0.508～0.976;12批栉盲环毛蚓与其对照图谱的相似度在0.910～0.995之间,各批次间的相似度为0.840～0.995。通俗环毛蚓与威廉环毛蚓的相似度为0.987,栉盲环毛蚓与通俗环毛蚓的相似度为0.697,栉盲环毛蚓与威廉环毛蚓的相似度为0.717。 (四)小分子水溶性成分含量的化学计量学分析。通俗环毛蚓与威廉环毛蚓6种成分的总含量相近,栉盲环毛蚓高于前二者。聚类分析结果显示,3个基原40批次样品聚类较为分散,不能较好区分3个基原。正交偏最小二乘判别分析结果,通俗环毛蚓和威廉环毛蚓不能区分,但栉盲环毛蚓能与二者较好区分,差异性成分

来源：评论

苦参碱衍生物MASM对小鼠急性抑郁模型的抗抑郁效果及机制研究

引用

作者：李超然中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景抑郁症是能够长期且反复发生的、以心境或情绪低落为主要表现的情感障碍,已成为全球重大疾病负担。抑郁症发病机制目前尚无定论,没有任何一种单一因素可以概括抑郁症的全貌。抑郁症的病因被归纳为多种抑郁症发病假说,线粒体功... 详细信息

研究背景抑郁症是能够长期且反复发生的、以心境或情绪低落为主要表现的情感障碍,已成为全球重大疾病负担。抑郁症发病机制目前尚无定论,没有任何一种单一因素可以概括抑郁症的全貌。抑郁症的病因被归纳为多种抑郁症发病假说,线粒体功能异常假说是其中之一。线粒体是细胞能量工厂,通过氧化磷酸化为机体提供了约95%的三磷酸腺苷(ATP)。线粒体也是响应外界应激源的第一反应者。成人大脑的能量需求高,极容易受到线粒体能量供应的影响。目前临床一线抗抑郁药主要是基于单胺假说研制的。尽管治疗有效,但这些药物还存在诸多不足,例如起效延迟、药效有限等。研发新型、快速起效、不良反应少的抗抑郁药有重大现实意义。天然化合物苦参碱已应用于临床治疗,药理学作用广泛,在实验室研究中展现了抗抑郁治疗和线粒体调控潜力,但是苦参碱活性弱,生物利用度较低。MASM是苦参碱经结构优化而成的衍生物,抗炎活性、生物利用度优于苦参碱。实验室研究发现MASM对肝纤维化、类风湿关节炎等疾病有治疗效果,并且展现了神经系统保护效应。作为一种单体化合物,MASM化学结构明确,便于新药开发。MASM是否也有抗抑郁效果,是否能成为抑郁症治疗的药物选择之一值得深入探讨。神经元是中枢神经系统最小的功能单元,能接收、处理和传输信息。小胶质细胞是中枢免疫细胞,能够调节突触可塑性和神经网络功能。小胶质细胞释放的炎症介质能影响神经元功能,增加对应激的易感性,是抑郁症发生的促进原因之一。本实验采用LPS腹腔注射的方式建立小鼠急性抑郁模型,以LPS刺激BV2小胶质细胞和HT22神经元细胞建立体外模型,以抑郁症的线粒体功能异常假说为基础,旨在研究MASM的抗抑郁疗效及其对线粒体的保护作用,在小胶质细胞层面进一步研究MASM对线粒体保护的可能作用机制,以便在深入了解抑郁症发病机制的基础上,为临床抗抑郁治疗提供更多可能性。研究目的第一部分:探索MASM的抗抑郁作用及其对小鼠海马神经递质的影响; 第二部分:在动物层面和细胞层面探索MASM对线粒体形态结构、功能和相关蛋白的作用效果; 第三部分:在细胞层面进一步探究MASM保护小胶质细胞线粒体功能的可能作用机制。研究方法第一部分:(1)选取BALB/c小鼠腹腔注射LPS(0.83 mg/kg)构建急性抑郁模型,造模前2小时腹腔注射MASM(0.25 mg/kg)进行干预,24小时后检测抑郁样行为。(2)抑郁样行为以悬尾实验(TST)、强迫游泳实验(FST)和旷场实验(OFT)的相应检测指标来反映。TST和FST中的不动时间反映抑郁样绝望行为,OFT行为实验中的总路程和中央路程反映自主活动情况。(3)采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MSMS)检测小鼠海马谷氨酸含量。第二部分:(1)透射电子显微镜(TEM)观察小鼠海马CA1区的细胞及细胞内部超微结构。(2)蛋白免疫印迹(WB)实验检测小鼠海马、BV2细胞和HT22细胞内HO-1蛋白表达。(3)细胞增殖(CCK8)实验反映MASM对LPS刺激的BV2细胞和HT22细胞增殖的影响。(4)采用生物化学发光的方式测量MASM干预前后BV2细胞和HT22细胞内ATP含量。(5)流式细胞仪检测MASM对BV2细胞和HT22细胞内活性氧(ROS)的作用。第三部分:(1)酶联免疫吸附实验(ELISA)用于检测BV2细胞上清中促炎细胞因子TNF-α的分泌情况。(2)蛋白免疫印迹(WB)实验检测BV2细胞内LC3、P62、SIRT1蛋白表达情况。研究结果第一部分:MASM在小鼠急性抑郁模型中的抗抑郁作用 1、腹腔注射LPS后24小时,小鼠出现TST不动时间和FST漂浮时间延长的抑郁样行为,海马脑区谷氨酸神经递质含量减少。 2、LPS造模前2小时腹腔注射0.25 mg/kg剂量MASM能显著缓解小鼠抑郁样行为。 3、MASM改善LPS抑郁模型引发的小鼠海马脑区谷氨酸神经递质含量减少。第二部分:MASM在急性抑郁模型中对线粒体功能的保护效应 1、对小鼠海马的研究可见(1)与空白对照组相比,LPS抑郁模型组小鼠CA1区细胞超微结构改变,表现为神经元凋亡增加、线粒体形态异常、内质网肿胀,MASM缓解上述形态学改变。(2)LPS抑郁模型小鼠的海马组织HO-1蛋白表达高于对照组小鼠,MASM治疗进一步增加HO-1蛋白表达。 2、以1μg/m L浓度LPS刺激BV2细胞建立体外模型,结果显示(1)LPS及不同浓度MASM作用24小时影响BV2细胞增殖。LPS使细胞增殖增加。LPS与1μM、5μM、10μM和20μM浓度的MASM共同作用时,细胞增殖小于LPS组。LPS与50μM浓度的MASM共同作用时,细胞增殖与对照细胞无差异。LPS与100μM浓度的MASM共同作用时,细胞增殖小于对照细胞。(

来源：评论

吸入性损伤患者外周血免疫细胞组成特征与相互作用的单细胞测序分析研究

吸入性损伤患者外周血免疫细胞组成特征与相互作用的单细胞测序分...

引用

作者：沈纵中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

背景:吸入性损伤是指呼吸过程中因进入气道的热力（高温气体、烟雾、蒸汽）或化学刺激物所造成的呼吸道甚至肺实质损伤,可表现为直接热损伤、化学刺激物吸入造成的组织损伤、吸入毒素引起的全身反应,或这些损伤的叠加。其既可独立出现,... 详细信息

背景: 吸入性损伤是指呼吸过程中因进入气道的热力（高温气体、烟雾、蒸汽）或化学刺激物所造成的呼吸道甚至肺实质损伤,可表现为直接热损伤、化学刺激物吸入造成的组织损伤、吸入毒素引起的全身反应,或这些损伤的叠加。其既可独立出现,也可伴随爆炸伤、烧伤等同时发生,中重度吸入性损伤易演变成急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征,目前已成为烧伤三大主要死亡原因之一。国内外对于吸入性损伤的诊断和严重程度的分级缺乏统一的标准,基于支气管镜检查的简明损伤评分本质上是主观的,且吸入性损伤进展迅速,早期影像学表现往往无特殊,容易漏诊失去最佳治疗时机;治疗策略未形成统一的指南,国内仅有2018版专家共识供参考,临床上以对症支持治疗为主,尚无特异有效的治疗方法,且改善疾病预后仍面临着巨大挑战。上述问题源自于吸入性损伤的病理生理机制尚未完全阐明,有研究表明和直接热损伤、气道阻塞以及气道上皮及血管内皮受损后炎性细胞浸润并激活复杂炎症级联反应有关,因此,理解免疫细胞的不同亚群状态变化和各种细胞之间相互作用,对于探索吸入性损伤发展阶段是有所助益的,而新兴的单细胞测序技术能够在单个细胞分辨率水平对免疫细胞不同亚群进行识别和表征,揭示其在不同病程阶段组成特征,准确定位细胞功能,解析细胞间相互作用,以其独特优势越来越多地应用于肺部疾病相关免疫研究。目的: 利用单细胞转录组测序技术,描绘吸入性损伤患者不同病程阶段外周血免疫细胞图谱,并挖掘关键表达基因,通过多维生物信息学角度分析,探究吸入性损伤急性期、进展期和康复期外周血免疫细胞种类及其丰度和功能的动态变化,阐明免疫细胞亚群组成特征,进一步探索特定免疫细胞亚群间相互作用,结合临床资料,以期为揭示发病机制、动态监测病程发展以及免疫治疗提供理论依据和思路。方法: 根据研究纳入排除标准,以2021年3月至2021年12月期间在海军军医大学第一附属医院（上海长海医院）烧创伤中心收治的3名成年吸入性损伤患者和招募的3例健康对照者作为受试研究对象,伤后24小时内入院时、住院第3日及出院前1日（对应吸入性损伤急性期、进展期和康复期）采集患者新鲜外周血,使用Ficoll密度梯度离心法分离得单个核细胞和中性粒细胞悬液,随后根据BD Rhapsody标准流程,提取单细胞并进行单细胞转录组测序,经过数据质控,最后通过单细胞降维和聚类分析、细胞类型注释和细胞亚群标志基因鉴定、生物学功能富集分析、信号通路富集分析、拟时序分析和细胞通讯分析等方法,对数据进行生物信息学分析。结果: 1、本研究对吸入性损伤患者不同病程阶段和健康对照组外周血单个核细胞和中性粒细胞进行单细胞转录组测序,共获得77101个高质量免疫细胞,共鉴定出5种主要的免疫细胞群,聚类分析出18个免疫细胞亚群。 2、依据病程发展的不同阶段,样本中不同类型细胞分布和占比呈现出异质性,T细胞、NK细胞和B细胞占比减少,髓系细胞占比增加。烧伤合并吸入性损伤患者相较于单纯性吸入性损伤患者外周血免疫细胞构成出现更明显改变,与康复期和健康对照相比,非经典单核细胞数量和占比在吸入性损伤急性期与进展期显著下降。 3、非经典单核细胞与FCGR3A+-NK细胞具有正相关性,相关系数为0.56;表达趋化作用的FCGR3A和CX3CR1基因表达显著上调,进一步对差异基因功能富集分析,提示非经典单核细胞作为循环系统中的巡逻细胞,在免疫系统中行使监督的功能。 4、通过细胞通讯分析,共识别出9条具有生物学意义的配体-受体对,涉及36条信号通路。经典单核细胞和非经典单核细胞是输出信号模式的主导细胞。非经典单核细胞亚群显著通过GALECTIN、PECAM-1、SELPLG、TNF、CD86协调向外发送信号。结论: 1、本研究基于单细胞转录组测序技术,初步构建了吸入性损伤不同病程阶段外周血免疫细胞图谱,对细胞丰度和功能进行了表征,发现髓系细胞分布和数量发生改变,揭示先天性免疫在吸入性损伤病程进展中发挥重要作用。 2、在吸入性损伤急性期和进展期,外周血非经典单核细胞占比显著下降,且趋化因子FCGR3A和CX3CR1基因高度表达,提示在吸入性损伤发生发展时非经典单核细胞可能在趋化因子趋化作用下迁移至炎症组织,可以进一步从非经典单核细胞迁移角度探寻吸入性损伤发病机制。 3、通过细胞通讯模式分析,发现非经典单核细胞是输出信号模式的主导细胞,其对整个细胞通讯环境调控较特殊,可以通过多种配体-受体对介导信号通路参与吸入性损伤疾病进展。

来源：评论

“肠道菌群-CDCA”在二氢杨梅素调节GLP-1改善胰岛素抵抗中的作用及机制研究

“肠道菌群-CDCA”在二氢杨梅素调节GLP-1改善胰岛素抵抗中的作用...

引用

作者：李鹏飞中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

背景胰岛素抵抗是指各种原因引起的胰岛素生理作用减弱,导致其促进葡萄糖摄取和利用效率下降、机体代偿性分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症以维持正常血糖的症状。胰岛素抵抗是心血管疾病、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等多种代谢性疾病... 详细信息

背景胰岛素抵抗是指各种原因引起的胰岛素生理作用减弱,导致其促进葡萄糖摄取和利用效率下降、机体代偿性分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症以维持正常血糖的症状。胰岛素抵抗是心血管疾病、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等多种代谢性疾病的共同危险因素,目前尚无行之有效的治疗方法。胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）是一种由肠道L细胞分泌的短肽类激素,能够促进胰岛β细胞分泌胰岛素,抑制胰高血糖素分泌,产生降血糖作用。GLP-1受体（GLP-1R）广泛分布于胃肠道、心血管系统、肌肉等多个器官和组织,GLP-1R激动剂（GLP-1RA）等系列临床药物已经在治疗肥胖、糖尿病方面展现出良好的应用前景,但仍存在药物副作用及依从性差的弊端。因此,如何增加内源性GLP-1水平是胰岛素抵抗防治研究领域亟需解决的重要科学问题。二氢杨梅素（DHM）是一种多酚类植物化学物,主要存在于显齿蛇葡萄属（Ampelopsis grossedentata）(俗称“藤茶”)等植物中。研究发现,DHM能够在体内发挥代谢调节作用,可能成为防治胰岛素抵抗及多种慢性代谢性疾病的理想植物化学物。本实验室前期研究发现,DHM能够增加有氧运动小鼠血清GLP-1水平,增强小鼠有氧运动耐力。此外,DHM能够促进肠黏膜屏障完整性的维持,延缓非酒精性脂肪性肝病发生。预实验研究提示,DHM可能调节高脂饮食诱导小鼠肠道菌群组成和肠道短链脂肪酸含量。近年来研究发现,肠道由于其独特结构、生理功能和组织微环境,含有多种免疫细胞亚群及功能分子,形成了独特的区域免疫特性,肠上皮间淋巴细胞（intestinal epithelial cells,IELs）的部分亚型在肥胖、2型糖尿病发生中发挥重要作用,并可能影响肠道GLP-1表达水平。实验室前期研究发现,DHM干预后可增加结肠固有层3型固有淋巴样细胞（ILC3）以及IL-22+ILC3细胞比例,促进ILC3细胞的IL-22表达水平,增强小鼠肠黏膜免疫屏障功能。根据以上分析,本课题组提出“DHM可能通过调节肠道菌群及相关代谢产物,调节肠道L细胞或IELs细胞影响GLP-1水平,改善高脂饮食诱导胰岛素抵抗”的科学假说。本研究旨在深入揭示DHM改善胰岛素抵抗的作用机制,为糖尿病等慢性代谢性疾病营养干预提供新策略。目的通过高脂饮食诱导小鼠模型和体外实验,聚焦肠道菌群和代谢物及肠道区域免疫,研究DHM对高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗的作用,揭示肠道菌群及相关代谢产物、肠道L细胞、肠上皮间淋巴细胞（IELs）在DHM改善胰岛素抵抗及调节GLP-1中的作用机制,为防治胰岛素抵抗提供新的干预靶点和膳食营养干预策略。方法 1.二氢杨梅素对高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗及GLP-1表达影响。（1）利用C57BL/6J小鼠进行高脂饮食干预8周,建立胰岛素抵抗模型,DHM均匀混入高脂饲料中,小鼠自由进食。检测小鼠体质量、摄食量、空腹血糖、口服糖耐量（OGTT）、胰岛素耐量（ITT）、腹腔糖耐量（IPGTT）及相关血清学指标,评估DHM对高脂饮食诱导胰岛素抵抗发生作用。（2）通过免疫荧光检测肠道组织GLP-1分泌水平,利用RT-qPCR及ELISA法检测肠道组织GLP-1分泌相关基因m RNA和蛋白表达水平,评价DHM对高脂饮食诱导小鼠肠道GLP-1水平的影响。 2.二氢杨梅素通过肠道菌群改善小鼠胰岛素抵抗及GLP-1水平的作用研究。（1）通过16S rRNA测序对小鼠肠道粪便进行检测,开展α多样性、β多样性、LEfSe及Spearman相关性分析,通过门、科、属水平的群落变化分析肠道菌群构成差异,评价DHM对高脂饮食诱导小鼠肠道菌群影响。（2）通过菌群清除及菌群移植实验,研究肠道菌群在DHM调节高脂饮食诱导小鼠糖耐量、胰岛素耐量、GLP-1表达水平中的作用。 3.二氢杨梅素通过肠道代谢物CDCA调节肠L细胞和IELs改善胰岛素抵抗及GLP-1水平的作用研究。（1）通过非靶向代谢组学技术对小鼠肠道粪便进行检测,开展PCA主成分分析,绘制火山图和Ven图,进行KEGG功能通路富集和生物信息学分析,探索DHM对高脂饮食诱导小鼠肠道代谢通路的影响。（2）采用靶向代谢组学技术对小鼠肠道粪便胆汁酸代谢谱进行检测,筛选与DHM改善高脂饮食诱导小鼠GLP-1水平密切相关的胆汁酸代谢产物。（3）利用高脂饮食干预的小鼠胰岛素抵抗模型,给予鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）及FXR受体拮抗剂Z-Gug进行干预,观察小鼠体质量、摄食量、血清糖脂代谢指标变化,利用OGTT、IPGTT、免疫荧光、RT-q PCR、ELISA等检测方法,观察CDCA对小鼠FXR受体、GLP-1相关m RNA及蛋白表达

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