检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：赵克开第二军医大学

学位级别：博士

【研究背景】乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒科的原型(prototype),与包括鸭乙型肝炎病毒(DHBV)在内的其它嗜肝DNA病毒具有相似的生物学特性。共价闭合环状DNA(cccDNA)是嗜肝DNA病毒复制过程中在宿主细胞核内形成的第一个复制中间体,它... 详细信息

【研究背景】乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒科的原型(prototype),与包括鸭乙型肝炎病毒(DHBV)在内的其它嗜肝DNA病毒具有相似的生物学特性。共价闭合环状DNA(cccDNA)是嗜肝DNA病毒复制过程中在宿主细胞核内形成的第一个复制中间体,它的形成标志着病毒在宿主细胞内感染状态的建立和复制循环的开始,同时它还是病毒在细胞内复制过程的初始模板。由于其在肝细胞核内形成含量相对稳定的cccDNA池,而目前绝大多数临床上应用的抗HBV药物难以清除细胞内的cccDNA,因而在停止抗病毒治疗后乙型肝炎容易复发。HBV cccDNA的监测对抗HBV药物的研发和应用评价,以及慢性乙型肝炎(CHB)患者的病情监测和抗病毒疗效评估等具有十分重要的临床意义。但由于HBV cccDNA只存在于被感染细胞的细胞核内, HBV cccDNA检测需要通过肝组织活检等手段取得足量的肝组织标本才能进行,患者对此的依从性较差,导致HBV cccDNA检测在临床中的开展和推广应用受到限制。近年来有文献报道在慢性乙型肝炎患者的血清中检测到了cccDNA,并发现血清HBV cccDNA的水平与血清HBV载量和ALT水平显著相关,血清中是否出现cccDNA还与肝组织中的总HBV DNA和cccDNA水平的高低有关,还有学者发现乙肝患者拉米夫定治疗后血清HBV cccDNA呈动态下降。以上研究结果表明血清HBV cccDNA检测似乎也可以用于评价乙肝患者的病情以及抗病毒的疗效,因而给HBV cccDNA检测从实验室研究进入临床应用带来新的希望。但他们的研究结果因检测方法特异性的缺陷而倍受争议,需要通过深入的研究进行验证。本研究以我们实验室建立的一套特异、灵敏的HBV cccDNA检测技术为基础,分别以不同程度肝损伤的DHBV感染上海麻鸭和乙型肝炎患者为研究对象,探讨在外周血中检测cccDNA的可能性及相关的影响因素。本研究共分为三个部分:(一)乙肝病毒与cccDNA在血液中的清除动力学和稳定性比较研究;(二)鸭肝损伤模型血清中鸭乙肝病毒cccDNA的动态检测;(三)乙型肝炎患者血清中乙肝病毒cccDNA的动态检测。第一部分乙肝病毒与cccDNA在血液中的清除动力学和稳定性比较研究目的以HBV为对照观察HBV cccDNA在外周血中的血液动力学特征和稳定性,探讨在外周血中检测cccDNA的可行性。材料与方法①将12只1周龄上海麻鸭随机分为A、B两组,A组和B组每只鸭分别以1.2×109 copies/ml的HBV携带者血清和含1.2×109 copies/ml pBS HBV 3.6Ⅱ质粒(模拟cccDNA)的人血清1 ml颈静脉注射。在注射后0.25 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h和32 h,分别采静脉血进行HBV DNA定量检测。②将1.2×108copies/ml的HBV携带者血浆和含有1.2×108copies/ml的pBS HBV3.6Ⅱ质粒(模拟cccDNA)人血浆各50μl,分别用5 U的RQ1 DNase酶处理37℃1 h,并以未加酶处理的相应血浆为对照,观察核酸酶处理前后血浆中HBV DNA的变化。③将1.2×108 copies/ml的HBV携带者新鲜血浆和含1.2×108 copies/ml pBS HBV 3.6Ⅱ质粒(模拟cccDNA)的正常人新鲜血浆各1.5 ml分别置于37℃水浴,在水浴后4h、8h、12h、16h、24h、2d、3d、4d、5d、6d和7d,每管分别取100μl血浆进行HBV DNA定量检测。结果①HBV和pBS HBV 3.6Ⅱ质粒在鸭血液中载量的动态变化均符合单相指数衰减曲线模型。在注射后0.25～24 h内血液中均可检测到HBV和质粒(cccDNA),32 h后则未能检出。HBV和质粒(cccDNA)在鸭血液中的平均半衰期分别为4.536±0.769 h和4.511±0.791 h,二者无统计学差异(P=0.9593);②在核酸酶处理前后,血浆中的HBV颗粒无明显变化,而质粒含量则下降了两个数量级(log10)。但相同量的HBV颗粒和pBS HBV 3.6Ⅱ质粒在体外水浴4h～7d,各时点血浆中HBV颗粒和质粒(cccDNA)的量无明显变化(变异系数分别为1.05%和1.73%),同一时点血浆HBV和质粒(cccDNA)的量配对t检验也无显著统计学差异(P=0.8568)。结论HBV cccDNA在血液中的清除动力学特征和稳定性均与HBV相似,血清HBV cccDNA检测在技术上具有可行性。第二部分鸭肝损伤模型血清中鸭乙肝病毒cccDNA的动态检测目的探讨在不同程度肝损伤的DHBV感染上海麻

关键词：乙型肝炎病毒 cccDNA 动力学半衰期鸭乙型肝炎病毒 cccDNA 动物模型肝损伤动力学乙型肝炎病毒 cccDNA 重型乙型肝炎肝功能衰竭动力学

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组织工程技术移植雪旺细胞治疗脊髓损伤的初步实验研究

组织工程技术移植雪旺细胞治疗脊髓损伤的初步实验研究

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作者：连小峰第二军医大学

学位级别：博士

随着现代工业、交通运输业和建筑业的发展,脊髓损伤(spinal cord injury, SCI )的发生率也呈逐年上升的趋势。据报道,美国每年约有1万例新的脊髓损伤患者,我国上海脊髓损伤的年发生率约为13.7/100万。当今脊髓损伤在全球呈:高致残率(全... 详细信息

随着现代工业、交通运输业和建筑业的发展,脊髓损伤(spinal cord injury, SCI )的发生率也呈逐年上升的趋势。据报道,美国每年约有1万例新的脊髓损伤患者,我国上海脊髓损伤的年发生率约为13.7/100万。当今脊髓损伤在全球呈:高致残率(全瘫为67%)、高耗费(5-7万美元/患者/年,美国)、低死亡率(<5%)、患者主要为青壮年(70%患者<40岁)等特点,给社会带来巨大的损失和沉重的负担,已成为全球性的医疗难题。目前临床上对脊髓损伤的治疗主要着手于防治脊髓损伤后脊髓继发性损害、保护残存神经元功能,方法有早期大剂量甲基强的松龙冲击疗法、外科干预及康复训练等,而这些方法对轴突连续性中断导致的神经元靶源性营养供给减少和生理电信号及化学传递功能受损的作用微乎其微,因而预后仍然很差。这是由于脊髓损伤后脊髓神经元再生功能差,损伤区域与正常组织之间有星形胶质细胞增生形成胶质瘢痕作为物理屏障及受损神经元轴突缺少神经营养因子的刺激而无延长能力作为化学屏障等因素有关。因此,促进脊髓再生、克服再生屏障是目前国内外研究的重点及热点。本项目旨在探索利用组织工程技术进行自体雪旺氏细胞移植的方法治疗脊髓损伤,使脊髓损伤后神经纤维再生、传导功能恢复,为脊髓损伤的治疗作进一步基础及临床研究提供理论基础。近20年来国内外研究已证明,成年神经元具有再生的潜能,损伤的脊髓神经元在适宜的条件下可以再生。在促进轴突再生的基础研究中,通过多种技术如细胞移植、基因治疗、细胞内分子信号的修饰和克服再生屏障等研究,证实成年哺乳动物的中枢神经元在受损后确实可以再生,甚至产生靶支配。但脊髓损伤后解剖重建和功能恢复是十分棘手的问题,当前对脊髓损伤后修复研究的主要途径是从促进神经元轴突的再生和组织移植替代两个方面来探讨脊髓修复及功能恢复的可行性。于是,雪旺细胞移植治疗脊髓损伤成为目前国内外研究的热点。现已证实雪旺氏细胞分泌的神经生长因子和细胞外基质,对神经再生具有重要作用。过去十余年,神经科学工作者对雪旺细胞移植治疗脊髓损伤进行了初步的探索,并证实雪旺氏细胞移植可以促进脊髓损伤近端神经元轴突向远端延伸、损伤神经元髓鞘化。但关于雪旺氏细胞的活化、移植方式及移植介质仍在探索之中。目前国内外学者重点从以下几个方面进行研究:对雪旺氏细胞进行基因修饰使之分泌大量神经生长因子以诱导脊髓神经元的再生;神经生长因子基因修饰后的雪旺氏细胞与胶原母细胞按一定比例(5:1)培养于胶原基质中,再植入脊髓损伤处,诱导脊髓神经元再生;将聚乳酸支架制成筒状直接包绕雪旺氏细胞植入脊髓损伤处从而治疗脊髓损伤。同时,学者们对各种脊髓损伤模型也进行了探讨,包括挫伤、不完全损伤、横断损伤等。各种实验在解剖重建和电生理检测方面都得到满意的结果,但运动功能恢复却未见报告。组织工程技术是一门新兴的医学技术,在各个领域已显出巨大的应用前景。早在1995年就有研究人员应用组织工程技术移植雪旺细胞治疗脊髓损伤了,在神经纤维再生方面获得了可喜的成绩,但由于支架材料选择上的欠缺,并未有突破性的研究成果。本研究拟在脊髓损伤的组织工程技术方面进行进一步的探索。现已证实在脊髓横断损伤处移植雪旺氏细胞后,在移植体与脊髓断端接触面之间并无明显的炎症反应,且脊髓两断端之间有有髓神经纤维生长。因此本研究的基本思路是:取外周神经分离、纯化雪旺氏细胞,进行人类NGF(Nerve Growth Factor)基因转染,使能够稳定高效表达NGF,然后将其注入胶原制成的海棉状可吸收生物支架上,一起植入脊髓离断伤处,观察脊髓神经元再生及脊髓传导功能恢复的情况。从而评价应用组织工程技术进行雪旺细胞移植在脊髓横断性损伤中的治疗作用,为脊髓损伤后的治疗作进一步基础及临床研究提供理论基础。在本研究的第一部分,我们应用植块法与消化法相结合的方法进行原代雪旺细胞的培养。以新生SD大鼠的双侧坐骨神经为材,剥去神经外膜,剪成1mm大小的碎块,用0.25%的胰蛋白酶和0.03%胶原酶消化12分钟,然后种植培养,培养基为含10%胎牛血清的DMEM,24小时后用阿糖胞苷去除成纤维细胞,共24小时,以后每2-3天更换培养液。结果显示,在培养的2-6天细胞生长迅速,12天后细胞生长达到高峰。经S-100荧光染色鉴定雪旺细胞,结合Hoechst核染色后可算出原代细胞纯度达95.1%,传一代后细胞纯度更达96.3%,10个新生鼠经过原代培养12天后可以获得大约3.0╳10～6的雪旺细胞。同时发现本方法所培养的雪旺细胞在28天后才开始凋亡,完全能满足组织工程应用的要求。本研究的第二部分中,由Genebank中查得hNGF-β片段的序列,合成引物后成功构建了hNGF-β基因片段,与Geneba

关键词：脊髓损伤组织工程技术 NGF基因重组慢病毒基因治疗胶原海棉雪旺细胞

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卟啉介导抗癌药物的合成及其活性研究

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中国药物化学杂志 2008年第3期18卷 180-185页

作者：李东红刘建仓刁俊林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室重庆400042

目的设计合成新型替加氟卟啉化合物及其金属络合物,并评价其抗肿瘤活性。方法根据卟啉对肿瘤组织的选择性滞留作用,设计了3个卟啉替加氟化合物及3个金属络合物,并以吡咯和取代苯甲醛为原料经4步反应以满意的收率得到目标化合物。采用MTT... 详细信息

目的设计合成新型替加氟卟啉化合物及其金属络合物,并评价其抗肿瘤活性。方法根据卟啉对肿瘤组织的选择性滞留作用,设计了3个卟啉替加氟化合物及3个金属络合物,并以吡咯和取代苯甲醛为原料经4步反应以满意的收率得到目标化合物。采用MTT法,以替加氟为阳性对照药,评价目标化合物对人结肠癌Lovo细胞株和人肝癌SMCC-7721细胞株的抗肿瘤活性;同时通过裸鼠体内抗肿瘤实验进一步评价金属络合物4b的体内抗肿瘤活性。结果合成了6个未见文献报道的新化合物,其结构经IR、UV-vis1、H-NMR、MS及元素分析确证;体外活性实验表明,3个卟啉替加氟化合物表现出与替加氟相似的抗肿瘤活性,而3个金属络合物的抗肿瘤活性却是替加氟的两倍;金属络合物4b的体内肿瘤抑制率达70.4%。结论通过金属卟啉结构单元的引入可明显提高替加氟的抗肿瘤活性。

关键词：替加氟卟啉金属卟啉衍生物合成抗肿瘤活性

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锯缘青蟹卵黄蛋白原全长基因的克隆与分析

锯缘青蟹卵黄蛋白原全长基因的克隆与分析

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第十届全国水产青年学术年会

作者：陈玉冬张子平邹志华王艺磊集美大学水产学院省高校水产科学技术与食品安全重点实验室福建厦门361021 德克萨斯州立大学化学和生化系圣马克斯美国TX 78666

卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体,是卵生动物卵黄的主要成份.从锯缘青蟹(Scylla serrata)性腺EST(Expressed Sequence Tag)中鉴定出卵黄蛋白原基因,通过5'RACE,3'RACE和简并引物进行PCR,并利用生物... 详细信息

卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体,是卵生动物卵黄的主要成份.从锯缘青蟹(Scylla serrata)性腺EST(Expressed Sequence Tag)中鉴定出卵黄蛋白原基因,通过5'RACE,3'RACE和简并引物进行PCR,并利用生物信息学分析显示获得的VTG基因全长cDNA序列,序列显示分析VTG cDNA序列包括7 816 bp,包括19 bp的5 '非编码区域(untranslated Region,UTR),90 bp 3'非编码区(3'UTR)(除去polyA)和7 680 bp开放阅读框(open reading frame,ORF),该开放阅读框编码2 560个氨基酸序列.预测其蛋白质的分子量为287.743 ku,等电点为6.62.它含有一段信号肽(M1-A17),1个酶切位点(A17-A18),2个二硫键(C168-C192,C438-C444),8个含有保守的NX(S/T)基序的N-联糖基化位点和166个位于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸化位点.PSORTⅡ软件分析结果显示VTG可能定位于细胞核内(52.2％).通过比对后发现已获得的VTG氨基酸序列与其他己知的甲壳类卵黄蛋白原序列38％～81％的一致性.通过PCR证实了雌蟹的卵巢和肝胰腺是卵黄蛋白原的合成部位.

关键词：锯缘青蟹卵黄蛋白原卵巢肝胰腺

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强化Fenton法降解含能材料废水的研究(英文)

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含能材料 2007年第6期15卷 670-675页

作者：刘作华周小霞杜军刘仁龙陶长元重庆大学化学化工学院重庆400030 第三军医大学基础部化学教研室重庆400038

综述了能提高废水处理效率的Fenton组合工艺和类Fenton处理方法,并对超声波和微波辅助高级氧化技术处理有机废水进行了介绍。在高级氧化技术中,废水中的过渡金属离子、还原性铁粉、粉煤灰等可以作为Fenton试剂中替代亚铁离子的催化剂,... 详细信息

综述了能提高废水处理效率的Fenton组合工艺和类Fenton处理方法,并对超声波和微波辅助高级氧化技术处理有机废水进行了介绍。在高级氧化技术中,废水中的过渡金属离子、还原性铁粉、粉煤灰等可以作为Fenton试剂中替代亚铁离子的催化剂,这些催化剂能与过氧化氢形成类Fenton试剂,产生羟基自由基,以降解含能材料废水中的难生物降解有机物。组合工艺和Fenton强化方法的开发将为降低含能材料废水处理成本提供成本优势。

关键词：环境化学 Fenton 超声波微波含能材料

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纪念我国化疗药理学奠基人——张昌绍教授

纪念我国化疗药理学奠基人——张昌绍教授

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中国药理学会化疗药理专业委员会第九届学术研讨会

作者：王浴生周黎明王正荣四川大学华西医学中心基础药理教研室

张昌昭教授是我国著名药理学奠基人,1934年毕业于国立上海医学院,留校任教。1937年考取公费留英,在伦敦大学药理学Gaddum JH教授指导下于1939年获得博士学位。随后,在牛滓大学与哈佛医学院访问进修。1941年婉言谢绝英、美高校及研究所... 详细信息

张昌昭教授是我国著名药理学奠基人,1934年毕业于国立上海医学院,留校任教。1937年考取公费留英,在伦敦大学药理学Gaddum JH教授指导下于1939年获得博士学位。随后,在牛滓大学与哈佛医学院访问进修。1941年婉言谢绝英、美高校及研究所高薪聘用,毅然回国在抗日大后方重庆歌乐山内迁的母校任药理室教授,主任,兼任中央卫生实验院研究员和药理室主任。当时开展科研条件甚差,他根据广大人民与伤兵易患微生物感染疾病与疟疾的流行,有效治疗药物奇缺,于是针对这些疾病的化学治疗药物进行研究并介绍国际上抗细菌感染药物新成就与动向。他是我国化疗药理学与治疗学的最早开拓者与奠基人。他的化疗药理有关功绩如下:

关键词：奠基人化学治疗学张昌绍恶性疟

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基于介孔二氧化硅球形纳米粒子的生物条形码体系的建立

基于介孔二氧化硅球形纳米粒子的生物条形码体系的建立

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第十五届全国分子筛学术大会

作者：雷菊英王灵芝王杰飞刘远林徐华胜张金龙华东理工大学精细化工研究所结构可控先进功能材料及其制备教育部重点实验室

本文首次构建了以单分散的介孔二氧化硅球形纳米粒子为主体、二元荧光染料为客体的纳米颗粒复合体系。该体系在单一波长激发下可以产生多元荧光信号,并且具有很强的荧光强度,通过使用该纳米颗粒复合体系,将可以建立一种动态的,通过简单...

本文首次构建了以单分散的介孔二氧化硅球形纳米粒子为主体、二元荧光染料为客体的纳米颗粒复合体系。该体系在单一波长激发下可以产生多元荧光信号,并且具有很强的荧光强度,通过使用该纳米颗粒复合体系,将可以建立一种动态的,通过简单的色彩识别来对生物系统的蛋白质、核酸、分子机器进行跟踪的方法,并将能够应用于各种复杂的生物环境体系。

关键词：

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HL-60细胞及其耐药细胞株HL-60/ADM超弱发光的检测

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 609-611,615页

作者：马世荣惠延平徐玉乔李焰第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710032 第四军医大学口腔医学院生物学教研室陕西西安710032

目的:探讨人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60)和其耐药株抗阿霉素人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60/ADM)的超弱发光与耐药性的关系。方法:应用MTT比色法、流式细胞术、细胞生长曲线和免疫组化染色法,检测HL-60细胞、HL-60/ADM细胞对阿霉素(... 详细信息

目的:探讨人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60)和其耐药株抗阿霉素人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60/ADM)的超弱发光与耐药性的关系。方法:应用MTT比色法、流式细胞术、细胞生长曲线和免疫组化染色法,检测HL-60细胞、HL-60/ADM细胞对阿霉素(ADM)的敏感性、细胞周期变化及P-糖蛋白(P-gp170)的表达。用IFFM-D型流动式化学发光仪检测HL-60细胞及HL-60/ADM细胞的超弱发光强度。结果:HL-60/ADM细胞对ADM的敏感性明显低于亲本HL-60细胞;HL-60/ADM细胞中G0/G1期的细胞为44·80%±1·97%,G2/M期的细胞为9·90%±0·27%,较其亲本细胞增多,S期的细胞为45·30%±1·93%,较其亲本细胞减少(P<0·05);HL-60/ADM细胞倍增时间是HL-60细胞的1·8倍,P-gp170的表达呈阳性,HL-60细胞呈阴性。在1×10-4mol/L鲁米诺及3mL/L双氧水条件下,密度分别为8×107/L、1×108/L、1·26×108/L及2·73×108/L的HL-60/ADM细胞超弱发光强度低于HL-60细胞(P<0·05)。结论:HL-60/ADM细胞对ADM的敏感性降低,细胞生长延缓,P-gp170表达呈阳性等均提示HL-60/ADM细胞出现了耐药性;且随着HL-60/ADM细胞耐药性的产生其超弱发光强度较其亲本细胞HL-60降低,提示细胞超弱发光强度明显降低可作为细胞耐药性产生的一项指标。

关键词：抗阿霉素超弱发光耐药性人急性早幼粒白血病细胞系HL-60

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重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫学活性

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第四军医大学学报 2007年第3期28卷 201-205页

作者：胡沛臻路凡王孝功李侠司少艳黄杨马斌张秀敏隋延仿第四军医大学西京医院病理科第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033

目的:实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵,并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应.方法:利用自控发酵罐发酵,采用溶氧反馈,分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵,从菌体中... 详细信息

目的:实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵,并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应.方法:利用自控发酵罐发酵,采用溶氧反馈,分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵,从菌体中纯化MAGE3/HSP70融合蛋白,并用所纯化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了融合蛋白激活机体细胞免疫反应的状况.结果:高密度发酵取得成功,发酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表达量与摇瓶中的相当,摸索出发酵水平纯化MAGE3/HSP70融合蛋白工艺,ELISPOT和LDH显示MAGE3/HSP70可以激活机体免疫反应,并产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞.结论:MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功实现高密度发酵,MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活机体免疫反应,产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,免疫学活性良好,为新型抗肿瘤疫苗临床前研究奠定了良好基础.

关键词：黑色素瘤抗原发酵大肠杆菌

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PBL理论及其在生化实验教学中的应用

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白求恩军医学院学报 2008年第5期6卷 303-304页

作者：高媛宋利史海水李芳芳许丽辉姜玲玲河北医科大学基础医学院生化教研室石家庄050017

基于问题的学习(problem-based learning,PBL)是1969年美国神经病学教授Barrows提出的一种新型教育模式。它强调把学习设置到复杂的、有意义的问题情境中,通过让学生合作解决真实性问题,来学习隐含于问题背后的科学知识,旨在培养学生.... 详细信息

基于问题的学习(problem-based learning,PBL)是1969年美国神经病学教授Barrows提出的一种新型教育模式。它强调把学习设置到复杂的、有意义的问题情境中,通过让学生合作解决真实性问题,来学习隐含于问题背后的科学知识,旨在培养学生.获取新知识能力、自主学习能力以及解决真实问题的能力。目前PBL已经应用于多个学科领域。[第一段]

关键词： PBL 生物化学实验教学

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