检索结果-内蒙古大学图书馆

重庆工学院学报（自然科学版） 2008年第12期22卷 48-52页

作者：鲁秀敏朱枫黄鹏余瑛王永堂重庆工学院化学与生物工程学院重庆400050 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

构建了人p75神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体,并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293,HEK293)细胞中的表达.采用PCR方法从含人p75NTR的pDC316-HP75质粒中扩增目的片段,经EcoRI和SalI双酶切,定向克隆于pEGFP-N1质粒中,构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-HP75,经酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,激光共聚焦及Western blot法鉴定人p75NTR的表达.结果表明,酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有人p75NTR编码序列,转染实验表明,重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的人p75NTR片段.

关键词： p75神经营养素受体荧光重组表达 HEK293细胞

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雌激素α、β受体在大鼠视网膜组织的免疫组织化学定位

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解放军医学杂志 2008年第6期33卷 655-657页

作者：李联祥李沛王秋丽河北邯郸河北工程大学医学院人体解剖学与组织胚胎学教研室 056002

目的探讨雌激素α、β受体(ERα、ERβ)在大鼠视网膜组织的定位和分布。方法22只SD雌性大鼠颈椎脱臼处死,取眼球做常规石蜡包埋,连续切片,采用免疫组织化学方法显示ERα、ERβ在视网膜组织的表达,并设正常大鼠子宫作阳性对照;PBS代替一... 详细信息

目的探讨雌激素α、β受体(ERα、ERβ)在大鼠视网膜组织的定位和分布。方法22只SD雌性大鼠颈椎脱臼处死,取眼球做常规石蜡包埋,连续切片,采用免疫组织化学方法显示ERα、ERβ在视网膜组织的表达,并设正常大鼠子宫作阳性对照;PBS代替一抗作阴性对照。同时采用放射免疫分析方法检测大鼠血清雌二醇的浓度。结果ERα在少数标本的视网膜色素上皮、节细胞层和神经纤维层呈阳性表达,其他区域则呈阴性反应。ERβ在视网膜组织各区域分布有着明显差异,以视网膜色素上皮、节细胞层和神经纤维层阳性表达为主,内丛状层次之,其他区域阳性表达较少。ERα、ERβ免疫阳性反应物呈颗粒状,定位在视网膜色素上皮的细胞质以及神经节细胞的细胞质和细胞核或弥散分布在相关的视网膜区域内。ERβ在视网膜色素上皮、神经节细胞层和神经纤维层阳性表达率明显高于ERα,经统计学分析两者间有显著性差异(P<0.05)。正常大鼠血清雌二醇水平经检测含量为22.13±3.54pg/ml。结论大鼠视网膜组织以表达ERβ为主,ERβ主要分布在视网膜色素上皮层、节细胞层、神经纤维层,提示雌激素通过ERβ的介导直接对视网膜功能起调控作用;同时为进一步研究雌激素与视网膜疾病之间的关系提供了分子生物学基础。

关键词：视网膜受体,雌激素大鼠免疫组织化学

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人β防御素4基因的合成及克隆载体的构建

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第4期23卷 377-378,380页

作者：曹玉红张光运张国成徐彦鸣张建第四军医大学西京医院儿科陕西西安710032 第四军医大学西京医院神经内科陕西西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的：合成人β防御素4（HBD4）基因并构建其克隆载体.方法：根据GenBank中HBD4结构基因的序列, 设计合成了6条长度为32 ～60 bp的寡聚核苷酸片段, 用重叠延伸PCR法扩增合成HBD4 cDNA全长.PCR产物经双酶切后, 克隆入载体pMD18-T中, 并... 详细信息

目的：合成人β防御素4（HBD4）基因并构建其克隆载体.方法：根据GenBank中HBD4结构基因的序列, 设计合成了6条长度为32 ～60 bp的寡聚核苷酸片段, 用重叠延伸PCR法扩增合成HBD4 cDNA全长.PCR产物经双酶切后, 克隆入载体pMD18-T中, 并导入细菌中进行扩增.结果：HBD4基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、测序分析证实, 合成的目的基因与设计的HBD4 cDNA的序列相一致, 并成功地克隆入克隆载体pMD18-T中.结论：用重叠延伸PCR法能方便、准确地获得目的基因片段.重组克隆载体pMD18-T-HBD4 的获得, 为构建HBD4基因的表达载体并表达奠定了基础.

关键词：人β防御素4 重叠延伸PCR 基因合成基因克隆

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溶氧反馈-补料分批技术高密度培养基因重组MAGE1/HSP70/MAGE3工程菌

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第三军医大学学报 2007年第16期29卷 1576-1579页

作者：胡沛臻温江田路凡王孝功李侠司少艳葛伟黄杨张秀敏隋延仿第四军医大学西京医院病理科西安710032 第四军医大学西京医院超声诊断科西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710032

目的建立人黑色素瘤抗原MAGE1/HSP70/MAGE3融合蛋白基因重组工程菌***21/pET-MHM的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至NBS BiofloⅣ20L发酵罐发酵,利用溶氧反馈-补料分批培养技术,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素... 详细信息

目的建立人黑色素瘤抗原MAGE1/HSP70/MAGE3融合蛋白基因重组工程菌***21/pET-MHM的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至NBS BiofloⅣ20L发酵罐发酵,利用溶氧反馈-补料分批培养技术,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、活化时间、诱导浓度及时间、pH值及分批补加营养物质等进行优化。结果保持培养过程中40%的溶解氧,采用半合成培养基、活化至对数生长期时0.2mmol/LIPTG诱导5h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,连续3批重复发酵,最终菌密度D(600)均达45～50时,菌体量可提高至70g/L以上,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38%以上。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺。

关键词：黑色素瘤抗原重组大肠杆菌发酵

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单核细胞趋化蛋白-1对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2007年第17期29卷 1682-1684页

作者：李琴山刘洋冯赞杰张亚玲钱民章遵义医学院基础部生物化学教研室遵义563000

目的研究单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)对人脐静脉内皮细胞(human um-bilical vein endothelial cells,hUVEC)凋亡的影响。方法培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;用不同浓度MCP-1(0.1、1.0、10、100μg/L)对其作用24、48h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期观察其对hUVEC凋亡的影响。结果单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡(P<0.05),其效应随浓度和时间的增加而增强:MTT明显减低;细胞DNA含量减少,出现明显亚G0/G1峰(凋亡细胞峰)。结论单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞凋亡。

关键词：单核细胞趋化蛋白-1 人脐静脉内皮细胞凋亡动脉粥样硬化

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卟啉硝基咪唑类衍生物的合成及放射增敏作用

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中国药物化学杂志 2008年第6期18卷 414-419页

作者：于克贵刘建仓周成合刁俊林胥婷李东红西南大学化学化工学院重庆400715 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室重庆400042

目的设计合成卟啉硝基咪唑类化合物,评价其体外肿瘤放射增敏活性,寻找新的肿瘤放射增敏剂。方法以吡咯、苯甲醛、硝基咪唑为原料,经环合、溴代、取代、络合等反应合成卟啉硝基咪唑类化合物及其金属配合物。采用MTT法考查该系列衍生物对... 详细信息

目的设计合成卟啉硝基咪唑类化合物,评价其体外肿瘤放射增敏活性,寻找新的肿瘤放射增敏剂。方法以吡咯、苯甲醛、硝基咪唑为原料,经环合、溴代、取代、络合等反应合成卟啉硝基咪唑类化合物及其金属配合物。采用MTT法考查该系列衍生物对人宫颈癌Helo细胞株的放射增敏活性。结果合成了12个未见文献报道的新化合物,其结构经紫外光谱、ESI质谱、红外光谱和核磁共振氢谱确证。在4Gy照射剂量下,化合物15、16、18、19对人宫颈癌Helo细胞株显示出很好的放射增敏活性,对肿瘤细胞的抑制率达到95%左右。结论金属卟啉结构单元的引入,极大地提高了硝基咪唑类的放射增敏活性。

关键词：化学合成卟啉金属卟啉放射增敏剂硝基咪唑

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沉积物中有机污染物生态风险分析方法研究

沉积物中有机污染物生态风险分析方法研究

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有毒化学污染物减排与监测及风险控制新技术研讨会

作者：刘爱霞郎印海薛荔栋刘宗峰刘洁中国海洋大学环境科学与工程学院山东青岛 266100 中国海洋大学海洋环境与生态教育部重点实验室山东青岛 266100

开展沉积物中有机污染物的潜在生态风险分析研究是进行风险管理和科学决策的先决条件.本文综述了生态风险分析的概念以及国内外沉积物中有机污染物的主要风险分析方法如风险商法，生态风险指数法、生物沉积物畜集因子、沉积物质量标准... 详细信息

开展沉积物中有机污染物的潜在生态风险分析研究是进行风险管理和科学决策的先决条件.本文综述了生态风险分析的概念以及国内外沉积物中有机污染物的主要风险分析方法如风险商法，生态风险指数法、生物沉积物畜集因子、沉积物质量标准和概率风险分析法，并评述了各种分析方法的适用条件，总结了各种方法的优缺点。提出了生态风险分析所存在的问题并展望了今后有机污染物生态风险分析的研究方向。

关键词：沉积物有机污染物生态风险

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针对HBVx基因的siRNA重组腺病毒的制备及其对HBVx基因表达的抑制作用

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第四军医大学学报 2007年第7期28卷 596-599页

作者：秦炜炜刘家云张瑞王涛王凯孟艳玲杨安钢第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学西京医院临床检验科陕西西安710033 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:构建针对乙型肝炎病毒x基因(HBx基因)的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒表达载体,并在能表达HBx基因的人肝癌细胞株HepG2中观察其对HBx基因表达的抑制作用.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-HBx与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组... 详细信息

目的:构建针对乙型肝炎病毒x基因(HBx基因)的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒表达载体,并在能表达HBx基因的人肝癌细胞株HepG2中观察其对HBx基因表达的抑制作用.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-HBx与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染能表达HBx基因人肝癌细胞株HepG2,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western Blot方法检测细胞中HBx基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对HBx基因的siRNA重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western Blot方法证实,在HepG2细胞中,HBx基因在mRNA和蛋白水平均有降低.结论:腺病毒介导的针对HBx基因的siRNA在体外能够高效、特异地抑制HBx基因的表达.

关键词：乙型肝炎病毒 RNA干扰腺病毒基因治疗

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缺氧调控载体功能活性的研究

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中华肾脏病杂志 2007年第6期23卷 400-403页

作者：杨洁张翔陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰第四军医大学唐都医院肾脏内科西安 710038 第四军医大学免疫学教研室生物化学与分子生物学教研室药学系学员一队

目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞... 详细信息

目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞生成素（hEPO）的转录。检测荧光素酶的活性和hEPO的表达以确定其缺氧转录活性。结果在各种缺氧调控载体中,由鼠磷酸甘油酸激酶（mPGK）的HRE与CMV启动子组合而成的缺氧应答启动子显示出高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMV启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于实现治疗基因的精确调控表达可能非常有用。

关键词：转录调控缺氧应答元件荧光素酶报告基因

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新基因c24的克隆及其在正常及白内障晶状体上皮细胞中的表达

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眼科研究 2007年第11期25卷 801-804页

作者：刘燕周健刘新平药立波惠延年第四军医大学唐都医院眼科西安710038 第四军医大学西京医院眼科西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室西安710033

目的克隆新基因c24并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,并比较二者表达的差异。方法用改良的消减杂交法克隆新基因c24,地高辛标记c24cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达... 详细信息

目的克隆新基因c24并研究其在正常晶状体和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,并比较二者表达的差异。方法用改良的消减杂交法克隆新基因c24,地高辛标记c24cDNA片断制作探针,用原位杂交法研究其在晶状体前囊膜切片上的表达,并进行统计学处理。结果克隆到了新基因c24的cDNA片断,长约532bp,c24在正常晶状体和年龄相关性白内障LECs中均有表达;其在年龄相关性白内障LECs中的表达高于其在正常LECs的表达。结论c24在正常晶状体和年龄相关性白内障LECs中均有表达;在年龄相关性白内障LECs中,其表达较正常晶状体增高,提示其可能在白内障的发生中起一定的作用。

关键词：新基因c24 年龄相关性白内障晶状体上皮细胞

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