检索结果-内蒙古大学图书馆

应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

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糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用

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第二军医大学学报 2004年第9期25卷 974-976页

作者：刘冲周建崔瑞耀康志敏彭兆云蒋春雷第二军医大学海军医学系航海医学教研室上海200433 青岛大学医学院病理生理学教研室青岛266012

目的 :分析糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用。方法 :采用荧光分光光度法测定邻苯二甲醛与组胺在碱性条件下生成的荧光物质 ,检测不同条件下大鼠腹腔肥大细胞分泌的组胺。结果 :(1)用 10 - 7m ol/ L 皮质酮预处理细... 详细信息

目的 :分析糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用。方法 :采用荧光分光光度法测定邻苯二甲醛与组胺在碱性条件下生成的荧光物质 ,检测不同条件下大鼠腹腔肥大细胞分泌的组胺。结果 :(1)用 10 - 7m ol/ L 皮质酮预处理细胞 7m in后 ,肥大细胞分泌组胺即受到抑制 (P<0 .0 5 ) ;(2 )牛血清白蛋白偶联的皮质酮 (B- BSA)可以模拟皮质酮的快速抑制作用 ;(3)糖皮质激素细胞内受体拮抗剂 RU384 86 对皮质酮的快速抑制作用无阻断效应 ;(4)蛋白质合成抑制剂放线菌酮预处理细胞 3h后 ,皮质酮仍可快速抑制肥大细胞分泌组胺。结论 :皮质酮对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺具有快速抑制作用 ,这一作用不直接依赖于细胞内蛋白质合成 ,也不依赖细胞内的糖皮质激素受体。此种快速抑制作用属非基因组机制。

关键词：糖皮质激素皮质醇肥大细胞组胺非基因组机制

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甲胎蛋白与肝癌:老问题的新认识

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医学研究杂志 2013年第6期42卷 3-5页

作者：章卫平第二军医大学基础部病理生理学教研室

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌)在全世界的发生率位居各类肿瘤的第5位,病死率高居第3位。在我国,肝癌更是居于男性恶性肿瘤病死率的首位。乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝癌高发的主要原因。此外,丙型肝炎病毒(HCV)... 详细信息

原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌)在全世界的发生率位居各类肿瘤的第5位,病死率高居第3位。在我国,肝癌更是居于男性恶性肿瘤病死率的首位。乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝癌高发的主要原因。此外,丙型肝炎病毒(HCV)感染、酒精性肝硬化、食物中摄入黄曲霉素和肝脏代谢紊乱等也是肝癌发生的危险因素。肝癌的侵袭性强,往往发现时已经晚期,预后很差。因此,早期发现和早期治疗是降低肝癌病死率的关键[1,2]。

关键词：肝癌细胞重激活血清表达水平 BTB AFP 甲胎蛋白球蛋白

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在7年制学生中开设综合性和设计性实验教学

在7年制学生中开设综合性和设计性实验教学

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2005年中国病理生理学教学研讨会

作者：刘宇健陈玉霞卢建第二军医大学基础部病理生理学教研室第二军医大学基础部病理生理学教研室第二军医大学基础部病理生理学教研室

病理生理学是一门机能性学科,实验教学是病生教学中的一个重要组成部分,占整个教学课时的1/3。传统的实验课是让学生严格按照教师设定好的实验方案做,其目的一是让学生了解课堂理论的由来和实验在医学发展中的作用;二是让学生掌握基本... 详细信息

病理生理学是一门机能性学科,实验教学是病生教学中的一个重要组成部分,占整个教学课时的1/3。传统的实验课是让学生严格按照教师设定好的实验方案做,其目的一是让学生了解课堂理论的由来和实验在医学发展中的作用;二是让学生掌握基本的病理生理学实验方法。这种实验教学可控性强,适应于学生数量多的面上教学。存在问题是学生在实验过程中处于比较被动的状况,不利于学生创新

关键词：实验教学

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小鼠肝大部切除后肝再生组织中c-myc、ZHX2及AFP基因表达的变化

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实用医学杂志 2009年第11期25卷 1733-1735页

作者：汤朝晖周露婷谢志芳杨甲梅胡以平章卫平吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海市200433 第二军医大学病理生理学教研室上海市200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海市200433

目的:利用小鼠肝大部切除后肝再生动物模型,测定c-myc、ZHX2、AFP基因在肝再生过程不同阶段的表达,研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及病理学意义。方法:利用分叶顺次肝大部切除技术,建立小鼠肝再生动物模型,在不同的时间节点,运用... 详细信息

目的:利用小鼠肝大部切除后肝再生动物模型,测定c-myc、ZHX2、AFP基因在肝再生过程不同阶段的表达,研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及病理学意义。方法:利用分叶顺次肝大部切除技术,建立小鼠肝再生动物模型,在不同的时间节点,运用荧光定量PCR手段,检测再生肝脏组织中c-myc、ZHX2、AFP激活后的表达特征。结果:在肝再生的启动阶段,c-myc表达上调。在随后的肝脏再生的持续增殖阶段,ZHX2的表达首先下调,然后再恢复到正常水平。AFP的表达为持续上调。结论:c-myc、ZHX2、AFP基因在肝脏再生不同阶段的依次激活、不同表达趋势的内在联系,初步揭示了彼此之间协同作用的可能及潜在的信号转导途径。

关键词：肝切除术肝再生 c—myc ZHX2 AFP

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2例睾丸女性化综合征患者雄激素受体基因中的突变

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中国病理生理杂志 1998年第2期14卷 157-161页

作者：陈光椿卢建徐晓春张金山宋亮年蔡辉国陈佩贞第二军医大学病理生理学教研室中国医学科学院血液学研究所

目的：研究２例完全型睾丸女性化综合征（ＴＦＭ）患者的外阴部皮肤成纤维细胞（ＧＳＦ）中的雄激素受体（ＡＲ）。结果：发现两患者ＡＲ的数量无明显改变，但一患者的ＡＲ亲和力明显降低。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单链构象多态性）方法对... 详细信息

目的：研究２例完全型睾丸女性化综合征（ＴＦＭ）患者的外阴部皮肤成纤维细胞（ＧＳＦ）中的雄激素受体（ＡＲ）。结果：发现两患者ＡＲ的数量无明显改变，但一患者的ＡＲ亲和力明显降低。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单链构象多态性）方法对两患者ＡＲ基因８个外显子中的７个（Ｂ－Ｈ）分别进行分析，发现两患者ＡＲ基因外显子Ｅ均存在着泳动变位，ＤＮＡ序列分析证实两患者外显子Ｅ各有一点突变，分别使得编码第７４３位和第７５２位的氨基酸发生了改变，后一突变还造成了一Ｓａｕ３ＡⅠ酶酶切位点的消失。结论：结合ＡＲ功能改变及临床表型可以认为。

关键词：睾丸女性化综合征雄激素受体基因突变脱氧核糖核酸 TFM

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在体大鼠心脏微血管壁通透性的测定方法

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基础医学与临床 1995年第4期15卷 77-79页

作者：陈金明龚肖崎钟纪根陈思聪张国元吴宗贵上海第二军医大学长征医院心内科上海二军大病理生理学教研室

用异硫氢酸标记牛血清白蛋白，过柱后荧光蛋白浓度与荧光值呈明显正相关（ｒ＝０．９９，Ｐ＜０．０１）．大鼠颈外静脉注射荧光蛋白后１ｈ，取心肌匀浆，测定其荧光值。本法简便易行，重复性好，为观察在体心脏微血管壁通透性提供了一... 详细信息

用异硫氢酸标记牛血清白蛋白，过柱后荧光蛋白浓度与荧光值呈明显正相关（ｒ＝０．９９，Ｐ＜０．０１）．大鼠颈外静脉注射荧光蛋白后１ｈ，取心肌匀浆，测定其荧光值。本法简便易行，重复性好，为观察在体心脏微血管壁通透性提供了一种新的方法。

关键词：心脏微血管壁通透性测定方法异硫氢酸荧光素

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槲皮素对人卵巢癌细胞系增殖的影响

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第二军医大学学报 1999年第6期20卷 380-382页

作者：张琼徐明娟宋亮年王昭梅第二军医大学长海医院妇产科江苏省连云港市新浦区卫生院妇产科第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

目的：观察槲皮素对人卵巢癌细胞系（３ＡＯ）增殖过程的影响。方法：以不同浓度槲皮素（１，１０，２０，４０μｍｏｌ／Ｌ）处理培养的３ＡＯ细胞后，采用活细胞计数法观察细胞增殖情况及去除槲皮素作用后细胞生长的变化；用氨基安替... 详细信息

目的：观察槲皮素对人卵巢癌细胞系（３ＡＯ）增殖过程的影响。方法：以不同浓度槲皮素（１，１０，２０，４０μｍｏｌ／Ｌ）处理培养的３ＡＯ细胞后，采用活细胞计数法观察细胞增殖情况及去除槲皮素作用后细胞生长的变化；用氨基安替比林法测定碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性。结果：槲皮素（１，１０，２０，４０μｍｏｌ／Ｌ）对３ＡＯ细胞的增殖有明显抑制作用，具有明显的剂量及时间依赖性；４０μｍｏｌ／Ｌ槲皮素作用５ｄ后活细胞计数为对照的４７．０６％；去除其作用后，细胞生长得到恢复。用不同浓度（１，１０，２０，４０μｍｏｌ／Ｌ）的槲皮素处理３ＡＯ细胞５ｄ后，ＡＬＰ活性均有不同程度的减少，呈剂量依赖性；４０μｍｏｌ／Ｌ槲皮素作用３ＡＯ细胞不同时间，ＡＬＰ活性随作用时间的延长而明显减少，呈时间依赖性。结论：槲皮素对３ＡＯ细胞的生长有明显的增殖抑制，去除其影响，细胞的生长可以部分恢复。

关键词：槲皮素卵巢肿瘤碱性磷酸酶癌细胞增殖

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L－精氨酸和N^G－甲基－L－精氨酸对血管内皮细胞释放EDRF的影响

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第三军医大学学报 1996年第2期18卷 140-142页

作者：黄岚祝善俊孟素荣陈思聪张国元罗在明张亚霏龚肖崎重庆第三军医大学附属新桥医院心血管内科上海第二军医大学附属长征医院心血管内科上海第二军医大学基础部病理生理学教研室

通过培养的大鼠胸主动脉内皮细胞（ＣＥＣ）及胸主动脉环，利用生物分析法，探讨ＣＥＣ释放内皮源性舒张因子（ＥＤＲＦ／ＮＯ）的检测方法，影响ＥＤＲＦ／ＮＯ分泌的因素。发现单纯ＣＥＣ或经乙酰胆碱（Ａｃｈ）预处理的ＣＥＣ对去内... 详细信息

通过培养的大鼠胸主动脉内皮细胞（ＣＥＣ）及胸主动脉环，利用生物分析法，探讨ＣＥＣ释放内皮源性舒张因子（ＥＤＲＦ／ＮＯ）的检测方法，影响ＥＤＲＦ／ＮＯ分泌的因素。发现单纯ＣＥＣ或经乙酰胆碱（Ａｃｈ）预处理的ＣＥＣ对去内皮血管环张力无明显影响；而经Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）或Ｌ－Ａｒｇ和Ａｃｈ预处理的ＣＥＣ可引起去内皮血管环产生明显舒张；ＮＧ－甲基－Ｌ－精氨酸和Ａｃｈ预处理的ＣＥＣ则引起去内皮血管环明显收缩。提示ＣＥＣ在基础状态和经Ａｃｈ预处理后，其合成和分泌ＥＤＲＦ／ＮＯ的能力很低或丧失，可能存在内源性ＥＤＲＦ／ＮＯ前体Ｌ－Ａｒｇ不足，供给外源性Ｌ－Ａｒｇ有增强ＣＥＣ合成和释放ＥＤＲＦ／ＮＯ的作用。在Ｌ－Ａｒｇ供给充足情况下，Ａｃｈ可进一步刺激ＣＥＣ释放ＥＤＲＦ／ＮＯ。

关键词：内皮细胞内皮源性舒张因子 L-精氨酸

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HIV-1 Gag蛋白P2/NC蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1243-1247页

作者：周波贾建安温宗梅邓松华蒋少华陈秋莉潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR... 详细信息

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

关键词： HIV-1 蛋白酶切割位点序列随机化噬菌体展示文库

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