检索结果-内蒙古大学图书馆

人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)

第二军医大学学报 2003年第9期24卷 937-940页

作者：刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室第二军医大学长海医院妇产科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫... 详细信息

目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达。

关键词：人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因 Oct4 克隆基因克隆基因表达

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哺乳动物生殖细胞的形成、性分化和永生化

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 960-962页

作者：刘善荣胡凯猛刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对... 详细信息

小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定.体外培养时原始生殖细胞可大量增殖,现在已经建立了人类EG细胞株,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力,它可分化为某些特定的细胞类型,在临床上对退行性疾病的治疗有一定的意义.

关键词：原始生殖细胞性分化永生化综述文献

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Oct4调节胚胎干细胞全能性扩增的研究进展

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 963-965页

作者：刘善荣刘厚奇戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端... 详细信息

Oct4是一种POU转录因子,属于Ⅴ类POU蛋白,在小鼠全能胚胎干细胞和生殖系干细胞表达.在早期鼠胚中,只有在ICM变成滋养层阶段,Oct4为维持其全能表型而发挥作用.Oct4表达可能是由位置效应引起的,还与特异调节Oct4活性的元件,如近端、远端增强子元件有关.Oct4对转录的调节分为抑制转录和转录激活两种.Oct4的激活有3种模式:远端依赖性共激活,构象依赖性共激活,Oct4聚合体依赖性共激活.

关键词： Oct4 胚胎干细胞全能性扩增综述文献

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人胚胎多能干细胞研究中的几个问题

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 933-936页

作者：刘善荣戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨... 详细信息

目前在人胚胎多能干细胞的研究中存在材料来源不足、培养体系复杂和自发性分化的问题.这3个基本问题限制了人胚胎多能干细胞的基础和临床应用研究.要建立新的胚胎多能干细胞系应利用细胞核移植和细胞质重新编程功能建立新的途径,并探讨其中的机制和可能的关键因子;干细胞培养时主要进行简化培养体系和抑制细胞分化的研究;对干细胞分化进行临床应用研究时,主要将多种方法联合应用来诱导和筛选目的细胞并对其形态和功能进行评价.

关键词：胚胎多能干细胞

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人胚胎生殖系细胞分离与体外培养的初步研究

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 941-943页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏熊俊蒋正戚中田第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消... 详细信息

目的:初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养.方法:体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为5种不同的方式培养后,用碱性磷酸酶标记,计数阳性克隆并进行比较.结果:酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多,原代培养时种植到饲养层上效果较好.将分离到的组织用0.25%胰酶消化3 min,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养3 d,挑取克隆传代,在第10天形成30.7 个阳性克隆,显著高于其他方法获得的阳性克隆数.用碱性磷酸酶标记的细胞(克隆)具有多样性,细胞胞体为圆形,分为有突起和无突起两种;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形,与周围细胞分界清楚.结论:人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养,原代培养需要在饲养层上进行且宜用酶消化法尽早传代.

关键词：胚胎生殖系细胞细胞分离体外培养碱性磷酸酶

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HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 159-163页

作者：刘红姚玉成葛军辉李建秀苏娟张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 详细信息

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。结果 :DNA免疫正常小鼠后 8～14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130～ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻。

关键词：乙型肝炎病毒 preS2-S基因体液免疫转基因小鼠乙型肝炎

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乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 172-174页

作者：刘红姚玉成何金李文林李建秀苏小平张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基... 详细信息

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基因组中整合了核心抗原基因的首建者 (founder)小鼠 ,其中 1只在肝细胞核和胞浆均有 HBc Ag的表达。将肝脏中表达的小鼠继续传代 ,F1 代 10只小鼠中的 4只小鼠肝细胞有 HBc Ag的表达。结论 :建立了乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠 ,核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达。

关键词：乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠动物模型

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Shp-2酪氨酸磷酸酶在细胞信号传导的作用

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实用医药杂志 2003年第5期20卷 394-396页

作者：胡波刘厚奇第二军医大学组织胚胎学教研室，上海200433

Shp-2是蛋白质酪氨酸磷酸酶家族成员,其氨基端有两个Src同源区[1].哺乳动物的Shp-2分别被几个研究组克隆成功许各自命名为SYP、SH-PTP2.

关键词：酪氨酸磷酸酶细胞调控信号传导

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不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 944-946页

作者：刘善荣刘厚奇汤淑萍惠宁冀凯宏蒋正戚中田冯根生第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 长海医院妇产科基础医学部微生物学教研室 Burham InstituteSanDiegoCA92037USA

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,... 详细信息

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.

关键词：胚胎原始生殖细胞体外培养定位碱性磷酸酶

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白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

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第二军医大学学报 2002年第12期23卷 1328-1331页

作者：冀凯宏刘厚奇陆海英刘善荣汤淑萍第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法 :用基... 详细信息

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

关键词：白血病抑制因子白血病抑制因子受体 HL-60 Cdc25B 细胞周期蛋白类细胞增殖信号转导

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