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人肝癌SM MC-7721细胞热休克反应时糖皮质激素受体mRNA减少机制初探

中华内分泌代谢杂志 2002年第6期18卷 478-480页

作者：徐晓辉王学敏向正华郭兴中缪明永徐仁宝第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 ... 详细信息

目的　探讨人肝癌SMMC 772 1细胞热休克反应时糖皮质激素受体 (GR)mRNA减少的机制。方法　利用聚合酶链反应 (PCR)从大鼠GRcDNA质粒及人肝癌SMMC 772 1细胞基因组中扩增大鼠GR跨外显子 3 ,4,5片段 (与人GR跨外显子 3 ,4,5片段同源性在 89%以上 )及人GR内含子E的DNA片段 ,构建转录质粒 ,并在体外进行转录 ,用地高辛标记反义RNA探针 ,进行细胞原位杂交 ,碱性磷酸酶底物NBT BCIP显色 ,计算机图像分析系统进行扫描半定量分析。结果　人肝癌SMMC 772 1细胞 44℃培养 1h后 ,用跨外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比未经热休克反应组低 ;加放线菌素D后热休克反应组 ,用跨外显子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组低 ,而用内含子探针杂交显色所得的积分灰度值比单加放线菌素D组高 ;加放线菌酮后热休克反应组 ,用跨外显子探针和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值均比热休克反应组高。结论　热休克反应时GRmRNA转录过程受抑 ,GRmRNA前体成熟过程存在剪接障碍。

关键词：肝癌 SMMC-7721细胞热休克反应糖皮质激素受体 mRNA

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视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1188-1191页

作者：姚玉成訾晓渊李建秀熊俊李文林金艳花苏小平倪文君胡以平李振林安靓杨俊峰罗清礼张文周久模第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第一军医大学组织胚胎学教研室广州510515 大学华西医院眼科四川成都610041

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pm... 详细信息

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pmROP-EGFP表达质粒经Nol I酶切线性化后,用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核,制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建者小鼠,基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传代后,取眼球进行冰冻切片,在荧光显微镜下观察视网膜上GFP的表达。结果:从基因组内扩增出了2.1 kb的小鼠ROP,成功构建了小鼠ROP-GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建者,分别命名为C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论:成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠,它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制,还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。

关键词：转基因小鼠视蛋白基因启动子绿色荧光蛋白

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Fas死亡结构域调节白血病细胞Meg-01内c-myc的表达

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中华血液学杂志 2001年第1期22卷 9-12页

作者：刘厚奇单继宽汤淑萍刘善荣第二军医大学组织胚胎学教研室上海200433

目的　探讨人白血病Meg 0 1细胞的异常增殖机制以及凋亡因子Fas对细胞异常增殖的调节作用。方法　用基因重组技术将Fas的细胞外区、跨膜区与白血病抑制因子 (LIF)受体两亚基(gp190 ,gp130 )细胞内区构成嵌合型受体 (Fas 190 ,Fas 130 ) ... 详细信息

目的　探讨人白血病Meg 0 1细胞的异常增殖机制以及凋亡因子Fas对细胞异常增殖的调节作用。方法　用基因重组技术将Fas的细胞外区、跨膜区与白血病抑制因子 (LIF)受体两亚基(gp190 ,gp130 )细胞内区构成嵌合型受体 (Fas 190 ,Fas 130 ) ,同时 ,将Fas死亡区域 (FASDD)替换Fas 130中gp130细胞内区无结构域部分 (Fas 130f) ,分别在Meg 0 1细胞内表达后 ,用抗Fas抗体激活这些嵌合型受体 ,随后用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性寡聚体 (190cyt 190cyt 190cyt,130cyt 130cyt 130cyt及FASDD FASDD FASDD)后的细胞状况和细胞内c myc的表达。结果　转染pEDFas 130后用抗Fas抗体作用 6～ 8h ,Meg 0 1细胞c myc表达量增加 ,细胞增殖明显 ;而pEDFas 190形成寡聚体后 ,Meg 0 1细胞c myc的表达有所下降。另外 ,Fas 130与Fas 130f比较 ,后者的c myc的表达明显下降 ,细胞形态大小不一。结论　LIF受体中gp130亚基细胞内区促进白血病Meg 0 1细胞内的c myc表达及细胞增殖信号的传递 ;Fas死亡域可抑制gp130的细胞增殖活性。

关键词：细胞因子受体白血病凋亡信号传导

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白血病抑制因子受体不同亚基细胞内区与HL-60细胞内STAT3激活的关系

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免疫学杂志 2001年第3期17卷 177-180页

作者：单继宽刘厚奇汤淑萍刘善荣第二军医大学组织胚胎学教研室上海200433

目的观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基和 gp130亚基胞内区在人白血病细胞系 HL- 6 0中与STAT3表达及激活的关系 ,了解白血病抑制因子 (L IF)引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法用基因重组技术将gp130和 gp190的细胞内区... 详细信息

目的观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基和 gp130亚基胞内区在人白血病细胞系 HL- 6 0中与STAT3表达及激活的关系 ,了解白血病抑制因子 (L IF)引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法用基因重组技术将gp130和 gp190的细胞内区互换以构成两个嵌合体受体基因 (130 / 190 ,190 / 130 )并分别在 HL- 6 0细胞表达。用免疫组化和免疫印迹杂交方法分析形成受体亚基细胞内区同源性二聚体后的磷酸化 STAT3的水平和 STAT3的表达水平。结果转染p ED130 / 190 ,L IF诱导 10 m in后 ,HL- 6 0细胞内的 STAT3磷酸化增加 (P<0 .0 1) ,经 L IF诱导的转染 p ED130 / 190的 HL- 6 0细胞的 STAT3磷酸化水平存在时间依赖性 ,转染 p ED190 / 130的 HL - 6 0细胞 ,L IF诱导 6 h后 ,STAT3的表达降低。结论白血病抑制因子受体 gp190亚基细胞内区在 L IF诱导下参与 HL- 6 0细胞中 STAT3的激活。

关键词：白血病抑制因子受体信号转导白血病 HL-60细胞 STAT3 亚基

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烫伤对大鼠下丘脑室旁核内皮素-1合成和分泌的影响

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中国应用生理学杂志 2001年第3期17卷 217-219页

作者：蒋应明袁文俊向正华林丽徐建军第二军医大学生理学教研室上海200433 第二军医大学生理学教研室第二军医大学组织胚胎学教研室

目的 :研究烫伤后下丘脑室旁核 (PVH)内皮素 1(ET 1)的合成和分泌改变 ,探讨PVHET 1在烫伤中的病理生理学意义。方法 :用原位杂交和免疫组织化学方法观察了烫伤后PVHET 1合成和分泌的变化 ,并用通用图象颗粒分析法检测单位面积内ET 1mRN... 详细信息

目的 :研究烫伤后下丘脑室旁核 (PVH)内皮素 1(ET 1)的合成和分泌改变 ,探讨PVHET 1在烫伤中的病理生理学意义。方法 :用原位杂交和免疫组织化学方法观察了烫伤后PVHET 1合成和分泌的变化 ,并用通用图象颗粒分析法检测单位面积内ET 1mRNA阳性杂交信号的强度和ET 1样免疫反应物 (ET 1 ir)免疫反应强度。结果 :烫伤后 15minPVH神经元胞浆内ET 1mRNA阳性杂交信号与对照组相比未见明显差异 ,烫伤后 60min和 180minPVH神经元胞浆内ET 1mRNA阳性杂交信号较对照组 (10 0 %± 2 5 % )明显增多 ,强度明显增高 ,分别为 138%± 2 6% (P<0 .0 5 )和 167%± 18% (P <0 .0 1) ;而烫伤后 15minPVH神经元胞浆内ET 1阳性反应物明显减少 ,免疫反应物强度为 6.3%± 1.5 % ,显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,烫伤后 60min和 180min逐渐回升 ,分别为 2 3.1%± 2 .9%和44 .1%± 3.8% ,但仍显著低于对照组 (P <0 .0 1)。结论 :烫伤后PVHET

关键词：内皮素-1mRNA 内皮素-1 烫伤下丘脑室旁核分泌合成

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丙型肝炎病毒E2蛋白对HepG2细胞MAPK/ERK的激活

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 691-695页

作者：赵兰娟刘厚奇曹洁冯根生戚中田加利福尼亚州Burnham研究所中国第二军医大学微生物学教研室美国圣迭戈加州92037 第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学组织胚胎学教研室

人CD8 1是丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)的细胞表面特异性受体 ,HCV包膜蛋白 2 (E2 )可与其结合。细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedproteinkinase ,MAPK/ERK 1,2 )信号途径主要介导细胞增殖及分化。为探讨HCVE... 详细信息

人CD8 1是丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)的细胞表面特异性受体 ,HCV包膜蛋白 2 (E2 )可与其结合。细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedproteinkinase ,MAPK/ERK 1,2 )信号途径主要介导细胞增殖及分化。为探讨HCVE2蛋白与人CD81结合对MAPK/ERK活性变化的影响 ,以HCVE2蛋白刺激HepG2细胞 ,采用免疫印迹、免疫组化及免疫荧光等方法动态观察细胞内MAPK/ERK的激活情况 ,并以流式细胞术检测细胞表面CD81的表达。结果表明 :HepG2细胞高表达人CD81;HCVE2蛋白可激活细胞内MAPK/ERK ;MAPK/ERK的磷酸化反应与HCVE2蛋白浓度、作用时间呈依赖关系 ;HCVE2 CD81相互作用引发的细胞异常信号转导可能与HCV致病性相关

关键词：丙型肝炎病毒 E2蛋白细胞外信号调节激酶 CD81 信号转导

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青年及老年大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原mRNA的表达

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第二军医大学学报 2001年第5期22卷 481-483页

作者：向正华孟璘蒋玲钱国桢第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 上海理工大学电气工程学院上海200093

目的 :观察青年和老年期大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原 m RNA(POMC m RNA)的表达水平。方法 :应用原位杂交技术显示 POMC m RNA和用计算机图像分析观察杂交信号的强弱及阳性细胞的面积。结果 :与青年组相比 ,老年组下丘脑弓状核及其附... 详细信息

目的 :观察青年和老年期大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原 m RNA(POMC m RNA)的表达水平。方法 :应用原位杂交技术显示 POMC m RNA和用计算机图像分析观察杂交信号的强弱及阳性细胞的面积。结果 :与青年组相比 ,老年组下丘脑弓状核及其附近区域 POMC m RNA阳性神经元的平均灰度值下降 ;POMC m RNA阳性神经元的数目无明显变化。结论 :老年期 POMC m RNA阳性神经元相应的 m RNA表达水平下降可能是下丘脑 POMC基因衍生肽表达水平下降的原因之一。

关键词：前阿片黑素细胞皮质激素原位杂交计算机辅助图像处理下丘脑弓状核大鼠 mRNA

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P2X_3受体在感觉神经节的表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2001年第2期10卷 121-123页

作者：向正华蔡文琴 Xuenong Bo Geoffrey Burnstock 第二军医大学组织胚胎学教研室上海200433 第三军医大学组织胚胎学教研室 400038 英国伦敦大学学院解剖与发育生物学系

用免疫组织化学与原位杂交研究 P2 X3受体在背根神经节、三叉神经节和结状神经节的分布。结果显示 :1.原位杂交 :在三种感觉神经节中 ,95 %左右的神经节细胞为 P2 X3m RNA阳性 ,中、小型神经节细胞的杂交信号一般要比大型的神经节细胞... 详细信息

用免疫组织化学与原位杂交研究 P2 X3受体在背根神经节、三叉神经节和结状神经节的分布。结果显示 :1.原位杂交 :在三种感觉神经节中 ,95 %左右的神经节细胞为 P2 X3m RNA阳性 ,中、小型神经节细胞的杂交信号一般要比大型的神经节细胞强一些。 2 .免疫组织化学 :免疫组织化学结果与原位杂交结果基本一致。此外 ,在各神经节内 ,均显示出许多P2 X3免疫阳性神经纤维 ,在足掌表皮也显示许多 P2 X3免疫反应阳性纤维。结果提示 :P2 X3不仅参与机体的痛觉的形成 ,还可能参与其它感觉。

关键词：原位杂交免疫组织化学大鼠 P2X3受体感觉神经节表达

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狗颅脑爆炸伤后脑组织中TNF-αmRNA表达的变化

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第二军医大学学报 2001年第6期22卷 551-553,F003页

作者：侯立军张光霁卢亦成朱诚刘荫秋李兵仓赖西南李曙光李薇蔡文琴第二军医大学长征医院神经外科上海200003 第三军医大学野战外科研究所基础医学部组织胚胎学教研室

目的 :探讨狗颅脑爆炸伤后脑组织中 TNF-α m RNA的变化及其规律。方法 :应用原位杂交技术分别检测狗颅脑爆炸伤后 30 min和 1、3、6 h大脑皮质、海马、下丘脑和脑干等不同脑区脑组织中 TNF-α m RNA的表达情况 ,并与正常对照组比较。... 详细信息

目的 :探讨狗颅脑爆炸伤后脑组织中 TNF-α m RNA的变化及其规律。方法 :应用原位杂交技术分别检测狗颅脑爆炸伤后 30 min和 1、3、6 h大脑皮质、海马、下丘脑和脑干等不同脑区脑组织中 TNF-α m RNA的表达情况 ,并与正常对照组比较。应用电子计算机图像分析技术对其结果进行半定量分析。结果 :正常对照组狗脑组织内 TNF-α m RNA即有表达 ;颅脑爆炸伤后不同脑区脑组织中 TNF-α m RNA的表达量均明显升高 ,变化幅度以大脑皮质挫伤区和同侧海马最为显著。 TNF-αm RNA在伤后 30 m in表达量即明显增加 ,至伤后 1h达到高峰 ,伤后 3h呈下降趋势 ,但仍高于正常水平。伤侧大脑半球TNF- α m RNA的表达量明显高于对侧大脑半球。结论 :TNF- α m RNA在生理状态下即有表达 ,TNF- α参与正常的生理功能 ;颅脑爆炸伤后早期脑组织中 TNF- α的表达增多 ,提示 TNF-

关键词：脑损伤火器伤肿瘤坏死因子 mRNA 狗 TNFα

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经小脑延髓池局部应用反义寡核苷酸对脑组织TNF-α表达的影响

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 655-657页

作者：侯立军张光霁卢亦成朱诚江基尧白如林刘荫秋李薇蔡文琴第二军医大学长征医院神经外科上海200003 第三军医大学野战外科研究所第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室

目的 :观察 TNF-α反义寡核苷酸对 TNF-α的阻断作用。方法 :用 DNA合成仪合成 17聚体的 TNF-α正义寡核苷酸和反义寡核苷酸。 2 4只犬随机分为对照组和实验组 (包括人工脑脊液组、正义链组和反义链组 )。实验组动物用已建成的颅脑爆炸... 详细信息

目的 :观察 TNF-α反义寡核苷酸对 TNF-α的阻断作用。方法 :用 DNA合成仪合成 17聚体的 TNF-α正义寡核苷酸和反义寡核苷酸。 2 4只犬随机分为对照组和实验组 (包括人工脑脊液组、正义链组和反义链组 )。实验组动物用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入人工脑脊液、TNF-α正义寡核苷酸和 TNF-α反义寡核苷酸 ,比较 3组动物脑组织 TNF-α m RNA表达的变化。结果 :与人工脑脊液组和正义链组相比 ,伤前经小脑 -延髓池脑内局部应用 TNF-α反义寡核苷酸组 ,颅脑爆炸伤后脑组织内 TNF- α m RNA表达量明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :经小脑延髓池局部应用反义寡核苷酸可有效阻断颅脑爆炸伤后脑组织 TNF- α的表达。

关键词：脑损伤爆炸伤原位杂交肿瘤坏死因子寡核苷酸类 ODN

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