检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2006年第12期27卷 1277-1280页

作者：王静杨玲刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433

目的探讨白血病抑制因子(LIF)受体α亚基胞内区在细胞内游离存在时,对HL-60细胞增殖分化的调节及相关信号转导机制。方法鉴定已构建的重组质粒pCDNA3.0-190CT2+3和PCDNA3.0-190CT3;用脂质体将质粒转染HL-60细胞,细胞培养基中加入G-418... 详细信息

目的探讨白血病抑制因子(LIF)受体α亚基胞内区在细胞内游离存在时,对HL-60细胞增殖分化的调节及相关信号转导机制。方法鉴定已构建的重组质粒pCDNA3.0-190CT2+3和PCDNA3.0-190CT3;用脂质体将质粒转染HL-60细胞,细胞培养基中加入G-418来筛选阳性克隆。用免疫细胞化学和免疫印迹法检测转染组细胞中目的蛋白的表达。绘制细胞生长曲线。免疫印迹法检测各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和信号分子STAT3的磷酸化水平。结果免疫印迹法检测及目的蛋白条带,获得稳定表达目的蛋白的细胞株。与野生组细胞相比,190CT2+3和190CT3组的细胞体积增大,分叶核细胞占总细胞数的比例增加,细胞增殖减慢,PCNA的表达减少,STAT3的磷酸化水平升高。结论LIF受体α亚基胞内区游离片段促进了HL-60细胞的分化,抑制了增殖,激活了信号分子STAT3。

关键词：白血病抑制因子受体增殖细胞核抗原信号转导 STAT3

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小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定

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第二军医大学学报 2006年第7期27卷 741-744页

作者：杨君杰刘善荣杨玲王凤玫任传路胡凯猛刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433

目的：分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法：取18～20d雄性小鼠的睾丸，酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ，与pcDNA3．0连接后构建重组质粒pcDNA3．0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcD... 详细信息

目的：分离培养小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定。方法：取18～20d雄性小鼠的睾丸，酶消化法原代培养。用RT—PCR的方法克隆带有锌指结构域的支持细胞基因SERZ，与pcDNA3．0连接后构建重组质粒pcDNA3．0-SERZ。用KpnI和Xba1分别酶切质粒pcDNA3．0-SERZ，获得线性化模板进而合成探针。原位杂交检测SERZ mRNA在培养细胞中的表达；用RT—PCR的方法检测雄激素结合蛋白（ABP）在支持细胞中的表达。结果：支持细胞多为多边形，核呈三角形或不规则形，染色浅，核仁明显，细胞完全铺开，成膜状，相邻细胞之间交织连接，细胞纯度为（85．1±2．5）％。SERZ mRNA在培养细胞的胞质中高水平表达。RT—PCR结果表明我们分离的支持细胞能够表达ABP mRNA。结论：我们成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞，纯度为（85．1±2．5）％。

关键词：睾丸支持细胞细胞分离 SERZ 雄激素结合蛋白

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成年大鼠骨髓多能成体祖细胞的克隆化培养及其鉴定

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中华血液学杂志 2006年第7期27卷 474-478页

作者：冀凯宏熊俊向正华胡凯猛王英刘厚奇第二军医大学发育生物学研究中心组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学发育生物学研究中心生物化学教研室上海200433

目的优化培养条件,获得体外克隆化培养的成年大鼠骨髓多能成体祖细胞(rMAPC),并对其进行表型分析及分化潜能鉴定。方法选择低血清条件培养基全骨髓直接贴壁法初步分离大鼠骨髓干细胞,用极限稀释法进行克隆化培养;用流式细胞术及免疫细... 详细信息

目的优化培养条件,获得体外克隆化培养的成年大鼠骨髓多能成体祖细胞(rMAPC),并对其进行表型分析及分化潜能鉴定。方法选择低血清条件培养基全骨髓直接贴壁法初步分离大鼠骨髓干细胞,用极限稀释法进行克隆化培养;用流式细胞术及免疫细胞化学法对克隆化培养的 rMAPC 进行表型分析,并进行体外成脂肪、成骨及成神经细胞诱导,RT-PCR 检测 Oct 4及三个胚层早期标志物,确定其表型及分化潜能。结果单个细胞来源 rMAPC 在体外扩增至20代仍保持良好的生长状态;流式细胞术及细胞免疫组化检测结果显示 CD71、α-SMA 及 Vimentin 表达阳性;CD34、CD44、CD45表达阴性;细胞周期分析显示 S+G_2+M 期细胞约占17%,而处于 G_0/G_1期的细胞占83%:rMAPC 体外可被诱导向脂肪细胞、骨细胞及神经细胞分化;RT-PCR 检测到 Oct 4及三个胚层早期标志物的表达。结论体外克隆化培养的 rMAPC 能维持良好的干细胞生物学特性。

关键词：骨髓多能成体祖细胞单克隆培养

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胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

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解剖学杂志 2006年第3期29卷 371-373页

作者：杨君杰刘厚奇第二军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室上海200433

近年来,人们探索如何在体外诱导胚胎干细胞获得配子,以了解性别决定的基因调控和环境影响.这些研究都是用胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)建立1个类原始生殖细胞(primordial germ cell-like cells)的细胞群体,然后移植到睾丸或继续... 详细信息

近年来,人们探索如何在体外诱导胚胎干细胞获得配子,以了解性别决定的基因调控和环境影响.这些研究都是用胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)建立1个类原始生殖细胞(primordial germ cell-like cells)的细胞群体,然后移植到睾丸或继续培养从而获得雄性或雌性配子.原始生殖细胞的迁移和向生殖干细胞的分化依赖于自身基因表达以及与周围细胞的相互作用.本文将对原始生殖细胞分化为雄性生殖细胞(有少许为雌性生殖细胞)的关键环节、原始生殖细胞和生殖干细胞分化过程中的标志物做一综述。[第一段]

关键词：原始生殖细胞胚胎干细胞细胞分化雄性生殖细胞生殖干细胞体外诱导环境影响基因调控 cell 细胞群体

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小鼠睾丸膜联蛋白A1的克隆、表达及定位

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解剖学杂志 2006年第2期29卷 137-140页

作者：魏玉珍郭瀛军王凯慧高福禄孙树汉福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系福州350004 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 承德医学院组织学与胚胎学教研室承德067000

目的:克隆、表达小鼠睾丸膜联蛋白A1,并研究其在睾丸中的定位。方法:利用RT-PCR技术从小鼠睾丸组织中扩增膜联蛋白A1的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T。以亲和层析法纯化蛋白免疫家兔制备多抗,并做睾丸切片免疫组织化学... 详细信息

目的:克隆、表达小鼠睾丸膜联蛋白A1,并研究其在睾丸中的定位。方法:利用RT-PCR技术从小鼠睾丸组织中扩增膜联蛋白A1的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T。以亲和层析法纯化蛋白免疫家兔制备多抗,并做睾丸切片免疫组织化学检测。结果:重组质粒测序结果表明,插入片段与小鼠膜联蛋白A1的序列完全一致。K802重组菌高效表达出相对分子质量为63 000的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%。多抗效价达1∶102 400,可特异识别重组蛋白。免疫组织化学显示膜联蛋白A1主要分布于精原细胞核、精子细胞顶体帽及精子胞质残余体内。结论:成功克隆、表达了小鼠膜联蛋白A1基因;膜联蛋白A1在睾丸生精细胞中的不同分布预示其可能与生精过程有关。

关键词：膜联蛋白A1 克隆,分子基因表达定位睾丸

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耳蜗前庭标本的电镜制备方法

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电子显微学报 2006年第B8期25卷 276-276页

作者：王英颜永碧第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部数理学教研室上海200433

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携蜂毒素基因重组腺病毒对HepG2细胞甲胎蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

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河北医科大学学报 2006年第1期27卷 10-14页

作者：李绍祥李瑞利凌昌全张晨李柏张亚妮北京军区总医院肝病研究所北京100700 河北医科大学基础医学院组织胚胎学教研室河北石家庄050017 第二军医大学长海医院中医科上海200433

目的观察以甲胎蛋白转录调控序列(transcription regulatory element of-αfetoprotein,rAFP)驱动蜂毒素基因转录的重组腺病毒对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病... 详细信息

目的观察以甲胎蛋白转录调控序列(transcription regulatory element of-αfetoprotein,rAFP)驱动蜂毒素基因转录的重组腺病毒对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中,重组质粒在293细胞中进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)观察蜂毒素基因的转录;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法定量检测甲胎蛋白(-αfetoprotein,AFP);流式细胞术检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein-ase-2,MMP-2)分子表达情况。结果重组腺病毒载体构建成功,体外转染HepG2肝癌细胞后,蜂毒素基因在rAFP的控制下,可以抑制AFP阳性肝癌细胞的增殖,明显降低其AFP的生成量,但MMP-2分子的表达却是升高的。结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的部分生物学行为,使其表达谱发生改变。

关键词：肝肿瘤蜂毒肽甲胎蛋白类肽肽水解酶类

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发育相关转录因子GATA4在小鼠肝癌细胞中的表达及其意义

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 361-365页

作者：任传路刘善荣杨玲王凤玫熊俊汤淑萍刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433

目的:探讨转录因子GATA4在肝癌细胞中的表达及其在肝癌发生中的作用.方法:将GATA4真核表达载体转染小鼠正常肝细胞,RT-PCR、免疫组化鉴定转染效果,G418筛选稳定表达细胞克隆;进行细胞计数并绘制未转染、空转染、转染GATA4组及肝癌细胞... 详细信息

目的:探讨转录因子GATA4在肝癌细胞中的表达及其在肝癌发生中的作用.方法:将GATA4真核表达载体转染小鼠正常肝细胞,RT-PCR、免疫组化鉴定转染效果,G418筛选稳定表达细胞克隆;进行细胞计数并绘制未转染、空转染、转染GATA4组及肝癌细胞组细胞生长曲线;RT-PCR法比较成纤维细胞(3T3,L1)、GATA4转染肝细胞(BNLG,L2)、未转染肝细胞(BNL,L3)、肝癌细胞株H22细胞(H22,L4)、肝癌细胞株Hepa1-6细胞(Hepa1-6,L5)和小鼠孕13.5 d胎肝细胞(孕13.5d胎肝,L6)的GATA4、胎蛋白转录因子(FTF)和甲胎蛋白(AFP)mRNA的表达.结果:GATA4真核表达载体转染效果较好;小鼠肝癌细胞株高表达GATA4 mRNA而正常肝细胞几乎不表达;GATA4转染组小鼠肝细胞增殖速度明显大干未转染和空转染组,但要小于肝癌细胞组.L1~L6的GATA4、FTF、AFP mRNA表达强度分别为0.04±0.02,0.28±0.03,0.04±0.02,0.26±0.03,0.32±0.04,0.24±0.03;0.04±0.02,0.26±0.02,0.08±0.02,0.22±0.02,0.26±0.02,0.26±0.01;0.04±0.01,0.37±0.03,0.14±0.02,0.50±0.03,0.51±0.03,0.49±0.03.L1、L3与L2、L4、L5、L6比较差异显著(P<0.01),说明正常肝细胞的GATA4、FTF、AFP mRNA表达明显低于肝癌和胎肝细胞,转染后表达增高.结论:GATA4在肝癌细胞中高表达,并能够促进正常肝细胞增殖,促进FTF、AFP mRNA的表达,可能参与肝癌的发生、发展.

关键词：肝肿瘤 GATA4 肝癌细胞甲胎蛋白

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小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究(英文)

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 355-360页

作者：熊俊胡凯猛冀凯宏汤淑萍王英刘厚奇第二军医大学基础医学部组织胚胎学教研室上海200433 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化。方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α- SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电... 详细信息

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化。方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测α- SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况,明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况。结果:成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型,并被组织学分析证实。免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达α-SMA的细胞,肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变,明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化。结论:肾小管基底膜局部断裂,肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞间充质细胞转型的过程。

关键词：肾间质纤维化肌成纤维细胞肾基底膜基质金属蛋白酶

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p63转录因子在表皮发生和分化中的作用

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2005年第1期25卷 76-79页

作者：冀凯宏刘厚奇第二军医大学组织胚胎学教研室上海200433

p63转录因子的表达具有促进表皮发生和维持表皮正常分化的双重作用。在胚胎期表皮发生时,p63作为单层体表外胚层层化的分子开关;而在成熟表皮中,p63有维持基底层表皮干细胞增殖潜能的作用。

关键词： p63转录因子表皮角质细胞干细胞

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