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生物工程学报 2003年第3期19卷 312-316,T001页

作者：刘兵侯春梅吴英张双喜毛宁军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室第二军医大学基础部免疫学教研室上海200433

小鼠的造血系统起源于胚胎发育 7d的卵黄囊胚外中胚层 ,研究表明胚胎干细胞 (Embryonicstemcells ,EScells)体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程 ;此外 ,诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有... 详细信息

小鼠的造血系统起源于胚胎发育 7d的卵黄囊胚外中胚层 ,研究表明胚胎干细胞 (Embryonicstemcells ,EScells)体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程 ;此外 ,诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有重要的研究和应用价值。高增殖潜能集落形成细胞 (Highproliferativepotentialcolony form ingcells ,HPP CFC)是体外培养的最原始的多潜能造血前体细胞之一。本研究发现 :小鼠ES细胞在体外分化 5～14d形成的拟胚体中含有HPP CFC。其再生潜能与胚胎期 9d的卵黄囊来源的HPP CFC相似 ,与骨髓来源则不同。RT PCR分析表明 :ES细胞来源的HPP CFC表达与造血干细胞增殖相关的特异性转录因子和多种造血生长因子受体。但分化 12d的拟胚体细胞和HPP CFC集落细胞移植受致死剂量照射的小鼠不能产生典型的脾结节。因此 ,ES细胞来源的HPP CFC在体外和体内造血活性的差异值得更深入地研究。

关键词：胚胎干细胞高增殖潜能集落形成细胞脾结节形成单位小鼠

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乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠的表型分析

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 155-158页

作者：熊俊訾晓渊姚玉成金艳花李建秀苏小平王新民倪文君丛文铭胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院病理科

目的 :研究乙型肝炎病毒 X蛋白致转基因小鼠的表型效应。方法 :采用免疫组织化学和组织病理学方法分析转基因小鼠中 X蛋白的表达部位及其病理学改变。结果 :免疫组织化学检测发现 X蛋白在转基因小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和皮肤组... 详细信息

目的 :研究乙型肝炎病毒 X蛋白致转基因小鼠的表型效应。方法 :采用免疫组织化学和组织病理学方法分析转基因小鼠中 X蛋白的表达部位及其病理学改变。结果 :免疫组织化学检测发现 X蛋白在转基因小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和皮肤组织中均有表达 ,从 F0 代到 F3代小鼠 ,X蛋白在肝细胞中的分布逐渐从细胞质向细胞核转移。病理学分析显示 ,表达 X蛋白的转基因小鼠出现了皮肤组织结构异常、肝组织和肺组织轻度变性等病理学变化。结论 :乙型肝炎病毒 x基因转基因小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和皮肤等组织中表达 X蛋白 ,部分转基因小鼠出现的皮肤组织、肝组织和肺组织病理性损伤可能与 X蛋白有关 ;各代转基因小鼠肝细胞中 X蛋白的分布具有规律性的变化 ,可用于研究

关键词：乙型肝炎病毒 x基因转基因小鼠病理学免疫组织化学

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单克隆抗体诱发乙肝转基因小鼠肝组织损伤

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 164-167页

作者：胡卫江余宏宇姚玉成李建秀孙伟郝光荣胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科第二军医大学实验动物中心

目的 :诱导整合有乙型肝炎病毒 (HBV)全基因组、无病理学反应的转基因小鼠产生病理学改变 ,建立研究急性肝炎发生机制及治疗药物筛选的转基因动物模型。方法 :采用尾静脉注射方法将 3种 HBV单克隆抗体 HBs Ab、HBe Ab、HBc Ab分别或混... 详细信息

目的 :诱导整合有乙型肝炎病毒 (HBV)全基因组、无病理学反应的转基因小鼠产生病理学改变 ,建立研究急性肝炎发生机制及治疗药物筛选的转基因动物模型。方法 :采用尾静脉注射方法将 3种 HBV单克隆抗体 HBs Ab、HBe Ab、HBc Ab分别或混合导入整合有 HBV全基因组的转基因小鼠体内 ,使之与体内的抗原结合产生免疫学反应 ,随后进行血清学及常规病理学的研究。结果 :3种单克隆抗体单独或混合处理均引起 HBV转基因小鼠肝细胞的病理学损伤 ,以 HBs Ab及 HBs Ab+HBc Ab混合处理组损伤较为严重 ;但小鼠血清转氨酶基本表现正常。结论 :体液免疫反应可以诱导 HBV转基因小鼠组织细胞发生损伤 ,并产生与急性肝炎相似症状的病理学改变 ,HBs Ab及 HBs Ab+HBc Ab处理的

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠动物模型单克隆抗体

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乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 175-178页

作者：金艳花訾晓渊姚玉成熊俊李建秀苏小平王新民倪文君丛文铭杨康鹃胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院病理科延边大学医学院生物学教研室延吉133000

目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′... 详细信息

目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/

关键词：乙型肝炎病毒 preS2蛋白转基因小鼠 preS/S基因肝

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乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 168-171页

作者：苏小平姚玉成訾晓渊赵书民熊俊李建秀王新民丁佳许燕余宏宇胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院感染科长征医院病理科

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder... 详细信息

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性。

关键词：乙型肝炎病毒 MHBs 转基因小鼠 preS2-S基因

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HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 159-163页

作者：刘红姚玉成葛军辉李建秀苏娟张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 详细信息

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。结果 :DNA免疫正常小鼠后 8～14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130～ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻。

关键词：乙型肝炎病毒 preS2-S基因体液免疫转基因小鼠乙型肝炎

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乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 172-174页

作者：刘红姚玉成何金李文林李建秀苏小平张钦宪胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第二军医大学长征医院病理科郑州大学医学院组织胚胎学教研室郑州450025

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基... 详细信息

目的 :建立乙型肝炎病毒核心抗原 (ayw亚型 )转基因小鼠模型。方法 :采用受精卵显微注射的方法制备转基因小鼠 ,以 PCR、免疫组化和 H- E染色法分析导入基因在小鼠基因组中的整合、肝脏中的表达及肝组织的病理变化。结果 :得到 6只基因组中整合了核心抗原基因的首建者 (founder)小鼠 ,其中 1只在肝细胞核和胞浆均有 HBc Ag的表达。将肝脏中表达的小鼠继续传代 ,F1 代 10只小鼠中的 4只小鼠肝细胞有 HBc Ag的表达。结论 :建立了乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠 ,核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达。

关键词：乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠动物模型

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后基因组时代的基因工程小鼠

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第二军医大学学报 2003年第2期24卷 117-119页

作者：胡以平曾溢滔第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 上海医学遗传学研究所上海200040

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代... 详细信息

基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一 ,在认识“基因 -蛋白质 -生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型 ,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来 ,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加 ,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而 ,在基因工程小鼠的产生中 ,仍存在着一些问题。它们的解决。

关键词：基因工程小鼠转基因小鼠基因剔除小鼠基因替换小鼠

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A型肉毒毒素对犬下食管括约肌的作用

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第二军医大学学报 2003年第12期24卷 1325-1327页

作者：王斌张忠兵顾晓红陆月良第二军医大学长征医院消化内科上海200003 上海市杨浦区中心医院消化内科上海200093 第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的:研究A型肉毒毒素(BTA)对犬下食管括约肌(LES)的作用机制,为临床BTA治疗贲门失弛缓症提供实验依据。方法:在胃镜下对BTA组(10条犬)LES分4点注射BTA,对照组(10条犬)注射生理盐水,分别于注射前、注射后1周测定LES的压力,同时测定LES中... 详细信息

目的:研究A型肉毒毒素(BTA)对犬下食管括约肌(LES)的作用机制,为临床BTA治疗贲门失弛缓症提供实验依据。方法:在胃镜下对BTA组(10条犬)LES分4点注射BTA,对照组(10条犬)注射生理盐水,分别于注射前、注射后1周测定LES的压力,同时测定LES中Ach的含量和AchE活性,并观察AchE阳性神经末梢和Ach囊泡的超微结构。结果:注射BTA后1周BTA组LES压力、Ach含量和AchE活性均显著低于对照组(P<0.01);在光镜下发现,运动终板色泽变淡,数目减少;在电镜下发现,神经末梢内含Ach的囊泡明显减少,末梢内AchE阳性反应物也明显减少。结论:犬LES局部注射BTA后,可引起LES压力明显下降,这可能是由于BTA破坏或抑制局部胆碱能神经末梢运动终极中的囊泡,导致局部Ach含量和AchE活性明显降低而引起。

关键词： A型肉毒毒素犬下食管括约肌实验贲门失弛缓症

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C57BL/6小鼠来源的胚胎干细胞建系及体外定向造血分化的研究

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中国实验血液学杂志 2003年第1期11卷 7-10页

作者：刘兵苑春慧江飞子侯春梅孙圣坤毛宁第二军医大学免疫学教研室上海200433 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室北京100850

哺乳动物的胚胎造血表现为时间和空间的连续变化。既往研究表明 ,12 9小鼠来源的胚胎干细胞系(embryonicstemcells,ES细胞 )的体外分化能在一定程度上模拟胚胎造血。为研究C5 7BL 6小鼠来源的ES细胞系体外定向造血细胞分化的特点 ,分离C... 详细信息

哺乳动物的胚胎造血表现为时间和空间的连续变化。既往研究表明 ,12 9小鼠来源的胚胎干细胞系(embryonicstemcells,ES细胞 )的体外分化能在一定程度上模拟胚胎造血。为研究C5 7BL 6小鼠来源的ES细胞系体外定向造血细胞分化的特点 ,分离C5 7BL 6小鼠 3.5天囊胚的内细胞团建立ES细胞系并采用常规方法鉴定 ,应用体外二步分化法形成拟胚体并进行集落培养 ,细胞化学染色和RT PCR鉴定造血前体细胞。结果表明 :所建ES细胞系MES 1符合建系标准 ,其体外分化后可在不同阶段的拟胚体中发现多种造血前体细胞的有序出现 ,包括原始红系前体细胞 ,永久红系前体细胞 ,混合集落形成细胞和粒单系集落形成细胞。RT PCR分析显示 ,拟胚体表达多种造血特异性的转录因子和造血标记。结论 :自C5 7BL 6小鼠建立的ES细胞系MES

关键词：胚胎干细胞胚胎造血造血前体细胞造血分化

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