检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1166-1168页

作者：苏娟朱海英李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长... 详细信息

目的:从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞,并分析其分化潜能。方法:利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养,通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果:从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长,不仅可稳定传代,而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节,结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论:成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞,该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及肝干细胞的应用奠定了基础。

关键词：肝干细胞体外培养体内分化

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乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1184-1187页

作者：熊俊訾晓渊姚玉成金艳花李建秀朱海英王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,... 详细信息

目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。该载体经Sal I限制性内切酶线性化后,琼脂糖电泳回收目的片段,用原核显微注射法将其注射入雄原核,制备转基因小鼠。复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder;免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。结果:成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后,出生并存活了11只新生鼠,经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠,命名为C57-TgN(HBx)SMMU。免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配,进行传代培育,复合PCR法筛选阳性转基因小鼠,目前已传至F4代。结论:本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57-TgN(HBx)SMMU,它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。

关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白转基因小鼠 HBx基因

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干细胞样肝原始细胞的体外分化

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1169-1171页

作者：熊俊姚玉成訾晓渊李文林朱海英王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中... 详细信息

目的:探讨干细胞样肝原始细胞集落体外分化的潜能。方法:分离孕13.5 d的C57BL/6小鼠胎肝组织细胞并培养,第2天出现圆形或椭圆形干细胞样肝原始细胞集落,随机挑取边界清楚的细胞集落分别培养,利用倒置相差显微镜连续观察细胞生长过程中的形态学变化并用显微摄影记录结果,最后利用免疫细胞化学分析鉴定分化后细胞的性质。结果:干细胞样肝原始细胞集落在体外培养时可形成类似肝小叶的形状,集落中央大部分细胞分化成双核细胞,集落周边细胞仍为单核细胞,但体积明显增大,整个集落中的细胞呈放射状排布。分化后,细胞群中的部分细胞表达成熟肝细胞标志白蛋白(albumin),少部分细胞表达胆管上皮细胞标志细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19),但所有细胞均不表达低分化肝细胞标志α-甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)。结论:干细胞样肝原始细胞在体外具有多向分化能力,可分化为表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞标志的细胞。

关键词：干细胞样肝原始细胞肝干细胞细胞培养体外分化

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骨髓细胞多向分化潜能的初步研究

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1172-1174页

作者：朱海英苏娟李文林姚玉成刘红王新民胡以平余宏宇第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-... 详细信息

目的:探讨骨髓细胞在受致死剂量照射的受体鼠体内的多向分化潜能。方法:将C57-TgN(Mx-cre)雄性小鼠的骨髓细胞经尾静脉植入受致死剂量照射的雌性受体鼠,重建受体鼠骨髓,然后分别用PCR和免疫组化分析检测受体鼠的多个器官组织中sry及Mx-cre基因的分布及表达情况。结果:PCR和免疫组化分析结果均显示,供体细胞的两个标志sry及Mx-cre在受体鼠的肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等多个器官中都有表达。结论:骨髓细胞不仅可以重建受致死剂量照射受体鼠的造血系统,而且具有分化为肝脏、肾脏、皮肤、脾脏等组织细胞类型的多向潜能性。

关键词：骨髓细胞造血干细胞细胞分化

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HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

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第二军医大学学报 2002年第8期23卷 819-821,F004页

作者：余宏宇景洪标孙静何金戴益民刘会敏张佩华胡以平第二军医大学长征医院病理科上海200003 第二军医大学长海医院病理科第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV ) adr亚型基因疫苗 p CMV- S2 .S(PS) ,观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法 :将 PS注射于 C5 7BL / 6小鼠胫骨前肌内 ,应用 EL ISA方法检测不同时间小鼠血清中抗 HBs抗体以及采用 51Cr... 详细信息

目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV ) adr亚型基因疫苗 p CMV- S2 .S(PS) ,观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法 :将 PS注射于 C5 7BL / 6小鼠胫骨前肌内 ,应用 EL ISA方法检测不同时间小鼠血清中抗 HBs抗体以及采用 51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果 :注射基因疫苗 1周后 ,血清中抗 HBs抗体转阳 ,4周后抗体达到高峰 ,并以高水平维持至少 8周 ;第 12周时 PS诱导小鼠产生了良好的 HBV特异的细胞免疫应答 (P<0 .0 5 )。结论 :所构建的 HBV adr亚型基因疫苗

关键词：乙型肝炎病毒基因疫苗体液免疫应答细胞免疫应答

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诊断级超声波辐照对人早孕绒毛组织的影响

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第二军医大学学报 2002年第3期23卷 314-315页

作者：李卫萍沙继宏朱玲仙叶煦亭第二军医大学长海医院超声科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部细胞生物学教研室长海医院妇产科

目的 :研究早孕时经超声辐照后绒毛组织的超微结构变化和细胞化学反应变化。方法 :15例妊娠 6～ 8周健康妇女分为 4组 ,A组 (对照组 ) 3例 ,未行超声辐照 ;B组 4例 ,超声辐照 10 min;C组、D组各 4例 ,辐照 2 0 m in。B、C组超声辐照后... 详细信息

目的 :研究早孕时经超声辐照后绒毛组织的超微结构变化和细胞化学反应变化。方法 :15例妊娠 6～ 8周健康妇女分为 4组 ,A组 (对照组 ) 3例 ,未行超声辐照 ;B组 4例 ,超声辐照 10 min;C组、D组各 4例 ,辐照 2 0 m in。B、C组超声辐照后即时取材 ,D组超声辐照后 3 d取材。观察绒毛组织超微结构和细胞化学反应的变化。结果 :C组 ,即超声辐照 2 0 m in后即时取材组 ,与正常组相比较绒毛组织有变化 ,合体滋养细胞线粒体嵴间隙及内质网扩张 ,过氧化氢细胞化学反应为阳性 ,合体滋养细胞微绒毛上有致密物沉积。A组、B组、D组均无明显异常。结论

关键词：超声检查绒毛膜绒毛超微结构组织细胞化学早孕

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视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1188-1191页

作者：姚玉成訾晓渊李建秀熊俊李文林金艳花苏小平倪文君胡以平李振林安靓杨俊峰罗清礼张文周久模第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 第一军医大学组织胚胎学教研室广州510515 大学华西医院眼科四川成都610041

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pm... 详细信息

目的:从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子(ROP)并建立ROP-绿色荧光蛋白(GFP)融合基因转基因小鼠模型。方法:用PCR法从基因组内扩增ROP,通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体,并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pmROP-EGFP表达质粒经Nol I酶切线性化后,用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核,制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建者小鼠,基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传代后,取眼球进行冰冻切片,在荧光显微镜下观察视网膜上GFP的表达。结果:从基因组内扩增出了2.1 kb的小鼠ROP,成功构建了小鼠ROP-GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建者,分别命名为C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU21、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26、C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论:成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠,它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制,还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。

关键词：转基因小鼠视蛋白基因启动子绿色荧光蛋白

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干细胞与生物医药

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中华国际医学杂志 2002年第4期2卷 283-288页

作者：胡以平第二军医大学基础部细胞生物学教研室，中国上海200433

干细胞是指那些处于分化过程之中，具有分裂增殖能力、并能分化产生一种以上“专业”细胞的原始细胞。根据干细胞的分化潜能可将其分为全能性干细胞、多能性干细胞和专能性干细胞三大类。但是干细胞的分化潜能是相对的，在特定的环境... 详细信息

干细胞是指那些处于分化过程之中，具有分裂增殖能力、并能分化产生一种以上“专业”细胞的原始细胞。根据干细胞的分化潜能可将其分为全能性干细胞、多能性干细胞和专能性干细胞三大类。但是干细胞的分化潜能是相对的，在特定的环境下干细胞可表现出一定的可塑性。目前，干细胞是生命科学的热点研究领域之一，而且进展很快。可以预料，这方面的知识和理论将有助于对个体发育认识的加深和为重大疾病防治手段的研究提供新的思路。

关键词：生物医药干细胞细胞分化细胞增殖

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小鼠神经细胞p35^(nck5a)基因5′非编码区基因表达调控功能初步研究

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 147-149页

作者：朱海英周常文王秀凤傅继梁李建秀王新民胡以平第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 山东省东营市环保科研所基础医学部细胞生物学教研室

目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小... 详细信息

目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异。结果 :体外培养细胞中 p35 nck5a基因 5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力 ,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达。结论 :这种差异提示进行体内。

关键词： p35^nck5a基因小鼠转基因基因表达调控神经细胞 AD病

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乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.0)SMMU的生物学特征

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第二军医大学学报 2002年第11期23卷 1179-1183页

作者：訾晓渊姚玉成熊俊金艳花叶煦亭李建秀刘红朱海英王新民倪文君胡以平余宏宇丛文铭第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433 长征医院病理科东方肝胆外科医院病理科

目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和... 详细信息

目的:评价乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU生物学特征的稳定性。方法:以F5代乙肝转基因小鼠C57-TgN(HBV adr2.O)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、血清ELISA检测、Western印迹分析、免疫组织化学、血清DNA PCR、透射电镜和H-E染色的方法分析HBV基因在转基因小鼠中的整合、表达、复制和组织学变化。结果:F1代乙肝转基因小鼠基因组中稳定整合有HBV基因,肝组织中可检测到HBsAg、HBcAg和X蛋白3种病毒蛋白,血清中HB-sAg和HBeAg的表达率分别为19.54％和3.39％,且在血清和肝组织中存在病毒DNA和病毒样颗粒;长期的病毒DNA整合、表达和复制可以引起转基因小鼠肝、肺等组织的病理性损伤。结论:乙肝转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.O:)SMMU具有基因组中稳定整合病毒DNA、血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征,并具有一定的组织学变化,作为生物医药研究的实验动物模型具有推广应用价值。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠免疫组织化学病理学

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