检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2020年第5期41卷 513-519页

作者：袁媛张冠宇孙平新章越凡李铁军李文林安徽中医药大学研究生院药学系合肥230012 海军军医大学(第二军医大学)药学院药理学教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院细胞生物学教研室上海200433

目的采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建叉头框G1(FOXG1)基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个... 详细信息

目的采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建叉头框G1(FOXG1)基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个向导RNA(gRNA)诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除,经单克隆筛选、测序分析和蛋白质印迹分析验证获得FOXG1基因敲除的人胚胎干细胞;通过细胞免疫荧光染色、qRT-PCR检测FOXG1基因敲除前后细胞在早期神经诱导过程中关键标志物配对框基因6(PAX6)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和正小齿同源物2(OTX2)的表达。结果利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得FOXG1基因大片段缺失的人胚胎干细胞,细胞免疫荧光染色、qRT-PCR结果均显示人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的关键标志物PAX6、SOX2和OTX2的表达并未受FOXG1缺失的影响。结论通过2个gRNA共转染可以快捷地诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除。FOXG1基因缺失并不影响人胚胎干细胞的早期神经诱导。

关键词： CRISPR/Cas9基因编辑叉头框蛋白G1 基因敲除人胚胎干细胞

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皮肤优势型慢性移植物抗宿主病小鼠模型的构建

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2286-2293页

作者：王蔚浩杨世杰杜雨軒王筱淇洪涛何云地王瑞马超安慧慧王俊洁张云芳高强国张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特... 详细信息

目的构建皮肤优势型慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)小鼠模型。方法利用致死剂量辐照BALB/c小鼠,并接受来自B10.D2供鼠混合的骨髓细胞和脾脏细胞以构建皮肤优势型cGVHD小鼠模型,通过小鼠临床表现、病理特征及靶器官细胞亚群评估模型构建情况。结果模型小鼠的临床表现以皮肤脱毛、硬化、皮屑、结痂和由皮肤皱缩硬化引起的弓背和关节僵直为主,临床病理评分随疾病进展升高,但无明显肠道cGVHD表现。病理改变中皮肤出现明显胶原沉积,毛囊减少甚至消失,而其他靶器官病理改变不明显。对以上靶器官行T细胞亚群分析,发现Th1细胞、CD4^(+)IL-13^(+)T细胞和Tc1细胞与疾病进展密切。结论成功构建可用于实验研究的皮肤优势型小鼠cGVHD模型,病理变化主要以皮肤纤维化表现为主。

关键词：慢性移植物抗宿主病皮肤肝脏肺脏 T细胞

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人脐带间充质干细胞预防小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2276-2285页

作者：洪涛王瑞王筱淇王蔚浩杜雨軒何云地马超安慧慧王俊洁张云芳高强国杨世杰张曦陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院血液病医学中心全军血液病中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400037 遵义医科大学第二附属医院检验科贵州遵义563099 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预防效果并初步探索其作用机制。方法通过对接受全身辐照的雄性BALB/c小鼠移植雄性C57BL/6小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞,构建小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后aGVHD模型,建模部分实验分组:BM组[尾静脉注射500μL供者C57BL/6小鼠骨髓细胞(5×10^(6)/只)悬液]和aGVHD组[尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)和脾脏细胞(5×10^(6)/只)混悬液]。观察小鼠生存率、临床评分和体质量变化;流式细胞术检测移植后嵌合度;HE染色观察aGVHD靶器官(肺脏、肝脏、结肠、小肠)的病理学改变。收集P4代HUCMSCs,于移植当天混合供者骨髓细胞和脾脏细胞输注BALB/c小鼠,实验分组:①aGVHD组(处理同建模部分);②aGVHD+MSCs组[经尾静脉注射500μL骨髓细胞(5×10^(6)/只)、脾脏细胞(5×10^(6)/只)和HUCMSCs(5×10^(5)/只)混悬液]。观察HUCMSCs对aGVHD的预防效果,应用ELISA检测各组小鼠血清IFN-γ、TNF-α浓度;流式细胞术检测CD4^(+)T细胞在靶器官中绝对数计数和凋亡水平。结果aGVHD组较BM组生存率降低、临床评分增高、体质量减轻明显(P<0.05),靶器官病理损伤更为严重(P<0.05);移植后小鼠达完全嵌合。HUCMSCs输注显著改善移植后小鼠生存、降低临床评分和靶器官病理损伤(P<0.05),并降低血清炎症因子浓度(P<0.05),增加CD4^(+)T细胞在靶器官中的凋亡,CD4^(+)T细胞绝对数计数显著下降(P<0.05)。结论HUCMSCs联合allo-HSCT能有效预防及减轻小鼠aGVHD,其作用机制主要是HUCMSCs介导淋巴细胞凋亡,减少其在靶器官中的浸润和调控炎症因子分泌。

关键词：异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病人脐带间充质干细胞细胞疗法炎症因子

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严重急性呼吸综合征冠状病毒2 DNA疫苗与重组亚单位疫苗在小鼠中诱导中和抗体的效力分析

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第二军医大学学报 2020年第5期41卷 474-480页

作者：徐铮昊王诚余润芷丁翠玲何燕华江亮亮彭浩然吴俊杰赵平戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院学员八队上海200433 海军军医大学(第二军医大学)长海医院呼吸与危重症医学科上海200433

目的探讨以严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)受体结合区(RBD)和表面刺突蛋白(S蛋白)S1亚基为疫苗靶抗原诱导中和抗体的效果。方法构建SARS-CoV-2 RBD与小鼠IgG1 Fc段(mFc)融合蛋白表达质粒pVRC-RBD-mFc,转染人胚肾细胞293T并进... 详细信息

目的探讨以严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)受体结合区(RBD)和表面刺突蛋白(S蛋白)S1亚基为疫苗靶抗原诱导中和抗体的效果。方法构建SARS-CoV-2 RBD与小鼠IgG1 Fc段(mFc)融合蛋白表达质粒pVRC-RBD-mFc,转染人胚肾细胞293T并进行培养。用蛋白质印迹法检测细胞培养上清中的RBD-mFc融合蛋白,用微量中和实验检测细胞培养上清中的RBD-mFc及CHO细胞重组表达的SARS-CoV-2 S1与人IgG1 Fc段(S1-hFc)融合蛋白对SARS-CoV-2感染的抑制作用。分别用质粒pVRC-RBD-mFc及S1-hFc融合蛋白通过肌内注射接种BALB/c小鼠,用ELISA检测小鼠血清中的抗-S1 IgG,用微量中和实验检测小鼠血清的病毒中和活性。结果pVRC-RBD-mFc质粒转染293T细胞的培养上清中可检测到RBD-mFc融合蛋白,超滤浓缩的细胞培养上清及S1-hFc融合蛋白均呈浓度依赖性抑制SARS-CoV-2对Vero E6细胞的感染;经pVRC-RBD-mFc质粒及S1-hFc融合蛋白免疫的小鼠血清中均可检测出抗-S1 IgG,且能中和SARS-CoV-2的感染;S1-hFc融合蛋白免疫小鼠血清的抗体滴度及病毒中和活性均高于质粒pVRC-RBD-mFc免疫小鼠血清(P均<0.01)。结论SARS-CoV-2 RBD和S1蛋白均可能作为有效的疫苗抗原,重组亚单位疫苗较DNA疫苗能更有效地诱导中和抗体。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 DNA疫苗亚单位疫苗中和抗体

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特殊作息职业人群生物节律检测技术研究进展

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职业卫生与应急救援 2023年第2期41卷 247-253页

作者：段维叶鹏王温李东方谭兴王伟忠海军军医大学(第二军医大学)海军特色医学中心海洋生物医药与极地医学研究室上海200433 西南医科大学心血管医学研究所医学电生理教育部重点实验室四川省医学电生理重点实验室四川泸州646000 海军军医大学(第二军医大学)计算机与仿真技术教研室上海200433

生物钟是由自我维持的昼夜节律振荡器和环境、行为等共同驱动的,它协调机体生理功能和行为,对健康至关重要。机体内部的生物钟受许多因素的影响。对于特殊作息职业人群,因作息时间不规律,易出现生物节律紊乱,从而引起失眠、抑郁等多种... 详细信息

生物钟是由自我维持的昼夜节律振荡器和环境、行为等共同驱动的,它协调机体生理功能和行为,对健康至关重要。机体内部的生物钟受许多因素的影响。对于特殊作息职业人群,因作息时间不规律,易出现生物节律紊乱,从而引起失眠、抑郁等多种身心疾病。因此检测机体内部生物节律有助于理解在不同因素作用下的特殊作息职业个体间差异并指导时间治疗法。既往评估机体内在昼夜节律的方法主要通过不同时间点采集外周标记物(如褪黑素、钟基因等)来完成,但这些方案耗时长、实用性欠佳。随着实验技术手段的进步,已有多种检测机体内在节律的新方法,它们基于机器学习或数学模型的特征分析,即从高维数据样本中提取特征,如转录组、代谢组等,从而评估身体内部生物钟。回顾并总结了这些方法,并对它们的应用前景进行了分析。这些新方法为简化特殊作息职业人群昼夜节律的检测手段和时间治疗学的发展提供了新的助力。

关键词：特殊作息职业人群昼夜节律生物钟检测方法睡眠

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移植细胞实现肝脏有效再殖的机制研究

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癌变．畸变．突变 2020年第1期32卷 76-80页

作者：阎琛刘清桂陈佳佳孙宇杨桃朱海英陈费王敏君第二军医大学细胞生物学教研室上海200433

细胞移植是目前代替原位肝移植治疗终末期肝脏疾病最具可行性的方法。然而由于细胞来源、移植细胞植入受体肝脏效率低、增殖缓慢等问题,极大地限制了细胞移植治疗方式在临床上的广泛应用。近年来,通过人为修饰改变移植细胞和宿主肝脏微... 详细信息

细胞移植是目前代替原位肝移植治疗终末期肝脏疾病最具可行性的方法。然而由于细胞来源、移植细胞植入受体肝脏效率低、增殖缓慢等问题,极大地限制了细胞移植治疗方式在临床上的广泛应用。近年来,通过人为修饰改变移植细胞和宿主肝脏微环境和肝细胞的特性,使得移植细胞再殖肝脏取得了实质性的进展。本文主要综述目前已经成功实现肝脏再殖的研究成果,并探讨移植细胞在不同动物模型中再殖肝脏的潜在机制。

关键词：肝脏再殖选择性优势细胞衰老肝脏微环境

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代谢解毒酶活性变化和击倒抗性基因突变在白纹伊蚊菊酯类杀虫剂抗性产生中的作用

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第二军医大学学报 2019年第5期40卷 512-519页

作者：陈翰明高景鹏石华李翔宇彭恒马雅军海军军医大学(第二军医大学)海军医学系热带病学教研室上海200433 解放军疾病预防控制中心北京100071 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院病原生物学教研室上海200433

目的探讨代谢解毒酶活性变化和击倒抗性(kdr)基因突变在白纹伊蚊菊酯类抗性机制中的作用。方法2017年8月至9月分别在山东省济南市千佛山公园(JN)、浙江省杭州市上茅家埠(HZ)、上海市宝山区宝山六村(BS)、上海市杨浦区共青森林公园(YP)... 详细信息

目的探讨代谢解毒酶活性变化和击倒抗性(kdr)基因突变在白纹伊蚊菊酯类抗性机制中的作用。方法2017年8月至9月分别在山东省济南市千佛山公园(JN)、浙江省杭州市上茅家埠(HZ)、上海市宝山区宝山六村(BS)、上海市杨浦区共青森林公园(YP)和海南省海口市美兰区居民区(HK)采集现场白纹伊蚊(生物测定均为抗性种群),检测其代谢解毒酶谷胱甘肽S-转移酶(GST)和多功能氧化酶(MFO)的活性并与敏感品系的白纹伊蚊比较,采用分类回归树方法(CART)分析GST和MFO活性变化及kdr突变(I1532和F1534)在抗性产生中的贡献率。结果白纹伊蚊敏感品系的GST和MFO的活性基线水平均高于现场抗性种群BS和HK(P均<0.01)。BS种群接触溴氰菊酯后与未接触杀虫剂的基线相比,GST和MFO变化不明显(P>0.05),接触氯菊酯后GST活性升高(P<0.05),MFO活性也升高(P<0.01);HK种群接触溴氰菊酯后GST活性差异不明显(P>0.05)、MFO活性升高(P<0.01),接触氯菊酯后GST和MFO活性变化均不明显(P均>0.05)。5个现场抗性种群接触溴氰菊酯和氯菊酯后的GST和MFO活性与敏感品系的基线相比,变化无规律。CART分析结果显示,白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性产生中GST活性和kdr F1534突变的贡献率较大,其次是MFO活性,kdr I1532突变贡献率最小;对氯菊酯的抗性产生中,kdr F1534突变的贡献率最大,其次是GST和MFO活性,kdr I1532突变无贡献。结论代谢解毒酶GST和MFO活性水平不适合作为判断白纹伊蚊种群对菊酯类杀虫剂抗性的单因素指标;代谢解毒酶活性变化和kdr突变可能是白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂抗性产生中相互协同的2种机制。

关键词：白纹伊蚊除虫菊酯类代谢抗性击倒抗性

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凉血活血与益气活血中药对放射性肺损伤大鼠模型不同部位血流情况的影响

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山西医科大学学报 2022年第3期53卷 317-326页

作者：贾萍萍张毅卢晨龙马力天张莎李哲岳正刚王晋郑瑾陕西中医药大学肿瘤教研室咸阳712000 空军军医大学第二附属医院中医科中国人民解放军31658部队陕西中医药大学基础医学院诊断学教研室陕西中医药大学第一临床医学院陕西中医药大学协同创新中心空军军医大学军事预防医学系辐射防护医学教研室陕西省自由基生物学与医学重点实验室

目的研究凉血活血方与益气活血方对不同时期放射性肺损伤大鼠不同部位血流情况的影响及两方剂所含成分分析。方法80只SD大鼠,随机分成4组:照射组、照射+凉血活血组、照射+益气活血组和空白对照组,每组20只。除空白组外,其余各组大鼠以6 ... 详细信息

目的研究凉血活血方与益气活血方对不同时期放射性肺损伤大鼠不同部位血流情况的影响及两方剂所含成分分析。方法80只SD大鼠,随机分成4组:照射组、照射+凉血活血组、照射+益气活血组和空白对照组,每组20只。除空白组外,其余各组大鼠以6 MV-X线经背部照射右肺,单次3 Gy,每周照射2次,连续照射5周,最高累积剂量30 Gy,建立放射性肺损伤模型;于照射开始时,凉血活血组和益气活血组同步灌胃给药,每日一次;模型组和空白组给予同等体积生理盐水;分别于照射开始后第12周、第26周对大鼠各部位(耳背、背侧胸部、腹侧胸部及腹部)的血流情况进行采集。通过液质联用技术对凉血活血和益气活血方药中所含成分进行解析鉴定。结果与空白对照组比较,在放射性肺损伤急性期,模型组大鼠背侧胸部及腹侧胸部血流量均显著升高(P<0.01)。在背侧胸部,与模型组相比,凉血活血组和益气活血组急性期大鼠的血流量均显著降低(P<0.01),且凉血活血组效果优于益气活血组(P<0.01);在腹侧胸部,与模型组相比,凉血活血组急性期大鼠腹侧胸部血流量显著降低(P<0.01),耳背部和腹侧腹部各组间无明显统计学差异。液质联用技术鉴定表明,在mzCloud数据库中,凉血活血方共匹配到564个化合物,254个化合物综合评分大于70;益气活血方共匹配到188个化合物,139个化合物综合评分大于70。在两方中,评分大于92分且共有的成分是汉黄芩素、18-β-甘草次酸、洋川芎内酯H、麦芽四糖、齐墩果酸等成分。结论凉血活血方和益气活血方均可改善急性放射性肺损伤大鼠背侧胸部的血流变化,且凉血活血方更具有一定优势;通过液质联用技术可进一步分析鉴定两方药所含成分的区别,为临床运用及进一步研究提供参考。

关键词：放射性肺损伤凉血活血方益气活血方血流量液质联用技术

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生物化学与分子生物学实验教学中常见问题与解决方法

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科教导刊-电子版（上旬） 2020年第6期 177-178页

作者：廖俊高云孔杰卢小玲朱玉平王梁华第二军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海 200433 第二军医大学基础医学院基础医学实验教学中心上海 200433

生物化学与分子生物学实验课程是将理论知识和动手操作能力相结合的重要基础课程.在实验教学过程中,教员通过发现常见的问题并针对这些问题提出行之有效的的解决办法,能够让学生充分意识到实验课程的重要性,发挥自主学习的能动性,提高... 详细信息

生物化学与分子生物学实验课程是将理论知识和动手操作能力相结合的重要基础课程.在实验教学过程中,教员通过发现常见的问题并针对这些问题提出行之有效的的解决办法,能够让学生充分意识到实验课程的重要性,发挥自主学习的能动性,提高发现、分析、解决问题以及创新实验的能力.

关键词：生物化学分子生物学实验教学

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脂蛋白SA2275抗体治疗金黄色葡萄球菌脑脓肿的实验初探

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第三军医大学学报 2020年第16期42卷 1655-1662页

作者：郑颖杨裔彭华刚饶一凡胡珍胡启文钟莲梅饶贤才尚伟龙周人杰昆明医科大学第一附属医院神经内科昆明650032 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 西南大学生命科学学院现代生物医药研究所三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室培育基地重庆400715 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院急诊部重庆400037

目的探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用。方法利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275)。制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔... 详细信息

目的探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用。方法利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275)。制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔注射的anti-SA2275在小鼠脑组织中的滴度,评估抗体通过血脑屏障的能力;再利用梯度稀释细菌计数法检测脑脓肿中的细菌载量,对脑脓肿进行连续病理切片检测脑脓肿的大小,评价抗体anti-SA2275治疗金葡菌脑脓肿的效果。结果成功获得高纯度SA2275重组蛋白;免疫小鼠获得anti-SA2275,效价为1:51200;anti-SA2275注射金葡菌脑脓肿模型小鼠后,在动物脑组织中检测到抗体的存在;治疗组小鼠脑脓肿大小和菌载量显著低于阴性对照组。结论在金葡菌感染小鼠所致的脑脓肿形成过程中,脂蛋白SA2275特异性抗体可以通过血脑屏障分布至脑组织,显著抑制脑脓肿的形成及细菌的定植,具有治疗金葡菌脑脓肿的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌脑脓肿抗体血脑屏障

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