检索结果-内蒙古大学图书馆

应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除小窝蛋白1基因的神经细胞构建与功能鉴定

中国媒介生物学及控制杂志 2018年第5期29卷 453-457页

作者：权力江爱民卢彦宗朱耐伟朱勇喆第二军医大学微生物学教研室上海200433 第二军医大学学员旅学员1队上海200433 第二军医大学学员旅学员9队上海200433

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑系统建立小窝蛋白1(CAV-1)基因敲除的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y),并验证其对流行性乙型脑炎病毒(JEV)的易感性。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,基于人源CAV-1基因的外显子区(EXON)序列设计小向导RNA(sg... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑系统建立小窝蛋白1(CAV-1)基因敲除的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y),并验证其对流行性乙型脑炎病毒(JEV)的易感性。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,基于人源CAV-1基因的外显子区(EXON)序列设计小向导RNA(sgRNA),将sgRNA连接到载体PX459质粒上。将重组质粒转染至SHSY5Y细胞中,使用嘌呤霉素筛选稳定敲除CAV-1蛋白的SH-SY5Y细胞,并用免疫印迹法验证CAV-1蛋白的敲除效果。免疫荧光法比较CAV-1基因敲除的SH-SY5Y株与野生型细胞株对JEV感染性的差异。结果经酶切和测序鉴定,重组真核表达质粒构建正确,转染并筛选的单克隆细胞中没有CAV-1蛋白的表达,成功构建CAV-1基因敲除的SH-SY5Y细胞株。与野生型SH-SY5Y细胞株相比,CAV-1基因敲除的细胞株对JEV的感染性下降约90%(P<0.001)。结论利用CRISPR/Cas9系统成功构建CAV-1基因敲除的SH-SY5Y细胞株,该细胞株可用于进一步研究CAV-1蛋白在JEV感染中的作用机制。

关键词：基因编辑小窝蛋白神经细胞流行性乙型脑炎病毒

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DC-SIGN与mCEACAM1a分子相互作用调控鼠冠状病毒复制

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微生物与感染 2018年第3期13卷 136-145页

作者：张浩旸郭佳慧赵兰娟姚茜茜文荣徐娅佳王玉燕叶荣复旦大学基础医学院病原生物学系上海200032 第二军医大学微生物学教研室上海200433

树突细胞特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)和肝/淋巴结特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素分子(liver/lymph node-specific intercellular adhesion molecules-3-grabbing non-integrin,L-SIGN)是钙离子依赖的C型凝集素受体,通过识别病毒粒子表面含甘露聚糖或果糖寡聚糖的分子介导病毒进入细胞,但其在调节病毒复制中的作用较少被关注。本研究通过建立稳定表达DC-SIGN和L-SIGN及其功能域嵌合体的细胞系,分析两者过表达对鼠冠状病毒复制的影响。结果显示,L-SIGN比DC-SIGN更能显著抑制病毒复制,这种差异与两者胞内区序列和基序组成不同有关;鼠冠状病毒感染导致细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路分子磷酸化下调,过表达DC-SIGN和L-SIGN可抑制这种下调趋势。在没有鼠癌胚抗原相关细胞黏附分子1(mouse carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,mCEACAM1)存在时,DC-SIGN不能介导病毒感染。这些结果提示,DC-SIGN通过与mCEACAM1a分子相互作用和调节细胞信号通路分子功能以调控鼠冠状病毒复制。

关键词： DC-SIGN mCEACAM1a 相互作用鼠冠状病毒复制

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1株肠道病毒71型毒株的分离与鉴定

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中国热带医学 2018年第1期18卷 17-21页

作者：许耘川朱勇喆王娟娟上海交通大学医学院附属新华医院检验科上海200092 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的探讨手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的分离与鉴定方法。方法采集手足口病疑似病例的咽拭子标本1份接种于人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell,RD细胞),通过观察病毒的细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)来分析EV71的分离效... 详细信息

目的探讨手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的分离与鉴定方法。方法采集手足口病疑似病例的咽拭子标本1份接种于人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell,RD细胞),通过观察病毒的细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)来分析EV71的分离效果。分别利用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹分析(Western Blotting)方法来鉴定EV71病毒特异性核酸和蛋白。扩增EV71VP1区全长基因,对其序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果手足口病疑似病例咽拭子标本接种RD细胞传代至第2代后出现CPE。RT-PCR和Western Blotting检测结果均显示,感染组RD细胞中有EV71病毒特异性条带,暂命名为EV71分离株2016SHYP001。序列分析结果显示,2016SHYP001株病毒的VP1区核苷酸与C型代表株的同源性较高,为93.1%~98.3%;其中与C4a亚型代表株的同源性最高,为98.3%。进化树分析发现本地流行株与深圳地区流行株的亲缘较近。结论成功分离出一株新的EV71病毒株2016SHYP001,其株型为C4a亚型。

关键词：手足口病肠道病毒71型病毒分离基因型

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贵州黔南喀斯特洞穴放线菌抗菌活性筛选及差异研究

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贵州医科大学学报 2019年第5期44卷 519-523,535页

作者：牛雪可兰永哲李文均曹煜黄劲廖万清康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地暨贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 中山大学生命科学学院广东广州510275 贵州医科大学附院皮肤科贵州贵阳550004 第二军医大学上海长征医院真菌学研究所上海200003

目的:探索贵州黔南荔波喀斯特地区洞穴放线菌资源,筛选具有抗菌活性的放线菌菌株。方法:采集贵州荔波茂兰喀斯特森林无名洞穴内土壤样品,采用纯培养的方法分离菌株,并扩增其16SrRNA基因、筛选其中放线菌;使用3种培养基发酵,管碟法对放... 详细信息

目的:探索贵州黔南荔波喀斯特地区洞穴放线菌资源,筛选具有抗菌活性的放线菌菌株。方法:采集贵州荔波茂兰喀斯特森林无名洞穴内土壤样品,采用纯培养的方法分离菌株,并扩增其16SrRNA基因、筛选其中放线菌;使用3种培养基发酵,管碟法对放线菌进行抗菌活性检测。结果:共分离出35株放线菌,分属于3个目、5科、9个属、22个种,红球菌属为优势菌属(45.7%);42.8%的菌株对至少一种测试菌具有抗菌活性;使用AM3及ISP5培养基获得具有抗性发酵液的比例均占53.3%,RA培养基只有33.3%的发酵液具有抗性。结论:贵州黔南喀斯特无名洞穴内存在丰富的具备潜在抗菌活性的放线菌资源,不同的发酵培养条件影响放线菌抗菌活性。

关键词：喀斯特放线菌抗菌活性培养条件筛选贵州

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维拉帕米通过下调硫氧还蛋白互作蛋白的表达抑制丙型肝炎病毒感染

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第二军医大学学报 2017年第5期38卷 548-553页

作者：王世杰张卫张龙严罗正汉尹昊瓒唐紫薇戚中田赵平第二军医大学热带医学与公共卫生学系微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 第二军医大学海军医学系学员5队上海200433 第二军医大学学员旅10队上海200433

目的探讨抗高血压药维拉帕米是否可通过下调宿主硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)的表达而抑制丙型肝炎病毒(HCV)的感染。方法用不同浓度梯度的维拉帕米处理人肝癌细胞系Huh7.5.1,用qPCR和蛋白质印迹法检测TXNIP的表达。用维拉帕米处理Huh7.5.... 详细信息

目的探讨抗高血压药维拉帕米是否可通过下调宿主硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)的表达而抑制丙型肝炎病毒(HCV)的感染。方法用不同浓度梯度的维拉帕米处理人肝癌细胞系Huh7.5.1,用qPCR和蛋白质印迹法检测TXNIP的表达。用维拉帕米处理Huh7.5.1细胞,同时加入细胞培养产生的HCV(HCVcc),48 h后检测HCVcc感染情况。用TXNIP siRNA转染Huh7.5.1细胞,检测下调TXNIP表达后,维拉帕米对HCVcc感染的影响;用TXNIP启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因表达质粒(pTXNIP-EGFP)转染Huh7.5.1细胞,分析维拉帕米对TXNIP启动子转录活性的影响。结果与对照孔相比,维拉帕米(100、200、400μmol/L)可下调Huh7.5.1细胞中TXNIP的表达,并呈现浓度依赖性(P<0.05);并可抑制HCVcc对Huh7.5.1细胞的感染,且浓度越高抑制作用越明显(P<0.05)。进一步研究结果显示,与对照组相比,维拉帕米能够抑制pTXNIP-EGFP转染细胞中EGFP的表达水平(P<0.05)。结论维拉帕米可下调TXNIP的表达从而抑制HCV感染,这可能是通过抑制TXNIP启动子的转录活性来实现的。

关键词：维拉帕米丙型肝炎病毒硫氧还蛋白互作蛋白转录启动子

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贵州省某热泉中可培养细菌的多样性及不同温度胁迫下的变化

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贵州医科大学学报 2019年第5期44卷 513-518页

作者：牛雪可邱文兰永哲李文均廖万清沈志平余能彬邹成刚康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地暨贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 中山大学生命科学学院广东广州510275 第二军医大学上海长征医院真菌学研究所上海200003 贵州正业国际工程企业管理集团有限公司贵州贵阳550000 云南大学云南生物资源保护利用国家重点实验室云南昆明650091

目的:研究贵州省某未开发热泉中可培养细菌的多样性及在不同温度胁迫下细菌的变化情况。方法:采用R2A培养基,分别置于70、65、60、55、50、45、37以及25℃下对热泉细菌进行培养,涂布法对所培养细菌进行分离鉴定,采用最大拟自然法法构建1... 详细信息

目的:研究贵州省某未开发热泉中可培养细菌的多样性及在不同温度胁迫下细菌的变化情况。方法:采用R2A培养基,分别置于70、65、60、55、50、45、37以及25℃下对热泉细菌进行培养,涂布法对所培养细菌进行分离鉴定,采用最大拟自然法法构建16srRNA系统发育树,比较不同温度胁迫下,可培养细菌多样性的差异。结果:共分离得到243株可培养细菌,归属于25个种、20个属、5个纲以及3个门;在属间水平上,α-变形菌纲细菌的多样性最为丰富;在菌株数量上,α-变形菌纲属于优势类群;不同温度培养下,所得到的优势菌不同,在60、55、50、45、37以及25℃6种培养温度下分离出的菌株在群落分布上呈现明显的差异,37℃细菌群落多样性最丰富。结论:该热泉中微生物多样性丰富,未发现的新类群;温度对群落的组成有显著影响,温度可能与生物多样性变化相关。

关键词：热泉细菌培养生物多样性温度胁迫贵州

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结直肠癌组织肿瘤浸润的免疫细胞特征及与预后关联

结直肠癌组织肿瘤浸润的免疫细胞特征及与预后关联

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浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会

作者：叶乐乐施昕妤林康明常文军薛向阳温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室海军军医大学(原第二军医大学)热带医学与公共卫生学系卫生毒理学教研室

肿瘤微环境中浸润的免疫细胞是肿瘤发生发展的重要因素。本研究旨在构建一种有效预测结直肠癌患者预后的免疫细胞模型,为结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的防治和预后评估提供新的方向。本研究纳入GEO数据库1497例样本和TCGA数据库的62... 详细信息

肿瘤微环境中浸润的免疫细胞是肿瘤发生发展的重要因素。本研究旨在构建一种有效预测结直肠癌患者预后的免疫细胞模型,为结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的防治和预后评估提供新的方向。本研究纳入GEO数据库1497例样本和TCGA数据库的621例CRC样本,以及来自中国温州和上海两个中心的1008例结直肠腺癌标本。利用CIBERSORT法评估CRC标本22种浸润免疫细胞特征,COX单因素分析进一步探讨了浸润免疫细胞与CRC预后(无病生存期DFS、总生存时间OS)的关联性。通过筛选并选择TAN、TAM及Tregs 3种免疫细胞在对1008例CRC组织标本行免疫组化分析。以来自温州的CRC样本作为训练队列,统计分析这3种免疫细胞与CRC临床特征及预后的相关性,并构建模型,进一步通过上海样本进行测试及验证。结果显示,22种免疫细胞不同程度与CRC预后(DFS、OS)相关。测试队列检测结果显示,TAN、TAM及Tregs三种免疫细胞与肿瘤分化、淋巴结转移等临床特征相关,是CRC预后的独立因素。本研究利用TAN、TAM及Tregs三种细胞构建了一个针对CRC患者的预后评估模型,并在测试队列及验证队列中确认了这一模型的预测价值,结果显示高风险组的CRC患者相对于低风险组患者有更短的DFS及OS。此外,TAN、TAM及Tregs可影响CRC患者对放化疗的反应性,在经放化疗的患者中,高风险组的预后差距更大。总之,肿瘤组织浸润免疫细胞参与了CRC的发生发展过程,与预后相关,并影响放化疗的效果。

关键词：结直肠癌肿瘤微环境免疫细胞

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丙型肝炎疫苗的研究进展