检索结果-内蒙古大学图书馆

虚拟现实技术在医学实验教学课程中的应用

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基础医学教育 2012年第8期14卷 627-628页

作者：陶清源王岩任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

随着基础医学教学改革的不断深入以及计算机网络技术的不断普及,网络化教学的地位日益重要;其中,利用虚拟现实技术构建的虚拟实验室在医学实验教学课程中起着其他技术手段无法替代的作用,可以促进实验教学课程的教学改革与发展。

关键词：虚拟现实技术虚拟实验室教学改革

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rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

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热带医学杂志 2012年第10期12卷 1171-1174页

作者：朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩... 详细信息

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。

关键词：蜡样芽胞杆菌群 rpoB基因实时定量PCR

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rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

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中国微生物学会第二届全国芽胞杆菌研究与应用学术研讨会

作者：朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海 200433

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBR green实时定量PCR...

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBR green实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序.结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bp DNA片段,而各种对照菌株均未见扩增.序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88％.以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32× 101 +7.45× 100)拷贝.结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群的快速而准确的检测.

关键词：

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细胞膜胆固醇对于人肠道病毒71型细胞入侵的影响及其机制研究

细胞膜胆固醇对于人肠道病毒71型细胞入侵的影响及其机制研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：朱勇喆吴达革任浩王文徐庆强曹明媚王文博赵平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室

目的人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,然而目前对于EV71的感染机制尚不清楚。本研究旨在通过观察细胞膜胆固醇对EV71易感性的影响,阐明EV71细胞入侵的途径,揭示病毒生命周期的早期环节。方法人胚胎横纹肌肉瘤细胞(R... 详细信息

目的人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,然而目前对于EV71的感染机制尚不清楚。本研究旨在通过观察细胞膜胆固醇对EV71易感性的影响,阐明EV71细胞入侵的途径,揭示病毒生命周期的早期环节。方法人胚胎横纹肌肉瘤细胞(RD细胞)与不同浓度的胆固醇破坏剂(MβCD,nystatin和lovastatin)分别培养,感染EV71病毒后通过免疫荧光、实时荧光定量PCR和病毒空斑实验,观察病毒衣壳蛋白(VP1)表达水平、胞内病毒RNA复制水平以及上清中的病毒滴度,并与未加药物的对照细胞进行比较。继而通过观察胆固醇删除剂在病毒加入前后各个时间点对于EV71感染性的影响,确定胆固醇的作用环节。通过流式细胞术、免疫共沉淀、脂筏分离以及激光共聚焦技术分析胆固醇删除后是否影响病毒与宿主细胞的结合能力、病毒与受体相互作用、病毒与受体的脂筏定位以及病毒的内吞过程。结果胆固醇删除剂MβCD、胆固醇聚合失活剂nystatin以及胆固醇合成抑制剂lovastatin均能显著抑制EV71细胞病变效应、VP1表达水平、胞内病毒RNA复制水平以及上清中的病毒滴度,并且这种抑制作用呈剂量依赖性。RD细胞经MβCD处理后,外源加入胆固醇能够恢复EV71的感染性。在EV71感染前加入MβCD能显著抑制病毒感染,但在病毒感染30分钟后加入MβCD并不影响病毒生长。流式细胞术结果显示,胆固醇删除并不影响EV71受体B族Ⅱ型清道夫受体(SCARB2)的表达水平,结合在RD细胞表面的病毒数量也与删除前相似。免疫共沉淀结果显示,MβCD处理前后,SCARB2抗体沉淀的VP1蛋白水平相似。脂筏分离结果显示,EV71与SCARB2的相互作用发生在膜上胆固醇富集区,而MβCD的作用使得他们定位于非胆固醇区域。激光共聚焦结果显示,MβCD处理后,内化至胞浆中的EV71病毒颗粒显著减少。结论破坏细胞膜胆固醇抑制EV71感染性,且主要影响病毒的入侵环节。胆固醇删除不影响病毒与宿主细胞结合,也不影响病毒-受体的相互作用,但阻碍了EV71的内吞过程。本研究证实了胆固醇在EV71感染早期的重要作用,进一步阐明EV71细胞入侵的分子机制,为抗病毒治疗提供了可能靶点。

关键词：细胞膜胆固醇人肠道病毒71型脂筏入侵

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SR-B1基因多态性对HCV感染性的影响

SR-B1基因多态性对HCV感染性的影响

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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：许刚关默赵平王文任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室

目的:B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)是丙型肝炎病毒(HCV)入侵的首位受体分子,同时也是体内胆固醇运输的重要受体,已有多项研究证明脂蛋白通过与SR-B1、病毒三者间的相互作用在病毒入侵时发挥重要作用。全基因组单核苷酸多态性位点(single nu... 详细信息

目的:B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B1)是丙型肝炎病毒(HCV)入侵的首位受体分子,同时也是体内胆固醇运输的重要受体,已有多项研究证明脂蛋白通过与SR-B1、病毒三者间的相互作用在病毒入侵时发挥重要作用。全基因组单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与疾病间的关系近年来备受关注。SR-B1在人群中存在基因变异,本研究拟分析SR-B1 SNPs对HCV感染性的影响。方法:定点突变构建SR-B1SNPs突变体表达质粒,构建SR-B1的shRNA慢病毒载体,转染293T细胞。在24小时和48小时收集细胞上清感染Huh-7.5.1细胞,G418筛选Huh-7.5.1/SR-B1-细胞;野生型和突变型SR-B1分别转染Huh-7.5.1/SR-B1-细胞,48小时后用HCVcc和HCVPp感染,免疫荧光测定感染性;在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中转染同剂量的野生型与突变型的SR-B1,通过RT-PCR以及WB检测SR-B1的mRNA以及蛋白的表达水平;通过慢病毒感染的方法构建稳定表达野生型和突变型SR-B1的CHO细胞,流式细胞术分析细胞与病毒以及包膜蛋白E2的结合能力;用带有荧光标记的HDL(Alexa-HDL)与稳定表达野生型和突变型SR-B1的CHO细胞孵育,流式细胞术检测结合力。结果:获得Huh-7.5.1/SR-B1-细胞系的基础上,筛选到3个对病毒感染有影响的SNPs位点,分别为:S112F突变体减弱病毒的感染,T175A、P297S突变体增强病毒的感染。SR-B1突变体在细胞中的分布没有发生改变,与野生型一样在细胞膜以及细胞质中都有分布。所有突变体中除了S112F以外都对基因的表达没有影响。S112F突变降低了蛋白的表达,但对RNA水平没有影响,分析可能是突变改变了RNA的结构,降低了翻译效率。3个突变中T175A、P297S突变增强了病毒以及包膜蛋白与SR-B1的结合,而S112F突变后却有微弱的降低。这与对病毒感染性的影响结果一致。携带着3个突变的人群体内的胆固醇水平较正常人高,通过流式分析所有突变型的SR-B1与HDL的结合都较野生型低。这说明突变减弱SR-B1与HDL的结合从而减低胆固醇的运输效率,引起体内的胆固醇水平上升。结论:从HCV的受体分子SR-B1上找到与病毒易感性相关SNPs位点,并在体外细胞水平上证实,为后续研究提供了理论依据。

关键词： HCV 野生型 SR-B1 突变体突变型感染性基因多态性受体分子

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鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用

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解放军医学杂志 2011年第10期36卷 1023-1026页

作者：潘欣李广波李晗蔡家麟陈龙沈下贤刘培培吴鉴今第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi... 详细信息

目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW264.7细胞,将阳性细胞命名为RAW-DT,用pDsRed2-Perxi质粒转染RAW264.7细胞,阳性细胞命名为RAW-D。采用Alexa Fluor 350对结合单抗的鼠伤寒沙门菌显色,用Alexa Fluor 488对iNOS进行显色,并在荧光显微镜下观察。用鼠伤寒沙门菌感染RAW-DT细胞,以观察鼠伤寒沙门菌与TassC和过氧化物酶体的关系;用鼠伤寒沙门菌感染RAW-D细胞,以观察iNOS与过氧化物酶体和鼠伤寒沙门菌的关系。结果免疫荧光观察显示,呈现绿色荧光的TassC-GFP有膜性结构,可与标记了红色荧光的过氧化物酶体共定位;感染1h的RAW-DT胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可招募TassC-GFP和过氧化物酶体;感染1h的RAW-D胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可与iNOS和过氧化物酶体共定位;在1h的观察期间,一旦鼠伤寒沙门菌进入巨噬细胞,膜性小泡(SCV)周围即可募集较多过氧化物酶体。结论野生型鼠伤寒沙门菌可诱导巨噬细胞产生iNOS,iNOS和TassC均可与过氧化物酶体结合,可能具有一定的杀菌作用。

关键词：巨噬细胞沙门菌鼠伤寒靶向沙门菌分泌的spiC蛋白(TassC) 一氧化氮合酶Ⅱ型过氧化物酶体类

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人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子诱导机体免疫应答的研究进展

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中华传染病杂志 2011年第12期39卷 762-764页

作者：张华群杨界曹洁第二军医大学微生物学教研室上海200433

反式转录激活因子（***）是HIVl在感染早期产生的一种重要调节蛋白，它可与HIV-1RNA基因组的反式激活效应元件（transactivatingresponsiveregion，TAR）结合，促进HIV-1的转录及复制，在HIV-1感染及致病中发挥重要作用。

关键词：转录激活因子人类免疫缺陷病毒-1 机体免疫应答 HIV-1感染 RNA基因组调节蛋白反式激活

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丙型肝炎病毒E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的研究

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卫生研究 2011年第3期40卷 295-298页

作者：邵圣文周洪昌童一民任艳丽陈志辉湖州师范学院医学院微生物学教研室湖州313000 第二军医大学微生物学教研室

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法构建截除疏水性羧基末端的HCV包膜蛋白表达质粒pCI-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pCI-1b661Δ,转染293T细胞,以Western blo... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)包膜E2蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生中和抗体的可行性。方法构建截除疏水性羧基末端的HCV包膜蛋白表达质粒pCI-1b661以及同时截除疏水性羧基末端和高变区1(HVR1)的表达质粒pCI-1b661Δ,转染293T细胞,以Western blot和ELISA检测细胞内和培养上清中的HCVE2蛋白,将两种表达质粒及空载体分别肌注免疫BALB/c小鼠,以ELISA检测小鼠血清中的HVR1抗体,以HCV假病毒颗粒(HCVpp)分析小鼠血清的中和活性。结果 2种表达质粒均能表达分泌性截短型E2蛋白。pCI-1b661免疫的8只小鼠血清中均可检测到HVR1抗体,而pCI-1b661Δ免疫血清中未检测到HVR1抗体。pCI-1b661和pCI-1b661Δ免疫血清对HCVpp的中和率分别为(78.5±13.8)%和(38.7±6.5)%,差异有显著性(P<0.01)。pCI-1b661免疫组小鼠血清的中和率与HVR1抗体水平呈正相关(r=0.967,P<0.01)。结论表达截短型E2蛋白的DNA疫苗能诱导产生HCV中和抗体,其主要成员为HVR1抗体。

关键词：丙型肝炎病毒包膜E2蛋白 DNA疫苗高变区1 中和抗体

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人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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病毒学报 2011年第6期27卷 580-586页

作者：张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大... 详细信息

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 Tat蛋白缺失突变原核表达免疫原性

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丙型肝炎病毒F蛋白在病毒复制和致病中的作用

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中国生物制品学杂志 2011年第3期24卷 349-353页

作者：王文博任浩第二军医大学微生物学教研室全军生物侦检与防护重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科,是有包膜的单正链RNA病毒。HCV基因组约有9 600个碱基,编码的单一开放读码框(Open reading frame,ORF)翻译出约3 000个氨基酸残基的多聚蛋白前体,在宿主细胞及病毒蛋白酶的作用下,剪... 详细信息

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科,是有包膜的单正链RNA病毒。HCV基因组约有9 600个碱基,编码的单一开放读码框(Open reading frame,ORF)翻译出约3 000个氨基酸残基的多聚蛋白前体,在宿主细胞及病毒蛋白酶的作用下,剪切成至少10种结构蛋白和非结构蛋白。近年来,一种新的病毒蛋白在一些实验室相继被发现,称为读码框移位蛋白(Alternative reading frame protein,ARFP),或称为F蛋白(Frameshift protein),也有学者称之为Core+1蛋白。F蛋白是由核心基因读码框移位产生的,虽然从发现至今已有10余年,但其生物学功能仍不明确,对其在肝脏疾病和肝细胞癌的发生发展中的作用及其对HCV复制和感染的影响尚有争议。本文就F蛋白的发现、产生机制、抗原性、生化特性及生物学功能等作一综述。

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白重叠读码框核糖体漂移病毒复制毒力

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