检索结果-内蒙古大学图书馆

海军军医大学学报 2024年第1期45卷 42-48页

作者：唐万达彭浩然赵平赵兰娟海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433

目的通过腹腔注射攻毒途径建立蜱媒脑炎病毒(TBEV)感染BALB/c小鼠模型,观察小鼠的感染症状和病毒在小鼠体内的复制特征。方法将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为未感染病毒对照组、1×10^(3)空斑形成单位(PFU)TBEV感染组(以每只小鼠1... 详细信息

目的通过腹腔注射攻毒途径建立蜱媒脑炎病毒(TBEV)感染BALB/c小鼠模型,观察小鼠的感染症状和病毒在小鼠体内的复制特征。方法将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为未感染病毒对照组、1×10^(3)空斑形成单位(PFU)TBEV感染组(以每只小鼠1×10^(3)PFU的攻毒剂量经腹腔注射感染小鼠)、1×10^(4)PFU TBEV感染组(以每只小鼠1×10^(4)PFU的攻毒剂量经腹腔注射感染小鼠),观察小鼠的感染症状、体重变化与生存情况。通过H-E染色观察小鼠脑、脾的病理改变,采用免疫组织化学染色检测小鼠脑、脾中TBEV蛋白的表达,采用空斑试验检测小鼠脑、脾中TBEV滴度的动态变化。结果1×10^(4)PFU TBEV感染组小鼠于感染后第6天出现弓背、后肢瘫痪等感染症状,1×10^(3)PFU TBEV感染组小鼠于感染后第7天出现上述症状。与未感染病毒对照组小鼠相比,1×10^(4)PFU TBEV感染组小鼠从第5天、1×10^(3)PFU TBEV感染组小鼠从第6天开始体重明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。1×10^(4)PFU TBEV感染组小鼠第7天开始死亡、第8天全部死亡,1×10^(3)PFU TBEV感染组小鼠第7天开始死亡、第9天全部死亡。H-E染色结果显示,TBEV感染后第5天、第7天小鼠大脑皮质仅出现少量神经元核固缩、深染,未观察到炎症细胞浸润;TBEV感染后第5天小鼠脾红髓轻度淤血、多见中性粒细胞,第7天中性粒细胞数量增多。免疫组织化学染色结果显示,TBEV感染后第5天小鼠脑与脾少量表达TBEV蛋白,第7天TBEV蛋白表达量增加。1×10^(3)PFU TBEV感染第7天,小鼠脑内TBEV滴度高达(1.3±0.6)×10^(5)PFU/mL,而脾中TBEV滴度为(1.3±0.6)×10^(3)PFU/mL。结论经腹腔注射攻毒成功建立了TBEV感染BALB/c小鼠模型,TBEV可在小鼠体内增殖并具致病性。

关键词：蜱媒脑炎病毒 BALB/c小鼠腹腔注射感染致病性

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寨卡病毒感染人神经母细胞瘤细胞的转录组分析

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海军军医大学学报 2024年第12期45卷 1508-1520页

作者：姚秋凤张力健高雅琪任浩秦照玲戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

目的通过生物信息学技术分析寨卡病毒(ZIKV)感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后的转录组数据,拟找出参与ZIKV致病机制的潜在基因。方法用ZIKV感染SH-SY5Y细胞,提取细胞总RNA后用转录组测序技术分析筛选出差异表达基因(DEG)。对DEG进行基... 详细信息

目的通过生物信息学技术分析寨卡病毒(ZIKV)感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后的转录组数据,拟找出参与ZIKV致病机制的潜在基因。方法用ZIKV感染SH-SY5Y细胞,提取细胞总RNA后用转录组测序技术分析筛选出差异表达基因(DEG)。对DEG进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,预测DEG主要参与的生物学过程、分子功能和信号通路,最后通过qPCR进行验证。结果共鉴定出259个DEG,包括172个上调基因和87个下调基因。GO功能富集分析显示,DEG主要与细胞外基质、刺激应答、抗微生物体液反应、发育过程相关;KEGG通路富集分析显示,DEG主要与炎症反应、免疫反应有关。DEG的qPCR验证结果与转录组测序结果基本一致。结论ZIKV感染SH-SY5Y细胞后参与细胞外基质、刺激应答、调控炎症反应的基因表达显著改变,说明ZIKV可能通过重塑细胞外基质及调控炎症反应引起神经系统病变。

关键词：寨卡病毒神经病变高通量测序转录组分析

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血脑屏障动物模型的研究进展

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海军军医大学学报 2022年第3期43卷 314-319页

作者：王晓航陈洋戚中田朱勇喆海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院上海200433

血脑屏障(BBB)是中枢神经血管单元的重要结构,通过紧密连接及转运蛋白阻止神经毒性物质与病原体入侵,维护中枢神经系统内环境稳定。相较于体外模型,理想的动物模型可更好地模拟BBB生理机制,在血流动力学、屏障完整性、信号转导和物质交... 详细信息

血脑屏障(BBB)是中枢神经血管单元的重要结构,通过紧密连接及转运蛋白阻止神经毒性物质与病原体入侵,维护中枢神经系统内环境稳定。相较于体外模型,理想的动物模型可更好地模拟BBB生理机制,在血流动力学、屏障完整性、信号转导和物质交换等研究中起重要作用。在BBB动物模型评价方法的研究中,减少创伤、动态评估成为评价方法的重要需求;BBB动物模型的构建由经典模型动物(果蝇、非人灵长类动物)转变为转基因、人源化动物(斑马鱼、小鼠),说明在新技术发展下,与人类蛋白表达相近、适合高通量筛选的BBB动物模型是该领域的主流发展趋势。

关键词：血脑屏障动物模型评价方法转基因动物模型人源化动物模型

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基孔肯雅病毒疫苗研究新进展

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海军军医大学学报 2022年第12期43卷 1437-1444页

作者：潘振东赵平海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433

基孔肯雅热(CHIKF)是由基孔肯雅病毒(CHIKV)引起的以发热、皮疹和慢性关节痛为主要症状的急性传染病。CHIKF每年在全球100多个国家和地区发病约100万例,已成为重要的全球性公共卫生问题之一。疫苗接种是预防传染病最重要、最有效和最经... 详细信息

基孔肯雅热(CHIKF)是由基孔肯雅病毒(CHIKV)引起的以发热、皮疹和慢性关节痛为主要症状的急性传染病。CHIKF每年在全球100多个国家和地区发病约100万例,已成为重要的全球性公共卫生问题之一。疫苗接种是预防传染病最重要、最有效和最经济的手段,但是由于基础研究和临床试验的资金投入不足以及病毒持续发生适应性突变等原因,导致针对CHIKV的疫苗研发进程总体较为缓慢,迄今还没有CHIKV疫苗被批准用于临床,但已有多种候选疫苗正在进行临床试验。本综述对近年来CHIKV疫苗研究取得的进展进行了概述。

关键词：基孔肯雅病毒基孔肯雅热病毒疫苗病毒样颗粒

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人肺腺癌细胞A549对蜱媒脑炎病毒的易感性分析

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海军军医大学学报 2022年第5期43卷 478-483页

作者：唐万达赵平任瑞文戚中田赵兰娟海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 南部战区疾病预防控制中心广州510507

目的研究蜱媒脑炎病毒(TBEV)在易感细胞中的培养特性,并鉴定病毒RNA的复制、蛋白质表达和感染性。方法利用非洲绿猴肾细胞Vero培养TBEV,采用qPCR检测TBEV RNA的复制水平,采用蛋白质印迹法检测黄病毒包膜蛋白的表达,采用空斑实验检测培... 详细信息

目的研究蜱媒脑炎病毒(TBEV)在易感细胞中的培养特性,并鉴定病毒RNA的复制、蛋白质表达和感染性。方法利用非洲绿猴肾细胞Vero培养TBEV,采用qPCR检测TBEV RNA的复制水平,采用蛋白质印迹法检测黄病毒包膜蛋白的表达,采用空斑实验检测培养基中TBEV的滴度。用TBEV感染人肺腺癌细胞A549,于显微镜下观察TBEV感染A549细胞的细胞病变效应。通过免疫荧光法检测TBEV感染的A549、Vero细胞中黄病毒包膜蛋白的表达。结果与孵育48 h的细胞相比,孵育72 h的Vero细胞内TBEV RNA水平更高,并检测到有黄病毒包膜蛋白表达。空斑实验结果显示,在孵育72 h Vero细胞的培养基中,TBEV病毒滴度为(2.0±1.4)×10^(6)空斑形成单位(PFU)/mL。TBEV感染可引起A549细胞的细胞病变效应。在1∶1000稀释TBEV感染的细胞中,A549细胞中黄病毒包膜蛋白表达的阳性率(61.0%)高于Vero细胞(9.3%)。TBEV感染A549细胞48 h培养基中的病毒滴度高于Vero细胞培养基中的病毒滴度[(2.0±0.4)×10^(7)PFU/mL vs(8.5±2.1)×10^(3)PFU/mL,P<0.05]。结论Vero细胞可用于培养TBEV,A549细胞对TBEV更易感。

关键词：蜱媒脑炎病毒细胞培养 RNA复制蛋白质表达滴度

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基于黄热病毒编码蛋白的靶向药物研发研究进展

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第二军医大学学报 2021年第7期42卷 783-787页

作者：吴兵安彭珂冯麒帆戚中田钱汐晶海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院上海200433

黄热病毒(YFV)属于黄病毒科黄病毒属,是一类有包膜的单正链RNA病毒。尽管疫苗能有效预防YFV感染,但普及率较低,加之缺乏有效抗病毒药物,YFV仍周期性暴发。YFV基因组编码的病毒蛋白在其感染的各个阶段均发挥重要作用,因此研发靶向YFV蛋... 详细信息

黄热病毒(YFV)属于黄病毒科黄病毒属,是一类有包膜的单正链RNA病毒。尽管疫苗能有效预防YFV感染,但普及率较低,加之缺乏有效抗病毒药物,YFV仍周期性暴发。YFV基因组编码的病毒蛋白在其感染的各个阶段均发挥重要作用,因此研发靶向YFV蛋白的治疗药物是提高黄热病治疗效果、降低病死率的有效措施。本文简要介绍了YFV基因组编码的病毒蛋白的结构和功能,并综述了针对这些靶点研发抗YFV药物的进展和发展前景,为防治YFV感染提供参考。

关键词：黄热病毒病毒蛋白抗病毒药靶向药物

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利福平抗黄热病毒感染的效果及初步机制

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第二军医大学学报 2021年第1期42卷 8-13页

作者：吴兵安钱汐晶吴兴安徐铮昊罗正汉唐海琳赵平戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 空军军医大学基础医学院微生物学教研室西安710032

目的检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制。方法用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50)。YFV感染Huh-7细... 详细信息

目的检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制。方法用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50)。YFV感染Huh-7细胞的同时加入不同浓度(0.04、0.2、1、5、25μmol/L)的利福平,检测其抗YFV感染的剂量效应,并计算IC50。YFV感染Huh-7细胞的同时加入5μmol/L利福平,孵育不同时长(2、4、8、12、24 h),检测其抗YFV感染的时间效应。YFV感染Huh-7细胞后,在感染的不同时间段(2、4、6、8、12 h)加入25μmol/L利福平(药物作用时间2 h,病毒感染2 h),检测其抗YFV感染最显著的起效阶段。利用病毒结合实验、内吞荧光标记实验评价利福平对YFV入侵靶细胞的影响。结果利福平细胞毒性较弱(CC50为176.9μmol/L),抑制YFV作用显著(IC50为1.868μmol/L,P<0.01);动力时间窗、结合和内吞实验表明,利福平能抑制YFV结合、入侵靶细胞(P<0.01),但不影响YFV的内吞过程。此外,利福平在感染后期的复制阶段也有一定的抑制效果(P<0.01)。结论利福平可抑制YFV感染靶细胞,作用机制主要通过在病毒感染早期的入侵阶段阻断病毒结合靶细胞。

关键词：利福平黄热病毒抗病毒药感染

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蝙蝠相关的冠状病毒

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第二军医大学学报 2020年第9期41卷 935-940页

作者：丁翠玲赵平戚中田海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433

2019年12月,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,继2003年严重急性呼吸综合征(SARS)暴发后又给人类敲响了一记警钟。研究者通过溯源分析,发现COVID-19病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的自然宿主可能是中华菊头蝠。21世纪以... 详细信息

2019年12月,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发,继2003年严重急性呼吸综合征(SARS)暴发后又给人类敲响了一记警钟。研究者通过溯源分析,发现COVID-19病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的自然宿主可能是中华菊头蝠。21世纪以来,全球共出现4次冠状病毒[严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、SARS-CoV-2]的暴发,给人类健康、公共卫生、经济发展及社会稳定造成了巨大的威胁与损失。大量证据表明,这4种冠状病毒的自然宿主可能均为蝙蝠。本文对蝙蝠相关冠状病毒的种类、全球地理分布及引起暴发的蝙蝠相关冠状病毒作一综述。

关键词：冠状病毒蝙蝠严重急性呼吸综合征冠状病毒中东呼吸综合征冠状病毒猪急性腹泻综合征冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2

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严重急性呼吸综合征冠状病毒2假病毒的制备及验证

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第二军医大学学报 2020年第4期41卷 359-364页

作者：彭浩然江亮亮何燕华肖爱军唐海琳戚中田赵平海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 上海捷瑞生物工程有限公司上海201615

目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制备方法。方法设计、合成序列优化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,构建表达质粒,转染293T细胞,用免疫荧光检测S蛋白的表达;将该质粒与基于慢病毒基因骨架的含... 详细信息

目的建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制备方法。方法设计、合成序列优化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,构建表达质粒,转染293T细胞,用免疫荧光检测S蛋白的表达;将该质粒与基于慢病毒基因骨架的含增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的假病毒包装质粒共转染293T细胞,收集细胞培养上清,感染Vero E6和Huh7细胞,观察细胞内EGFP的表达;将制备的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6细胞,检测膜融合抑制剂氯喹和盐酸阿比朵尔、SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清对假病毒感染性的影响。结果构建的SARS-CoV-2 S质粒转染的293T细胞可与S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清反应。SARS-CoV-2 S质粒与HIV假病毒包装质粒共转染293T细胞的上清加入Vero E6细胞和Huh7细胞36 h和72 h后可分别观察到细胞内表达的EGFP,EGFP阳性的Huh7细胞数量明显多于Vero E6细胞。2种膜融合抑制剂、1株人源S1单克隆抗体及2份新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清均可有效抑制SARS-CoV-2 pps对Vero E6细胞的感染(P均<0.01)。结论成功制备了SARS-CoV-2 pps,其可用于后续抗SARS-CoV-2药物筛选与疫苗评价。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 假病毒膜融合抑制剂中和抗体

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严重急性呼吸综合征冠状病毒2核衣壳蛋白原核表达、纯化及其抗血清制备

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第二军医大学学报 2020年第5期41卷 481-486页

作者：秦照玲彭浩然丁翠玲肖爱军戚中田赵平海军军医大学(第二军医大学)海军医学系生物医学防护教研室上海200433 上海捷瑞生物工程有限公司上海201615

目的表达并纯化重组的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳(N)蛋白,通过免疫小鼠制备SARS-CoV-2 N蛋白抗血清。方法将含有SARS-CoV-2 N基因的pET28a-N原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋... 详细信息

目的表达并纯化重组的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳(N)蛋白,通过免疫小鼠制备SARS-CoV-2 N蛋白抗血清。方法将含有SARS-CoV-2 N基因的pET28a-N原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导蛋白表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化SARS-CoV-2 N重组蛋白;将SARS-CoV-2 N重组蛋白联合锰佐剂通过肌内和皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;用蛋白质印迹分析检测SARS-CoV-2 N重组蛋白与SARS-CoV-2 N单克隆抗体及严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)N多克隆抗体的反应;用间接免疫荧光实验检测小鼠抗血清与真核表达质粒转染细胞中SARS-CoV-2 N重组蛋白的反应。结果成功诱导大肠杆菌表达出可溶性的SARS-CoV-2 N重组蛋白,相对分子质量约为55000,纯化出该重组蛋白;蛋白质印迹分析结果显示SARS-CoV-2 N重组蛋白能与SARS-CoV-2 N单克隆抗体及SARS-CoV N多克隆抗体结合;间接免疫荧光实验检测结果表明制备的小鼠抗血清能与哺乳动物细胞中表达的SARS-CoV-2 N重组蛋白结合。结论成功表达、纯化出SARS-CoV-2 N重组蛋白,并制备出该蛋白的小鼠抗血清,为后续建立SARS-CoV-2的快速诊断方法及开展SARS-CoV-2 N蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 核衣壳蛋白原核表达免疫血清

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