检索结果-内蒙古大学图书馆

国际药学研究杂志 2017年第7期44卷 687-692页

作者：王博柳国艳张黎明第二军医大学海洋生物医药研究中心海医系海洋生物技术教研室上海200433

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点。在海洋生物毒素的检测和预... 详细信息

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点。在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力。本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望。

关键词：核酸适配体海洋生物毒素检测应用前景

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Dextran-40对致命性水母蜇伤的保护作用

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中国生化药物杂志 2017年第5期37卷 1-6页

作者：张慧王倩倩肖良王超王博王蓓蕾张黎明第二军医大学海洋生物医药研究中心上海200433 第二军医大学海医系海洋生物技术教研室上海200433

目的分析低分子右旋糖酐（Dextran-40）对致命性水母蜇伤的保护作用。方法首先,应用本课题组建立的致命性水母蜇伤综合征（acute jellyfish envenomation syndrome,AJES和delayed jellyfish envenomation syndrome,DJES）模型,在整体动物水平分别观察Dextran-40对AJES小鼠生存率的影响、AJES大鼠循环功能的影响以及DJES大鼠血生化指标的影响。然后,应用激光扫描共聚焦显微镜,在细胞水平观察Dextran-40对发形霞水母触手提取物（tentacle extract,TE）所致心肌细胞损伤的保护作用。结果整体动物水平研究结果发现,Dextran-40 0.8 g/kg能显著降低TE所致AJES小鼠死亡率;Dextran-40 0.6 g/kg能明显缓解TE所致AJES大鼠的血压下降,改善TE所致DJES大鼠的肝功能指标（ALT,AST,A/G）、心肌损伤相关酶指标（CK,LDH）。细胞水平研究结果表明,Dextran-40 5μg/m L显著抑制TE引起的心肌细胞内Ca^（2＋）增加和心肌细胞死亡。结论 Dextran-40对致命性水母蜇伤的保护作用可能与其稳定血压或者封堵水母毒素在细胞膜上形成的孔道有关。因为Dextran-40属临床常用药物,故推荐Dextran-40作为水母蜇伤的急救药。

关键词：水母蜇伤低分子右旋糖酐水母蜇伤综合征

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发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体的构建及其表达

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中国生化药物杂志 2015年第12期35卷 1-5页

作者：周永红张慧成熙柳国艳张黎明第二军医大学海洋生物医药研究中心上海200433 第二军医大学海医系海洋生物技术教研室上海200433

目的获得发形霞水母丝氨酸蛋白酶,为深入研究发形霞水母丝氨酸蛋白酶的功能奠定基础。方法综合运用生物信息学分析发形霞水母丝氨酸蛋白酶分子的序列特征和活性功能。通过设计带有特异性酶切位点的引物,将编码发形霞水母丝氨酸蛋白酶的... 详细信息

目的获得发形霞水母丝氨酸蛋白酶,为深入研究发形霞水母丝氨酸蛋白酶的功能奠定基础。方法综合运用生物信息学分析发形霞水母丝氨酸蛋白酶分子的序列特征和活性功能。通过设计带有特异性酶切位点的引物,将编码发形霞水母丝氨酸蛋白酶的核苷酸序列(CcSP1,CcSP2和CcSP3)从cDNA文库中扩增出来,利用pET-24a(+)载体构建重组表达质粒(pET24a-Cc SP1、pET24a-CcSP2和pET24a-CcSP3),经过筛选和鉴定正确后转入表达菌Rosetta(DE3).plysS。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表达的重组蛋白。结果 SDS-PAGE电泳结果可见重组质粒转化的表达菌分别在34、42和30kDa处有蛋白条带,Western-blot检测显示,这些蛋白可特异性与抗His抗体反应,分别与预测重组蛋白分子量一致,鉴定为正确表达的目的重组蛋白。结论本研究成功构建了发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体,获得了目标蛋白,为进一步研究水母丝氨酸蛋白酶的活性和功能奠定基础。

关键词：发形霞水母丝氨酸蛋白酶原核表达重组蛋白

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发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族的原核表达载体的构建及其表达

发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族的原核表达载体的构建及其表达

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第12届生物毒素研究及医药应用学术大会

作者：周永红柳国艳成熙张黎明第二军医大学海洋生物医药研究中心第二军医大学海医系海洋生物技术教研室

水母属刺胞动物门,是一类分布广泛、生物总量非常庞大的海洋浮游动物。近年来,全球许多海域多次出现了大规模水母暴发现象,并且范围在不断扩大。水母的暴发对海洋渔业、海滨旅游、沿岸工业和涉海人员安全等造成很大威胁,是继有害藻华之... 详细信息

水母属刺胞动物门,是一类分布广泛、生物总量非常庞大的海洋浮游动物。近年来,全球许多海域多次出现了大规模水母暴发现象,并且范围在不断扩大。水母的暴发对海洋渔业、海滨旅游、沿岸工业和涉海人员安全等造成很大威胁,是继有害藻华之后最大的海洋生态灾害。事实上,水母也是对人类伤害最大的海洋动物,水母蜇伤是最常见的海洋生物伤。水母触手上密布刺丝囊,当触及人体或动物体时,发射刺丝进行袭击,同时释放出毒液,引起剧烈疼痛、恶心、麻痹、红疹等症状,严重时可以导致呼吸、循环衰竭甚至死亡。研究表明,水母毒素是一类主要存在于触手组织中,包含多种毒性组分的蛋白质与多肽类毒素。水母毒素毒性大,活性强,具有溶血性、心血管毒性、酶活性、神经毒性、肌肉毒性以及肝脏毒性等多种生物活性。为探究与水母毒素生理活性密切相关的功能活性基因的表达情况,深入研究水母毒素蛋白的结构、性质及生物学活性,前期我们构建了我国东南海域的主要致伤水母发形霞水母(Cyanea capillata)触手组织cDNA文库,利用大规模测序及生物信息学分析等手段获得了一系列包括金属蛋白酶、离子通道蛋白、凝集素、抗氧化酶类等活性因子的编码序列。其中,我们发现有三条序列的开放阅读框所编码的氨基酸序列与丝氨酸蛋白酶家族高度同源,均包含一个典型的丝氨酸蛋白酶样结构域,表明该三条序列所编码的蛋白同属丝氨酸蛋白酶家族。丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶,在生物有机体中起着重要而广泛的生理作用,它们通过对蛋白酶原的激活或抑制而发挥调节因子作用。丝氨酸蛋白酶类已被证实广泛存在于蛇类、蜘蛛等有毒动物的毒液中,作为毒素组分发挥重要作用,可能参与其他毒素组分的翻译后修饰和扩散。

关键词：丝氨酸蛋白酶结构域水母毒素原核表达载体

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致命性水母蜇伤综合征的机制及药物干预研究

致命性水母蜇伤综合征的机制及药物干预研究

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第12届生物毒素研究及医药应用学术大会

作者：王蓓蕾刘丹周永红张鑫王倩倩柳国艳郑杰民张黎明第二军医大学海洋生物医药研究中心第二军医大学海医系海洋生物技术教研室第二军医大学海医系学员三队

[目的]研究致命性水母蜇伤综合征的机制,筛选有效干预药物。[方法]在小鼠和大鼠模型上,结合中毒动物的症状和生存时间,系统分析发形霞水母触手提取物（tentacle extract,TE）的剂量、时间-效应关系,建立急性/延迟性（AJES/DJES）水母蜇... 详细信息

[目的]研究致命性水母蜇伤综合征的机制,筛选有效干预药物。[方法]在小鼠和大鼠模型上,结合中毒动物的症状和生存时间,系统分析发形霞水母触手提取物（tentacle extract,TE）的剂量、时间-效应关系,建立急性/延迟性（AJES/DJES）水母蜇伤综合征动物模型。在离体脏器（离体心脏、离体血管）、细胞水平,结合Ca通路相关拮抗剂,明确AJES模型的主要损伤机制。通过酶解法检测TE的金属蛋白酶活性,结合微血管造影术,明确DJES的损伤机制。最后,基于文献报道和本文筛选的有效药物,研究综合干预措施对致命性水母蜇伤综合征的干预效果。[结果]成功建立了急性/延迟性（AJES/DJES）水母蜇伤综合征动物模型。在AJES模型中,主要是由于水母毒素中含有穿孔素,在细胞膜上形成非特异性孔道,导致钙超载,引起心功能异常,最终导致急性循环衰竭,而膜修复剂聚乙二醇（PEG 4000/6000）对AJES具有很好的救治效果。另一方面,对DJES而言,主要是由于水母毒素中含有基质金属蛋白酶（MMPs）组分,可通过降解细胞外基质诱发出血效应,从而导致肝肾组织损伤,而金属蛋白酶抑制剂巴马司他（BB-94）能有效抑制金属蛋白酶诱导的血管损伤效应,因而BB-94对DJES具有很好的治疗效果。[结论]考虑到膜穿孔和酶损伤两大致病因子,建议采用PEG 4000/6000和BB-94联合用药治疗致命性水母蜇伤综合征。

关键词：水母蜇伤综合征穿孔素金属蛋白酶聚乙二醇巴马司他

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