检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2013年第5期58卷 411-418页

作者：潘素晶徐增辉张悦钱其军浙江理工大学生命科学学院、新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国人民解放军第二军医大学、东方肝胆外科医院基因病毒治疗实验室上海200438

DNA改组(DNA shuffling)是一种高通量的突变、筛选技术,自1994年提出以来,经过了几十年的发展,其在DNA、酶和药物蛋白等的改造上都有突出的表现.腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)是一种细小病毒,由于其无致病性和能有效呈递基因... 详细信息

DNA改组(DNA shuffling)是一种高通量的突变、筛选技术,自1994年提出以来,经过了几十年的发展,其在DNA、酶和药物蛋白等的改造上都有突出的表现.腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)是一种细小病毒,由于其无致病性和能有效呈递基因而成为一种非常理想的基因表达载体.但是AAV筛除存在一些不足,如对某些重要靶细胞感染效率不高、存在机体的免疫反应等限制了其临床研究的进展.应用DNA改组技术对AAV的衣壳蛋白进行定向进化,有望解决这些问题.本文重点综述DNA改组在AAV衣壳定向进化上的技术发展和应用,并结合本课题组在AAV衣壳DNA改组上的研究工作展开讨论.

关键词： DNA改组 AAV衣壳蛋白

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延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干细胞株的建立

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中国组织工程研究 2013年第1期17卷 50-55页

作者：叶真龙王艳金华君刘韬钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所浙江省杭州市310018 解放军第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室上海市200438

背景:小鼠肝损伤模型已被广泛应用,大鼠肝损伤模型能在发病机制,肝移植环境等方面更好地模拟人,建立大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fuarylacetoacetat hydrolase,Fah)基因敲除的胚胎干细胞株是大鼠肝损伤模型建立的重点和难点。目的:建立... 详细信息

背景:小鼠肝损伤模型已被广泛应用,大鼠肝损伤模型能在发病机制,肝移植环境等方面更好地模拟人,建立大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fuarylacetoacetat hydrolase,Fah)基因敲除的胚胎干细胞株是大鼠肝损伤模型建立的重点和难点。目的:建立Fah基因缺失的大鼠胚胎干细胞株。方法:根据Genbank检索出的大鼠Fah基因序列构建带有正负双向筛选系统的Fah基因敲除载体pKO-Fah,并进行大鼠胚胎干细胞制备与培养,通过电穿孔转染将线性化质粒转入大鼠胚胎干细胞中,用嘌呤霉素和增强型绿色荧光进行克隆的筛选,再对筛选出来的阳性克隆进行PCR验证。结果与结论:电穿孔转染后观察到绿荧光胚胎干细胞克隆,经过3轮嘌呤霉素药物筛选后约有90%的胚胎干细胞克隆表达绿荧光,成功挑取到2个稳定表达绿荧光的胚胎干细胞克隆,重组胚胎干细胞-Fah,通过PCR鉴定为正确同源重组的阳性克隆。提示大鼠胚胎干细胞稳定建系后,能通过传统的同源重组方法来建立基因敲除胚胎干细胞,并为后期基因敲除动物的建立奠定基础。

关键词：干细胞胚胎干细胞基因敲除同源重组 Fah基因大鼠干细胞图片文章

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利用杆状病毒系统获得携带抗体表达基因的双链AAV的研究

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2013年第6期30卷 870-876页

作者：刘海燕钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

研究使用二杆状病毒-昆虫细胞系统获得携带抗体表达基因的8型双链腺相关病毒(scAAV)。首先利用杆状病毒系统获得ssrAAV8-EGFP和scrAAV8-EGFP,实验表明scrAAV8-EGFP比ssrAAV8-EGFP具有更高的转导效率;然后以同样的方法获得scrAAV8-AT7,... 详细信息

研究使用二杆状病毒-昆虫细胞系统获得携带抗体表达基因的8型双链腺相关病毒(scAAV)。首先利用杆状病毒系统获得ssrAAV8-EGFP和scrAAV8-EGFP,实验表明scrAAV8-EGFP比ssrAAV8-EGFP具有更高的转导效率;然后以同样的方法获得scrAAV8-AT7,检测其滴度,并感染HEK293细胞以检测抗体的表达情况。蛋白印迹法检测出阿瓦斯汀(Avastin)重轻链已成功表达,ELISA检测出Avastin在体外的表达量可达770ng/mL。该研究表明利用杆状病毒系统所获得8型scAAV具有生物学活性并能实现外源基因的体外表达。

关键词：杆状病毒双链AAV 病毒生产外源

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仿刺参共附生放线菌Brevibacterium sp.中的环二肽成分的分离和鉴定

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第二军医大学学报 2012年第12期33卷 1284-1287页

作者：宫俊汤华耿婉丽刘宝姝孙鹏李玲李志勇张文第二军医大学药学院海洋药物研究中心上海200433 上海交通大学生命科学技术学院海洋生物技术实验室上海200240

目的对仿刺参共附生放线菌Brevibacterium sp.的次生代谢产物进行研究。方法运用硅胶柱色谱、Seph-adex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱(HPLC)等现代色谱技术对放线菌的乙酸乙酯提取物进行分离纯化,在核磁共振(NMR)、质谱(MS)等现代波... 详细信息

目的对仿刺参共附生放线菌Brevibacterium sp.的次生代谢产物进行研究。方法运用硅胶柱色谱、Seph-adex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱(HPLC)等现代色谱技术对放线菌的乙酸乙酯提取物进行分离纯化,在核磁共振(NMR)、质谱(MS)等现代波谱技术及与文献比对的基础上对其结构进行鉴定。结果共分离得到7个环二肽类化合物,分别鉴定为:环-(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸)(1)、环-(L-脯氨酸-L-甲硫氨酸)(2)、环-(L-脯氨酸-L-酪氨酸)(3)、环-(L-脯氨酸-L-缬氨酸)(4)、环-(L-脯氨酸-L-脯氨酸)(5)、环(L-缬氨酸-甘氨酸)(6)、环-(L-脯氨酸-L-亮氨酸)(7)。结论本研究是对仿刺参共附生微生物次生代谢产物研究的首次报道,这7个化合物均为首次从放线菌Brevi-bacterium sp.中分离得到。

关键词：海参仿刺参放线菌环二肽

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比较基因识别-58

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生命的化学 2012年第5期32卷 432-436页

作者：王鹏源刘小宇第二军医大学生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学研究生管理大队学员二队上海200433

比较基因识别-58(comparative gene identification-58,CGI-58)属于脂肪酶家族,是脂肪性甘油三酯脂肪酶的激活蛋白,在调控脂肪代谢方面发挥着至关重要的作用,也是调控角质形成细胞的分化过程的重要分子。另外,CGI-58还具有溶血磷脂酸酰... 详细信息

比较基因识别-58(comparative gene identification-58,CGI-58)属于脂肪酶家族,是脂肪性甘油三酯脂肪酶的激活蛋白,在调控脂肪代谢方面发挥着至关重要的作用,也是调控角质形成细胞的分化过程的重要分子。另外,CGI-58还具有溶血磷脂酸酰基转移酶活性,可将溶血磷脂酸酰化成磷脂酸。若CGI-58的基因发生突变,会引发一种隐性遗传的中性脂肪蓄积病——Chanarin-Dorfman综合征(Chanarin-Dorfman symptom,CDS),病体表现出鱼鳞病。本文将针对CGI-58调控脂肪代谢以及其它方面的功能,对近些年来CGI-58的研究进展进行综述。

关键词： CGI-58 ATGL 脂肪代谢鱼鳞病

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霍乱弧菌HutX蛋白的晶体结构

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第二军医大学学报 2012年第9期33卷 969-973页

作者：李君巩晶杨勇骥黄琰第二军医大学基础部生物物理学教研室上海200433 山东大学医学院癌症研究中心济南250012 山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室济南250100

目的获取纯化的霍乱弧菌HutX蛋白晶体和衍射数据。方法通过基因克隆和蛋白表达得到HutX蛋白,通过镍柱亲和层析、Source Q阴离子交换柱层析和Superdex 200分子筛柱层析等纯化所得蛋白,并用蛋白质印迹法进行验证。将所获蛋白进行结晶条件... 详细信息

目的获取纯化的霍乱弧菌HutX蛋白晶体和衍射数据。方法通过基因克隆和蛋白表达得到HutX蛋白,通过镍柱亲和层析、Source Q阴离子交换柱层析和Superdex 200分子筛柱层析等纯化所得蛋白,并用蛋白质印迹法进行验证。将所获蛋白进行结晶条件筛选及悬滴优化,X线衍射分析所得晶体的结构。结果蛋白质印迹分析间接证明所得到的蛋白为HutX蛋白,并得到HutX蛋白的晶体及衍射数据。结论为进一步研究HutX的蛋白结构及其在霍乱弧菌亚铁血红素利用机制中发挥的作用提供了参考。

关键词：霍乱弧菌 HutX蛋白 X线结晶学血红素利用

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生物薄膜干涉技术和ELISA法检测抗体药物免疫原性的方法学比较

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现代免疫学 2012年第4期32卷 282-286页

作者：衡磊王冲钱卫珠张大鹏王皓苏州大学医学生物技术研究所苏州215007 上海交通大学医学院上海200240 上海抗体药物国家工程研究中心上海201203 第二军医大学肿瘤研究所上海200433

采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传... 详细信息

采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传感器底端偶联的配体时,生物膜层厚度增加,反射光干涉光谱曲线产生可测量的漂移,从而可以实现对分子间相互作用的实时测量,同时以传统的抗体桥ELISA法作为平行对照。SA(Streptavidin)传感器结合生物素化的单抗,用免疫原性试剂孵育血清样品后,利用传感器检测血清样品的ADA。分别应用BLI和ELISA两种方法确定cutpoint,并进行剂量反应曲线的分析。研究结果表明BLI快速分析法具有同ELISA法极其相似的免疫原性检测行为,均能准确检测出筛选分析中的20例正常人血清的基线反应值。同时,BLI法在竞争抑制实验中体现出了很高的特异性。与ELISA相比,BLI技术用于治疗性抗体的临床免疫原性分析,更加省时,快捷,准确,而且可避免低亲和力ADA易受洗板干扰的弊端。因此,BLI技术可能成为抗体药物免疫原性检测的一种新的有效方法。

关键词：西妥昔单抗 EusA 生物薄膜干涉技术抗抗体检测

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二氧化钛纳米颗粒生物学效应研究进展

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解剖学杂志 2011年第1期34卷 122-125页

作者：温中华姜坤宏陈飞杨勇骥汤莹第二军医大学生物技术系上海200433 第二军医大学基础部生物物理学教研室上海200433

纳米二氧化钛（TiO2）颗粒作为一种新型材料已经在化工、医药、食品、化妆品、废水处理、造纸等工业生产中得到广泛应用,随着研究应用的进一步深入,其市场前景将变得更加广阔.研究表明,TiO2在常规尺度时对人体是无毒无害的,而处于纳米... 详细信息

纳米二氧化钛（TiO2）颗粒作为一种新型材料已经在化工、医药、食品、化妆品、废水处理、造纸等工业生产中得到广泛应用,随着研究应用的进一步深入,其市场前景将变得更加广阔.研究表明,TiO2在常规尺度时对人体是无毒无害的,而处于纳米尺度范围（1～100nm）时,其表面张力和表面能随着粒径的减小而剧增,小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应以及宏观量子隧道效应等导致纳米微粒在热、磁、光敏感性和表面稳定性等方面不同于常规粒子,与人体接触后,可通过呼吸道、食道、皮肤渗透等方式进入人体,其特殊的理化性质能够产生一定生物学影响.

关键词：纳米二氧化钛生物学效应纳米颗粒小尺寸效应生物学影响废水处理工业生产市场前景

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靶向肝癌细胞的嵌合AAV建库及筛选

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2012年第6期29卷 874-878页

作者：赵景川严巧灵钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆医院病毒基因治疗实验室上海200438

采用Shuffling的方法,将AAV1-9 Cap基因序列进行改组,筛选出高效靶向肝癌细胞的嵌合AAV载体。以pAAV-MCS载体为骨架,构建出含AAV2ITR和Rep2序列的pAdB载体,在此基础上,构建含有嵌合Cap序列的pARC载体库,用于转染293细胞,并加入5型腺病毒... 详细信息

采用Shuffling的方法,将AAV1-9 Cap基因序列进行改组,筛选出高效靶向肝癌细胞的嵌合AAV载体。以pAAV-MCS载体为骨架,构建出含AAV2ITR和Rep2序列的pAdB载体,在此基础上,构建含有嵌合Cap序列的pARC载体库,用于转染293细胞,并加入5型腺病毒(Ad5),包装出嵌合AAV病毒。然后将包装出的嵌合AAV病毒与Ad5共感染BEL7402肝癌细胞,经过三轮筛选后,初步筛选出可以靶向肝癌细胞的嵌合AAV。最后将筛选出的AAVRep2嵌合Cap基因的融合片段连接到pMD18-T载体上,构建出pARC-T载体,与AAV-EGFP质粒共转染293细胞,并加入Ad5,包装出病毒基因组含EGFP基因、病毒外壳为嵌合Cap的AAV病毒(cAAV-EGFP),并用其感染BEL7402细胞,观察绿色荧光的表达。最后观察到绿色荧光表达,证明筛选出了靶向BEL7402肝癌细胞的嵌合AAV。

关键词： Shuffling 嵌合AAV 靶向肝癌细胞

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重组人血白蛋白的研究进展

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中国医药指南 2011年第24期9卷 222-224页

作者：温中华朱海戴小宇张晓冬第二军医大学生物技术系上海200433

人血白蛋白（Humanserumalbumin,HAS）是人体血浆中含量最丰富的蛋白质,约占到血浆蛋白总量的60%.HSA能维持血液动力学平衡和血管内渗透压,吸收组织中多余液体到血液循环中,使动脉压升高,广泛应用于失血创伤烧伤引起的休克,脑水肿及损... 详细信息

人血白蛋白（Humanserumalbumin,HAS）是人体血浆中含量最丰富的蛋白质,约占到血浆蛋白总量的60%.HSA能维持血液动力学平衡和血管内渗透压,吸收组织中多余液体到血液循环中,使动脉压升高,广泛应用于失血创伤烧伤引起的休克,脑水肿及损伤引起的颅压升高,肝硬化及肾病引起的水肿或腹水,低蛋白血症的防治和新生儿高胆红素血症等.

关键词：重组人血白蛋白临床研究融合蛋白药物载体

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