检索结果-内蒙古大学图书馆

携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究

第二军医大学学报 2010年第2期31卷 178-182页

作者：刘辉王春红陈亚龙李林芳吴红平钱炎珍姜梨华钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒... 详细信息

目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。

关键词： RGD-4C HI环腺病毒载体肝细胞癌

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骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2010年第3期19卷 221-224页

作者：王晶晶王春芳党雯李鹏飞蔚洪恩山西医科大学生物技术教研室太原030001 山西医科大学附属第二医院药剂科太原030001 第二军医大学解剖教研室上海200433

目的探讨骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达变化及作用。方法采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质干细胞,取传代培养至第3代的骨髓基质干细胞,在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导其分化为神经元... 详细信息

目的探讨骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达变化及作用。方法采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质干细胞,取传代培养至第3代的骨髓基质干细胞,在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导其分化为神经元,倒置显微镜下观察其形态变化,应用ABI公司的TaqManMicroRNAAssaysreal-timePCR技术,检测miR-124和miR-128在诱导分化过程中的表达。结果 miR-124分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.051倍(P<0.05);miR-128分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.070倍(P<0.05)。结论 miR-124和miR-128在骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中可能起重要作用。

关键词：骨髓基质干细胞分化神经元 miR-124 miR-128

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内含子microRNA和基因调控

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山西医科大学学报 2010年第8期41卷 745-747页

作者：蔚洪恩王春芳张传森第二军医大学解剖教研室上海200433 山西医科大学生物技术教研室

功能基因组学与蛋白质组学的研究发现，高等生物拓宽其分子水平差异并不取决于基因的数目，而主要依靠对基因表达的调控来完成。人类基因组的非蛋白质编码区中实际上编码了大量的非编码RNA（如miRNA、snoRNA、stRNA、snmRNA、snRNA等）... 详细信息

功能基因组学与蛋白质组学的研究发现，高等生物拓宽其分子水平差异并不取决于基因的数目，而主要依靠对基因表达的调控来完成。人类基因组的非蛋白质编码区中实际上编码了大量的非编码RNA（如miRNA、snoRNA、stRNA、snmRNA、snRNA等），由这些RNA组成了细胞中高度复杂的RNA调控网络。

关键词： microRNA 内含子microRNA 基因调控

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乳腺生物反应器的研究和产业化进展

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中国畜牧兽医 2010年第8期37卷 45-51页

作者：付玉华周秀梅钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 中国人民解放军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒-基因治疗实验室上海200433

随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,... 详细信息

随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,其中近30种进入临床试验不同阶段,用于治疗抗凝血酶缺乏症的抗凝血酶Ⅲ(ATryn)已上市,乳腺生物反应器生产重组蛋白显示出广阔的产业化前景。作者概述了乳腺生物反应器的原理、优点、国内外研究进展和产业化进程,讨论了其目前存在问题和应对策略。

关键词：转基因动物乳腺生物反应器重组蛋白多潜能干细胞

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首株来源于转移灶的人胆囊癌细胞系EH-GB1的建立及鉴定

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中华肿瘤杂志 2010年第2期32卷 84-87页

作者：李林芳胡还章刘辰王敬晗吴红平金华君苏长青姜小清刘佳顾坚忠吴孟超钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室上海200438 南京军区福州总医院肝胆外科浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所中国科学院上海斯莱克实验动物有限责任公司

目的建立转移性胆囊癌细胞系，鉴定并研究其生物学特性。方法从人胆囊癌转移灶取材，将标本分离成单细胞悬液，用含15％胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养，培养成功后命名为EH-GB1细胞。电镜下观察EH—GB1细胞的形态，绘制细胞... 详细信息

目的建立转移性胆囊癌细胞系，鉴定并研究其生物学特性。方法从人胆囊癌转移灶取材，将标本分离成单细胞悬液，用含15％胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养，培养成功后命名为EH-GB1细胞。电镜下观察EH—GB1细胞的形态，绘制细胞生长曲线。SCID小鼠皮下接种EH-GB1细胞，观察EH—GB1细胞的成瘤能力。采用免疫组化法，检测小鼠移植瘤组织中CA19-9的表达。分别用携带绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白报告基因（Red2）的慢病毒感染EH-GB1细胞，观察EH—GB1细胞表达GFP和Red2的情况。结果EH—GB1细胞体外连续传代20代以上，形态上具有典型的恶性上皮细胞特征，倍增时间约为24h。SCID小鼠皮下接种EH—GB1细胞后的成瘤率为100％。移植瘤细胞中CA19—9呈强阳性表达。EH—GB1细胞感染携带GFP或Red2基因的慢病毒后，可稳定地表达GFP和Red2。结论EH—GB1细胞有望成为首株来源于转移灶的稳定的人胆囊癌细胞系，转染并持续表达GFP和Red2的EH-GB1细胞是胆囊癌临床与基础研究中的理想实验模型。

关键词：胆囊肿瘤转移细胞系小鼠

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以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6重新编程的研究

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2010年第1期27卷 120-124页

作者：宋波彭新荣刘韬周秀梅瞿存业钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆外科医院基因与病毒治疗实验室上海200438

利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆... 详细信息

利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆样细胞团表达Oct4、Sox2蛋白。证实,Hepa1-6小鼠肝癌细胞可以被携带Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因的逆转录病毒感染的方法诱导重新编程。

关键词：肝细胞癌重新编程转录因子

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一种消除浅表组织病灶的微型线聚焦换能器声场的数值计算与仿真方法

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中国医学物理学杂志 2010年第5期27卷 2117-2121页

作者：黄斌峰惠春余立立胡振林居小平上海交通大学生命科学技术学院生物医学仪器研究所上海200240 第二军医大学药学院上海200433 江苏中惠医疗科技股份有限公司江苏江都22520

目的:本文涉及一种消除浅表组织病灶的微型线聚焦超声声场的数值计算与仿真,通过计算得出声场的三维分布,同时研究柱面自聚焦换能器各个参数对声场的影响,以指导微型自聚焦换能器的设计。方法:本文通过建立三维直角坐标系,应用Rayleigh... 详细信息

目的:本文涉及一种消除浅表组织病灶的微型线聚焦超声声场的数值计算与仿真,通过计算得出声场的三维分布,同时研究柱面自聚焦换能器各个参数对声场的影响,以指导微型自聚焦换能器的设计。方法:本文通过建立三维直角坐标系,应用Rayleigh积分得出微型线聚焦超声换能器聚焦区域内每一点的声强表达式,运用C语言和matlab采用直接数值积分的方法对柱面聚焦超声换能器的声场进行了数值计算和仿真,得出声场的三维分布。结果:从声场的三维分布可以看出:按照本文给定的条件设计,微型线聚焦超声换能器展现出良好的聚焦性能,形成明显的焦域。和普通的柱面超声换能器相比,小型的柱面超声换能器形成的声场在z轴上的声场分布更均匀,x,y方向上衰减更快。结论:通过不同的参数对声场三维分布影响可以看出:微型线聚焦超声换能器的厚度,半径,张角和长度对聚焦的效果有明显影响。与给定的条件相比,选择较厚、半径和张角较大的换能器,能提高聚焦性能,而换能器的长度对聚焦效果影响不大。

关键词：柱面换能器声场仿真超声聚焦

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人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第1期14卷 42-47页

作者：洪敬欣张茜真韩俊领刘辉刘剑邱录贵协和干细胞基因工程有限公司天津市脐带血造血干细胞库天津市300384 解放军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海市200438 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所浙江省杭州市310018 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院天津市300020

背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质... 详细信息

背景：目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的：观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法：采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论：使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。

关键词：培养体系腺病毒感染效率脐带间充质干细胞干细胞

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二氧化钛纳米颗粒对小鼠单核巨噬细胞超微结构影响的电镜研究

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电子显微学报 2009年第6期28卷 539-542页

作者：汤莹于洋雷长海范晓燕羊富光许珊杨勇骥第二军医大学基础部生物物理研究所上海200433 同济大学生命科学与技术学院电镜室上海200433

目的:应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2)对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法:将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞(Rawcell)中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨... 详细信息

目的:应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2)对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法:将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞(Rawcell)中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨噬细胞超微结构的改变。结果:电镜下,nano-TiO2的粒径为20～35nm。致密的nano-TiO2通过内吞进入细胞,当浓度超过200μg/mL时,细胞胞质空泡内吞噬有大量成簇的致密颗粒,细胞核固缩,染色质浓缩、边集,出现早期细胞凋亡改变。

关键词：二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2) 小鼠单核巨噬细胞电镜超微结构细胞凋亡

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二氧化钛纳米颗粒解聚方法

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解剖学杂志 2009年第5期32卷 632-634页

作者：汤莹羊富光杨勇骥于洋雷长海范晓燕许珊第二军医大学基础部生物物理研究所上海200433 同济大学生命科学与技术学院上海200092

目的：研究二氧化钛（TiO2）纳米颗粒解聚的方法。方法：以超声的方法在不同条件下对多种TiO2纳米材料进行处理，利用透射电镜观察解聚情况。结果：在一定温度、功率和时间条件下，利用超声法可以对不同粒径和性质的TiO2纳米颗粒进行解... 详细信息

目的：研究二氧化钛（TiO2）纳米颗粒解聚的方法。方法：以超声的方法在不同条件下对多种TiO2纳米材料进行处理，利用透射电镜观察解聚情况。结果：在一定温度、功率和时间条件下，利用超声法可以对不同粒径和性质的TiO2纳米颗粒进行解聚，解聚后的TiO2纳米颗粒能满足其生物学效应的研究。结论：超声波振荡法是纳米颗粒团聚体解聚的有效方法。

关键词：二氧化钛纳米颗粒解聚超声波

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