检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 1997年第1期13卷 105-107页

作者：黄长晖邓炜傅继梁第二军医大学生物教研室医学分子遗传学开放实验室复旦大学遗传学研究所

Ｐ１６ｉｎｋ４ｃＤＮＡ的克隆及序列分析黄长晖邓炜傅继梁（第二军医大学生物教研室，医学分子遗传学开放实验室上海２００４３３）（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）Ｐ１６ｉｎｋ４是ＣＤＫ（ＣｙｃｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅ... 详细信息

Ｐ１６ｉｎｋ４ｃＤＮＡ的克隆及序列分析黄长晖邓炜傅继梁（第二军医大学生物教研室，医学分子遗传学开放实验室上海２００４３３）（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）Ｐ１６ｉｎｋ４是ＣＤＫ（ＣｙｃｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅｎｔＫｉｎａｓｅ）抑制蛋白家族中的...

关键词：基因克隆 P16^ink4基因 cDNA 序列分析

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MHC DQA基因的分子进化研究——Ⅱ.基于核苷酸替换和SCU偏移的系统发育的分析

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Acta Genetica Sinica 1997年第5期24卷 394-402页

作者：潘星华傅继梁第二军医大学生物学教研室医学分子遗传学开放实验室上海200433

根据23个等位基因不同外显子(EN)的核苷酸(NT)替换及同义密码子使用谱(SCU)偏移研究了哺乳类7种动物MHC DQA座位的系谱发育关系。发现:(1)在大时间尺度内,MHC DQA基因进化速率(1.0×10^(-9),其中EN2为1.3×10^(-9)9NT/位点/年)... 详细信息

根据23个等位基因不同外显子(EN)的核苷酸(NT)替换及同义密码子使用谱(SCU)偏移研究了哺乳类7种动物MHC DQA座位的系谱发育关系。发现:(1)在大时间尺度内,MHC DQA基因进化速率(1.0×10^(-9),其中EN2为1.3×10^(-9)9NT/位点/年)与一般核基因相似;鼠类DQA基因的NT替换速率大致是其他哺乳类的2倍;(2)证实DQA等位基因多态性是在哺乳动物分化以后才逐渐形成的;推测牛类也存在与绵羊DQA2即OLA-DQA(c17-2)对等的具有最近共同祖先的DQA2基因座位有待发现;HLA-DQA2系谱与HLA-DQA1祖先的分化年代在20～12Mya(百万年前),HLA-DQA1各等位基因分化时间在24Mya至1Mya以内,因此产生HLA-DQA2座位的基因重组发生在HLA-DQA1产生少数几个等位基因之后;(3)基于SCU分化度的进化树从一个新的角度体现了DQA基因的系统发育关系,并显示HLA-DQA2具有特殊的SCU,提示在DQA基因的进化中产生了SCU的分化,SCU系统树在进化上有重要价值和特殊意义。改进了基因的SCU分化度和SCU相似系数的估算方法。

关键词： MHC DQA基因分子遗传学分子进化

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乙型肝炎病毒(ayw型)转基因小鼠的建立

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 201-204页

作者：雷章恒李建秀余宏宇王新民孙伟潘星华郝光荣王肖鹏傅继梁胡以平第二军医大学基础医学部生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学实验动物中心

目的：建立遗传上稳定的、带有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的转基因小鼠品系。方法：通过对受精卵显微注射进行基因转移的途径制备转基因小鼠，以ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＥＬＩＳＡ、组织切片免疫组化和透射电镜等方法，... 详细信息

目的：建立遗传上稳定的、带有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的转基因小鼠品系。方法：通过对受精卵显微注射进行基因转移的途径制备转基因小鼠，以ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＥＬＩＳＡ、组织切片免疫组化和透射电镜等方法，分析所导入ＤＮＡ在转基因小鼠体内的功能情况。结果：得到２１只建立者小鼠，在它们的血清中检测到了ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的存在，还在肝细胞中观察到了ＨＢＶ样病毒颗粒。结论：ＨＢＶ基因组ＤＮＡ已经整合至小鼠的基因组，其中的基因能够表达，整个基因组ＤＮＡ还能复制，并被有效地包装。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠动物模型

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用PCR和基因组Southern杂交鉴定基因打靶实验中同源重组事件

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中华医学遗传学杂志 1997年第6期14卷 339-343页

作者：戴旭明薛红杨桦胡以平傅继梁第二军医大学医学分子遗传学开放实验室香港科技大学生物化学系

胚胎干细胞基因打靶实验需要从大量的基因转移细胞克隆中经过药物选择和ＤＮＡ分子水平的鉴定来获得发生同源重组的阳性细胞克隆。将快速简便、灵敏度高的ＰＣＲ技术和准确可靠的基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术相结合，用来对小鼠凝血... 详细信息

胚胎干细胞基因打靶实验需要从大量的基因转移细胞克隆中经过药物选择和ＤＮＡ分子水平的鉴定来获得发生同源重组的阳性细胞克隆。将快速简便、灵敏度高的ＰＣＲ技术和准确可靠的基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术相结合，用来对小鼠凝血因子Ⅸ基因打靶事件进行分子鉴定，取得了较好的效果，观察了ＰＣＲ鉴定的高灵敏度，但有假阳性的存在，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确认弥补这一不足，分析了ＰＣＲ鉴定中阳性对照的设立和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定中探针和内切酶的选择等问题。

关键词：基因组 Southern杂交基因打靶同源重组 PCR

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人乙型肝炎病毒(ayw型)全基因组转基因小鼠病理学观察

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第二军医大学学报 1997年第3期18卷 205-207页

作者：余宏宇雷章恒龚志锦沙继宏杨勇骥潘星华王肖鹏傅继梁胡以平第二军医大学基础医学部病理解剖学教研室第二军医大学基础医学部生物学教研室和医学分子遗传学开放实验室第二军医大学基础医学部电镜室

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、... 详细信息

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３～２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、肺、心、脑、睾丸（卵巢）、唾液腺、肌肉和皮肤等组织，切片ＨＥ染色后进行光镜和透射电镜形态观察。结果：上述两种清洁级小鼠大体和光镜下各器官和组织未见有明显病变；两种小鼠移入普通级环境下饲养４周后肝脏等器官发生机会性感染的机会相似；透射电镜下所有被检转基因小鼠的部分肝细胞扩张的滑面内质网等处有ＨＢｓＡｇ样颗粒和Ｄａｎｅ样颗粒，部分转基因小鼠之肾小管上皮细胞内见类似病毒颗粒；肝、肾细胞内未见其他亚微病理损害。结论：所建成的ＨＢＶ转基因小鼠既能在肝（其次肾）细胞内产生ＨＢＶ样病毒颗粒，但又不产生明显病理损害。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学动物模型

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基因打靶置换型载体的构建和应用研究

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第二军医大学学报 1998年第1期19卷 5-8页

作者：戴旭明薛红杨桦胡以平傅继梁第二军医大学基础医学部医学分子遗传学开放实验室香港科技大学生物化学系

目的：构建针对小鼠凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因的基因打靶置换型载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：在用噬斑原位杂交法克隆ｍＦⅨ基因组ＤＮＡ并完成结构分析的基础上，利用常规的分子克隆技术，设计并构建置换型载体，经... 详细信息

目的：构建针对小鼠凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因的基因打靶置换型载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：在用噬斑原位杂交法克隆ｍＦⅨ基因组ＤＮＡ并完成结构分析的基础上，利用常规的分子克隆技术，设计并构建置换型载体，经过限制性内切酶酶切鉴定和ＰＣＲ鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞Ｒ１株进行基因转移，经Ｇ４１８／ＧＡＮＣ（Ｇａｎｃｙｃｌｏｖｉｒ）分组药物选择，进行ｐＭＦⅣＤＥＬ载体的应用研究。结果：构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体ｐＭＦⅨＤＥＬ，在胚胎干细胞中能有效地发生重组，正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了２４倍。结论：本研究构建获得了针对ｍＦⅨ基因的置换型载体，在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用。

关键词：基因打靶置换型载体胚胎干细胞凝血因子Ⅸ

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EMS对D6-2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的诱变率和诱变谱

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中国科学（C辑） 1998年第3期28卷 264-269页

作者：黎怀星杨桦李建秀胡以平王肖鹏郝光荣傅继梁第二军医大学生物学教研室军队医学分子遗传学重点实验室上海200433 上海200433 第二军医大学实验动物中心

对D6 2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理... 详细信息

对D6 2转基因小鼠骨髓组织细胞内lacⅠ靶基因的自发突变率以及甲基磺酸乙酯 (ethylmethanesulfonate ,EMS)诱发的突变率和突变谱进行了研究 .将带有lacⅠ靶基因的pSPORT1质粒通过酶切、环化和转化DH1 0B宿主菌的方式从经和未经诱变处理的D6 2转基因小鼠骨髓组织基因组DNA中回收出来 ,lacⅠ靶基因突变体用M9/L选择性平板进行正向选择 .结果从经EMS诱变处理的小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 935个pSPORT1质粒中筛选到 6个lacⅠ-突变体 (EMS诱发的突变率为 5 0× 1 0 -5 ) ,而从对照组小鼠基因组DNA中回收出的约 1 1 6 4 9个质粒中没有检测到lacⅠ-突变体 (自发突变率则小于 8.6× 1 0 -5 ) .对 6个突变体的 2个突变高发区进行了序列分析 ,共检测出 1 6个点突变 .其中 ,碱基置换突变为主要突变类型 ,占 87.5 % ( 1 4) ,其余 1 2 .5 % ( 2 )的突变为缺失突变 .在碱基置换突变中 ,颠换占6 4 % ;而转换仅占 36 % ,这既不同于用BigBlue 转基因小鼠所测到的lacⅠ基因在小鼠体内的自发突变谱 ,又不同于用穿梭载体 /哺乳动物细胞系统所测到的EMS在体外的诱变谱 .而突变发生的位点则与其他的研究报道相同 ,主要出现在CpG二核苷酸 ,占全部点突变的 45 % .这些结果表明 :( 1 )基于含 pSPORT1质粒的D6 2转基因小鼠?

关键词：转基因小鼠骨髓组织细胞 EMS lacⅠ基因诱变率

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癌变原理的分子遗传学:　基础与进展