检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第6期27卷 503-507页

作者：张丽樊勇马雅军第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的分离中华白蛉的微卫星DNA序列,并筛选其中具有多态性的位点。方法应用中华白蛉基因组DNA的酶切片段与生物素标记的寡核苷酸探针(AAT)17、(GA)25、(CCT)17和(TG)18杂交,亲合素富集和超滤离心浓缩目的片段,扩增放大后克隆并测序,构建... 详细信息

目的分离中华白蛉的微卫星DNA序列,并筛选其中具有多态性的位点。方法应用中华白蛉基因组DNA的酶切片段与生物素标记的寡核苷酸探针(AAT)17、(GA)25、(CCT)17和(TG)18杂交,亲合素富集和超滤离心浓缩目的片段,扩增放大后克隆并测序,构建中华白蛉微卫星DNA库。挑选合适的微卫星位点,建立PCR扩增体系。应用中华白蛉现场标本对不同的微卫星DNA进行扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选具有多态性的位点。结果本研究分离中华白蛉微卫星DNA的方法效率高,重组克隆阳性率为78.6%。构建的微卫星DNA库含有118条序列,GenBank登录号为FJ919812～FJ919932(登录号为FJ919833、FJ919836和FJ919869除外),其中典型微卫星DNA序列72条(占61.0%),非典型序列46条。在构建的中华白蛉微卫星DNA库中选择22个位点进行多态性筛选,电泳结果显示14个为多态位点,双核苷酸重复的位点比三核苷酸和多核苷酸重复位点的多态性高。结论首次构建了含有118条序列的中华白蛉微卫星DNA库,共获得14个新的多态微卫星位点。

关键词：中华白蛉微卫星DNA 多态位点

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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白基因在减毒伤寒杆菌诱导株中的表达

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中华医学杂志 2000年第10期80卷 780-783页

作者：钱锋潘卫庆第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的　用含PLtetO启动子的pZE11质粒在减毒伤寒杆菌CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白。方法　将克隆有恶性疟原虫裂殖子表面蛋白C末端基因 (MSP1 42 )的重组pZE11质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌CVD90 8/tetR疫... 详细信息

目的　用含PLtetO启动子的pZE11质粒在减毒伤寒杆菌CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白。方法　将克隆有恶性疟原虫裂殖子表面蛋白C末端基因 (MSP1 42 )的重组pZE11质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌CVD90 8/tetR疫苗株中 ,用SDS PAGE、免疫印迹反应和免疫荧光反应检测MSP1 42在CVD90 8/tetR株中的体内外四环素诱导表达。结果　构建了CVD90 8/tetR/MSP1 42菌株 ;该菌株不仅在体外 ,而且在小鼠的肝脾组织中 ,由四环素诱导表达了MSP1 42蛋白 ;在体外 ,诱导表达的表达量要高于组成性的表达和tetR基因存在于质粒上的表达。结论　成功地构建了由四环素诱导的、表达恶性疟原虫MSP1 42蛋白的减毒伤寒杆菌重组菌。

关键词：沙门氏菌,伤寒疟原虫,恶性四环素基因表达

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恶性疟原虫融合蛋白PfCP-2.9自由巯基的测定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第2期21卷 99-101页

作者：钱锋潘卫庆第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的检测由毕氏酵母表达的恶性疟原虫融合蛋白(Plasmodium falciparum chimeric protein)PfCP-2.9的自由巯基。方法使用反向高压液相层析和Ellman氏反应进行检测。用反向高压液相,检测了3种样本,PfCP-2.9、PfCP-2.9经二硫苏糖醇还原、... 详细信息

目的检测由毕氏酵母表达的恶性疟原虫融合蛋白(Plasmodium falciparum chimeric protein)PfCP-2.9的自由巯基。方法使用反向高压液相层析和Ellman氏反应进行检测。用反向高压液相,检测了3种样本,PfCP-2.9、PfCP-2.9经二硫苏糖醇还原、PfCP-2.9经吲哚乙酸烷基化。结果两种检测方法均表明PfCP-2.9不含任何自由流基。结论由毕氏酵母表达的PfCP-2.9中的半胱氨酸残基所含有的硫基均已氧化形成二硫键。

关键词：恶性疟原虫融合蛋白毕氏酵母 PfCP-2.9 自由巯基反向高压液相层析法 Ellman氏反应

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蚊媒感染疟原虫后应答性表达增高基因的富集和筛选

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 325-329页

作者：徐晓春瞿逢伊宋关鸿徐建农第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的　分离和识别蚊媒疟原虫感染相关基因并探讨其机制。方法　以斯氏按蚊约氏疟原虫为实验模型 ,分别将刺叮约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后 2 4h的饱血斯氏按蚊作为T组和D组 ,经抑制性差减杂交和选择性PCR扩增 ,建立一个T组表达特... 详细信息

目的　分离和识别蚊媒疟原虫感染相关基因并探讨其机制。方法　以斯氏按蚊约氏疟原虫为实验模型 ,分别将刺叮约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后 2 4h的饱血斯氏按蚊作为T组和D组 ,经抑制性差减杂交和选择性PCR扩增 ,建立一个T组表达特异增高基因的差减cDNA库。将此差减库分别与T组和D组的cDNAs混合探针作斑点杂交 ,筛选出差异表达基因 ,测定其序列并做基因库BLAST搜索。结果　T组相对于D组的差异表达基因得到有效富集 ,5 8个重组克隆中有 2 4个表达增高 ,阳性率为 4 1.4 %。所代表的 2 3个基因搜索结果显示 ,12个与功能已知的基因同源 ,4个与功能未知的基因同源 ,7个为新发现的基因 ;其中 9个与LPS诱导的冈比亚按蚊免疫反应性细胞系EST同源 ,占 39.1% (9/ 2 3)。结论　建立了蚊媒感染疟原虫早期 (2 4h)直接导致的全基因组应答性表达增高cDNA库 ,筛选结果显示蚊虫对疟原虫感染的反应涉及多种生化途径及机制。

关键词：斯氏按蚊约氏疟原虫差异表达基因疟疾

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我国嗜人按蚊订正为雷氏按蚊的学术探讨

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第3期26卷 234-235页

作者：瞿逢伊第二军医大学病原生物学教研室上海200433

本文对我国重要传疟媒介嗜人按蚊和雷氏按蚊的分类地位和学名使用作了历史性回顾和探讨。根据当前我国文献记载,已具有充足的形态学和分子生物学论据,表明嗜人按蚊为雷氏按蚊的同物异名,订正并恢复使用雷氏按蚊学名已刻不容缓。

关键词：嗜人按蚊雷氏按蚊订正

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乙型脑炎病毒prM蛋白单克隆抗体的制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第1期22卷 65-67页

作者：宁北芳朱淮民周晓俊曹毅周爱国第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的克隆日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）前膜蛋白（prM）编码基因，原核表达、纯化prM蛋白，以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体（mAb）；方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆人原核... 详细信息

目的克隆日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）前膜蛋白（prM）编码基因，原核表达、纯化prM蛋白，以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体（mAb）；方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆人原核表达载体pET32a，转化大肠埃希菌BL21（DE3）LysS后以IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA纯化后进行SDS-PAGE分析。用纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠，经细胞融合和亚克隆后筛选出能分泌识别prM蛋白的mAb的杂交瘤细胞株。用Western Blot和免疫组化方法检测单克隆抗体的特异性。结果从鼠脑中克隆出约500bp的JEV prM基因，将其克隆人原核表达载体中，在大肠埃希菌中获得了较好表达。纯化的prM蛋白免疫BALB／c小鼠，经传统细胞融合及筛选方法制备出单克隆抗体，抗体滴度为10^5。ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗具有较好的特异性。结论成功的表达和纯化了日本乙型脑炎病毒的prM蛋白，并完成了单克隆抗体的制备，为乙型脑炎病毒感染的早期诊断及预防的研究奠定了良好的基础。

关键词：脑炎病毒日本病毒包膜蛋白质类原核细胞表达的序列标记抗体单克隆

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树突状细胞与原虫感染

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 367-370页

作者：刘明媛徐盛明宋关鸿第二军医大学病原生物学教研室上海200433

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类专性抗原递呈细胞(antigen-presenting cell,APC),因其有膜样或树突状突起而得名.DC起源于体内的多能造血干细胞,经血流分布到全身各处.研究表明,DC有较强的递呈抗原和辅助混合淋巴细胞反应的能力,... 详细信息

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类专性抗原递呈细胞(antigen-presenting cell,APC),因其有膜样或树突状突起而得名.DC起源于体内的多能造血干细胞,经血流分布到全身各处.研究表明,DC有较强的递呈抗原和辅助混合淋巴细胞反应的能力,其在原虫感染发病机制中的重要作用越来越受到人们的重视.本文简要概述DC在杜氏利什曼原虫、枯氏锥虫和恶性疟原虫等原虫感染免疫中的功能.

关键词：树突状细胞杜氏利什曼原虫感染杜氏锥虫感染疟疾

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致病性自由生活阿米巴的培养

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第4期27卷 361-364页

作者：彭恒朱淮民第二军医大学病原生物学教研室上海200433

致病性自由生活阿米巴病原体的分离培养,对疾病诊断和病原体研究都具有重要意义。本文综述该病原体国内外报道的分离培养方法,主要包括样品处理、培养条件、虫株传代、虫株致病性检测和虫株保存方法。

关键词：致病性自由生活阿米巴耐格里属棘阿米巴属狒狒巴拉姆希阿米巴培养

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用四环素调控启动子调控表达恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1全合成基因

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2000年第4期18卷 193-196页

作者：钱锋潘卫庆第二军医大学病原生物学教研室上海200433

[目的 ]用含四环素调控启动子 (PLtetO 1 启动子 )的pZE11质粒表达恶性疟原虫MSP1全合成基因及其C末端 42kDa片段。 [方法 ]将MSP1全合成基因和MSP1C末端 42kDa片段基因分别克隆入受四环素诱导调控的质粒pZE11上 ,转化大肠杆菌DH5αZ1,... 详细信息

[目的 ]用含四环素调控启动子 (PLtetO 1 启动子 )的pZE11质粒表达恶性疟原虫MSP1全合成基因及其C末端 42kDa片段。 [方法 ]将MSP1全合成基因和MSP1C末端 42kDa片段基因分别克隆入受四环素诱导调控的质粒pZE11上 ,转化大肠杆菌DH5αZ1,质粒经酶切、SDS PAGE电泳和Westernblotting反应鉴定重组质粒的构建和重组质粒在DH5αZ1中的表达。 [结果 ]成功地构建了重组pZE11 MSP1质粒和pZE11 MSP1 42质粒 ,SDS PAGE电泳和免疫印迹 (Westernblotting)反应证明两个重组质粒在DH5αZ1中表达了 190和 42kDa蛋白。 [结论 ]含PLtetO 1 启动子的新型表达载体成功地表达了恶性疟原虫MSP1蛋白 ,降低表达产物对宿主细胞的毒性 ,并可为构建受四环素诱导的疟疾———伤寒口服疫苗株提供依据。

关键词：大肠杆菌恶性疟原虫裂殖子表现蛋白1 基因表达

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抗环子孢子蛋白保守II^+区单克隆抗体的制备及鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第2期22卷 83-85页

作者：张瑞娟朱淮民李翔宇第二军医大学病原生物学教研室上海200433

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II+ 区 (RegionII+ )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II+ 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II+ 区单克隆抗体的杂交瘤... 详细信息

目的　获得针对恶性疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)保守II+ 区 (RegionII+ )的单克隆抗体。　方法　采用恶性疟原虫保守II+ 区十二肽 (EWSPCSVTCGNG)免疫BALB/c小鼠 ,经融合 ,ELISA 3次筛选 ,获得 3株分泌针对保守II+ 区单克隆抗体的杂交瘤细胞株。　结果　ELISA检测结果显示单抗能与重组表达的恶性疟原虫CSP片段及天然CSP特异性反应。间接荧光抗体检测显示 ,单抗不仅能识别恶性疟原虫子孢子 ,也能识别约氏疟原虫子孢子。　结论　成功地获得了针对恶性疟原虫CSP保守II+

关键词：疟原虫属单克隆抗体环子孢子蛋白 ELISA 疟疾

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