检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王燕马媛媛蔡浩昱卢建第二军医大学基础医学部病理生理学教研室

目的:低氧导致的组织损伤与炎症反应密切相关。已证实机体对低氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的介导,调节基因表达,但是至今对... 详细信息

目的:低氧导致的组织损伤与炎症反应密切相关。已证实机体对低氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的介导,调节基因表达,但是至今对于参与了低氧适应的糖皮质激素/受体(GC/GR)的靶基因还知之不多。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(Glucocorticoid inducedleucine zipper,GILZ)是近年来发现的GC/GR靶蛋白,因其具有与GC类似的免疫抑制、抗炎、抑制细胞增殖等功能,被认为是GC作用的重要介导子,本研究的目的是观察低氧以及低氧联合糖皮质激素对GILZ表达的影响,进而探讨GILZ是否参与了GC对低氧的保护作用。方法:正常清洁级雄性SD大鼠,体重250～300g,随机分组,低氧组放入含有8%氧气的混合气的低氧舱中,出舱后即麻醉大鼠取材,小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7去激素低糖培养液处理后放入含1%氧气的混合气的低氧舱中处理不同的时间,实时定量PCR和Western Blot分别检测大鼠脾脏组织和RAW264.7细胞中GILZ mRNA和蛋白的表达。结果:1、大鼠低氧处理8h GILZ mRNA表达水平就明显增高,为对照大鼠的2.2倍(p<0.05),之后逐渐降低,但是24h组的表达水平仍高于对照,为对照的1.6倍(p<0.05)。用Western blot方法检测低氧处理不同时间组大鼠脾组织GILZ蛋白表达得到了相似的结果。2、单纯去腺组大鼠GILZ mRNA的水平降低至假手术组大鼠的44%(p<0.01),给去腺大鼠肌注Dex处理后,其脾脏GILZ的mRNA明显增高,约为去腺大鼠的13倍(p<0.01);去腺低氧组与单纯去腺组相比GILZ的mRNA变化不明显,但去腺后Dex联合低氧处理组大鼠脾组织中GILZ的mRNA表达显著高于去腺低氧组,约为去腺低氧组的10倍(p<0.01),也明显高于去腺Dex组,约为去腺Dex组的1.4倍(p<0.05)。蛋白水平的检测得到相似的结果。3、低氧能浓度依赖性的上调RAW264.7细胞中GILZ的表达,12h达高峰为对照的2.5倍,低氧和Dex联合能协同上调GILZ的表达,约5.8倍左右.结论:低氧能单独上调GILZ的表达,也能协同GC上调GILZ的表达,体内实验中,低氧上调GILZ的表达需要GC存在。可能的生物学意义在进一步探讨中。

关键词：低氧糖皮质激素 GILZ

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The essential role of Zinc finger protein Zbtb20 in the developing hippocampus.

The essential role of Zinc finger protein Zbtb20 in the deve...

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中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会

作者：章卫平第二军医大学病理生理学教研室

The mammalian hippocampus harbors the neural circuitry that is essential for cognitive functions,such as learning and *** development of hippocampal circuitry depends on the proper assembly of correctly specified and ... 详细信息

关键词： The essential role of Zinc finger protein Zbtb20 in the developing hippocampus

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瘦素调节下丘脑神经肽Agouti相关蛋白表达的研究进展

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第二军医大学学报 2009年第5期30卷 569-572页

作者：王斌章卫平第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433

下丘脑是机体能量代谢的调节中枢,其神经内分泌调节网络的中心环节是感受外周脂肪细胞分泌的瘦素所提供的能量贮存信号,调控下丘脑弓状核内Agouti相关蛋白(AgRP)和阿黑皮素原(POMC)的表达水平,从而调节能量的摄入和消耗,维持机体能量代... 详细信息

下丘脑是机体能量代谢的调节中枢,其神经内分泌调节网络的中心环节是感受外周脂肪细胞分泌的瘦素所提供的能量贮存信号,调控下丘脑弓状核内Agouti相关蛋白(AgRP)和阿黑皮素原(POMC)的表达水平,从而调节能量的摄入和消耗,维持机体能量代谢的稳态。转录因子叉头框蛋白1(FoxO1)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)是介导瘦素对AgRP转录调控作用的重要分子,直接参与了机体能量代谢的稳态调节。FoxO1可以增强AgRP的转录活性,而STAT3活化后则抑制AgRP的转录水平。瘦素可通过抑制FoxO1和激活STAT3实现对AgRP和能量代谢的调控。本文就瘦素对AgRP基因的转录调控机制的最新进展作一综述。

关键词：能量代谢 Agouti相关蛋白瘦素叉头框蛋白1 信号转导及转录激活因子3

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利用分叶顺次肝切除术建立小鼠肝脏大部切除后再生模型

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第二军医大学学报 2009年第5期30卷 524-526页

作者：汤朝晖周露婷谢志芳胡以平杨甲梅章卫平吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438 第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433

目的:利用肝部分切除术,建立可准确量化和易于操控的小鼠肝脏再生模型,为研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及其病理学意义提供技术平台。方法:正常成年C57BL/6小鼠经心脏灌注固定后,逐叶分离肝脏、称重,计算各肝叶所占肝重的百分比;... 详细信息

目的:利用肝部分切除术,建立可准确量化和易于操控的小鼠肝脏再生模型,为研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及其病理学意义提供技术平台。方法:正常成年C57BL/6小鼠经心脏灌注固定后,逐叶分离肝脏、称重,计算各肝叶所占肝重的百分比;麻醉状态下,分叶顺次无菌切除小鼠肝脏的左外叶、左中叶和右中叶,建立肝脏大部切除的再生模型;利用RT-PCR方法动态检测术后肝脏甲胎蛋白基因的激活表达特征。结果:肝左外叶、左中叶和右中叶合计约占小鼠肝脏总重量的68%,分叶顺次切除上述3个肝叶,术后动物恢复和存活状态良好,RT-PCR结果证实甲胎蛋白基因在小鼠肝脏再生中的激活表达。结论:利用分叶顺次肝切除术,成功建立了小鼠的肝大部切除后再生模型,该方法可准确量化肝脏切除的程度,具有可控性强、简便易行和成功率高等优点,为小鼠肝再生的研究奠定了基础。

关键词：肝解剖肝部分切除术肝再生

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雌激素受体α在乳腺癌细胞中对Gli1转录活性和表达的影响

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第二军医大学学报 2009年第11期30卷 1221-1224页

作者：赵洁莹陈欢王雁陈光椿卢建第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:在先前研究发现Hedgehog信号通路的下游转录因子Gli1能够抑制乳腺癌细胞中的雌激素信号通路活性的基础上,观察雌激素受体ERα在乳腺癌细胞MCF-7中对转录因子Gli1的转录活性和表达的影响,以探讨两条信号通路之间是否存在着交互作用... 详细信息

目的:在先前研究发现Hedgehog信号通路的下游转录因子Gli1能够抑制乳腺癌细胞中的雌激素信号通路活性的基础上,观察雌激素受体ERα在乳腺癌细胞MCF-7中对转录因子Gli1的转录活性和表达的影响,以探讨两条信号通路之间是否存在着交互作用。方法:应用荧光素酶报告基因转录活性分析的方法,将Gli1的表达质粒和Gli的报告基因质粒pGli-BS-luc以及ERα的表达质粒或者空载体共同瞬时转染到乳腺癌细胞MCF-7中,观察Gli1转录活性的变化。然后分别用实时定量PCR和蛋白质印迹的方法检测乳腺癌细胞中ERα的过表达对Gli1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:荧光素酶的活性随着ERα过表达剂量的增加而增加,ERα的质粒量在500 ng/孔时可将荧光素酶的活性升高到对照细胞的3.5倍(P<0.001)。雌激素处理后,荧光素酶的活性无显著变化。过表达ERα后可将Gli1 mRNA的表达水平提高为原来的2倍(P<0.01),也可明显增加Gli1蛋白的表达水平。结论:ERα在MCF-7细胞中的过表达能够明显增强Gli1的转录活性,增加Gli1的表达。这表明乳腺癌细胞中,转录因子ERα和Gli1之间存在着交互作用。

关键词： Gli1 乳腺肿瘤雌激素受体α Hedgehog

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融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第4期16卷 336-341页

作者：宗英王梁华孙铭娟董晓毅王燕陆国才焦炳华第二军医大学新药评价中心上海200433 第二军医大学生物化学和分子生物学教研室上海200433 第二军医大学病理生理学教研室上海200433

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。

关键词：高分子量激肽原肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体血管生成抑制因子胰腺肿瘤细胞

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HIV-1 HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2009年第11期22卷 1049-1053页

作者：廖文婷陈璐曹洁陈秋莉王锦红唐萍庞强黄德胜潘卫第二军医大学微生物教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

目的构建HIV-1HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒,表达并纯化Ta(tB41-101N)融合蛋白,为进一步研究其免疫原性奠定基础。方法在HIV-1HXB2株天然Tat蛋白N-端添加Tat41-101位氨基酸(aa),采用PCR法从HIV-1HXB2株tat基因中扩增分别编... 详细信息

目的构建HIV-1HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒,表达并纯化Ta(tB41-101N)融合蛋白,为进一步研究其免疫原性奠定基础。方法在HIV-1HXB2株天然Tat蛋白N-端添加Tat41-101位氨基酸(aa),采用PCR法从HIV-1HXB2株tat基因中扩增分别编码Tat41-101aa和Tat1-101aa的tat41-101和tat1-101两个基因片段,重叠延伸PCR法扩增其融合基因ta(tB41-101N),并构建其原核表达质粒pET32a-ta(tB41-101N),经双酶切及测序验证后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。融合蛋白经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Westernblot及ELISA鉴定。结果重叠延伸PCR扩增出约500bp的ta(tB41-101N)融合基因,酶切及测序结果表明重组表达质粒pET32a-ta(tB41-101N)构建正确。SDS-PAGE分析显示,表达的Ta(tB41-101N)融合蛋白相对分子质量约为36000,约占菌体总蛋白的7%,纯化后纯度约为60%;Westernblot和ELISA分析显示,Ta(tB41-101N)融合蛋白与小鼠抗Tat单抗及抗-HIV阳性血清(抗Tat抗体阳性)均呈特异性阳性反应。结论已成功构建了HIV-1HXB2株ta(tB41-101N)融合基因原核表达质粒,并表达了其融合蛋白,该蛋白较好地保留了天然Tat蛋白的免疫反应性,为Tat新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词： HIV-1 Tat蛋白融合蛋白原核表达重叠延伸PCR

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小鼠肝大部切除后肝再生组织中c-myc、ZHX2及AFP基因表达的变化

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实用医学杂志 2009年第11期25卷 1733-1735页

作者：汤朝晖周露婷谢志芳杨甲梅胡以平章卫平吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海市200433 第二军医大学病理生理学教研室上海市200433 第二军医大学细胞生物学教研室上海市200433

目的:利用小鼠肝大部切除后肝再生动物模型,测定c-myc、ZHX2、AFP基因在肝再生过程不同阶段的表达,研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及病理学意义。方法:利用分叶顺次肝大部切除技术,建立小鼠肝再生动物模型,在不同的时间节点,运用... 详细信息

目的:利用小鼠肝大部切除后肝再生动物模型,测定c-myc、ZHX2、AFP基因在肝再生过程不同阶段的表达,研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及病理学意义。方法:利用分叶顺次肝大部切除技术,建立小鼠肝再生动物模型,在不同的时间节点,运用荧光定量PCR手段,检测再生肝脏组织中c-myc、ZHX2、AFP激活后的表达特征。结果:在肝再生的启动阶段,c-myc表达上调。在随后的肝脏再生的持续增殖阶段,ZHX2的表达首先下调,然后再恢复到正常水平。AFP的表达为持续上调。结论:c-myc、ZHX2、AFP基因在肝脏再生不同阶段的依次激活、不同表达趋势的内在联系,初步揭示了彼此之间协同作用的可能及潜在的信号转导途径。

关键词：肝切除术肝再生 c—myc ZHX2 AFP

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人类免疫缺陷病毒1型HXB2株Tat突变体的构建、原核表达及免疫原性分析

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中华传染病杂志 2009年第9期27卷 517-521页

作者：李存枚邓松华曹洁王锦红陈璐黄德圣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室

目的构建HIV一1HXB2株Tat基因半胱氨酸富集区3’末端移位突变体，经原核表达和纯化，分析该突变体蛋白（Tat—cct）的免疫原性。方法用PCR方法将HIV一1HXB2株Tat基因的半胱氨酸富集区（64～111位核苷酸）移位至Tat基因的3’末端，获得... 详细信息

目的构建HIV一1HXB2株Tat基因半胱氨酸富集区3’末端移位突变体，经原核表达和纯化，分析该突变体蛋白（Tat—cct）的免疫原性。方法用PCR方法将HIV一1HXB2株Tat基因的半胱氨酸富集区（64～111位核苷酸）移位至Tat基因的3’末端，获得其突变体DNA序列，并构建其原核表达质粒pET32a—Tat—oct，转人大肠埃希菌***21（DE3）中进行诱导表达及纯化。以Tat—cct融合表达蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA方法对该抗血清进行免疫原性检测分析。结果pET32aTat—cct重组质粒可在***。21（DE3）中诱导表达，纯化后其融合蛋白相对分子质量约为31000。Tat—cct重组蛋白免疫小鼠诱导产生的抗体滴度为1：1600，该抗体与Tat—cot蛋白和Tat蛋白（1～101位氨基酸）均呈特异性结合反应。结论Tat突变体重组蛋白Tat—cct能在大肠埃希菌中有效表达，并较好保留其免疫原性，为HIV一1Tat疫苗的基础研究提供了有价值的实验结论。

关键词： HIV-1 基因产物 tat 重组蛋白质类半胱氨酸基因表达免疫大肠埃希菌

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HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

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安徽医科大学学报 2009年第1期44卷 5-9页

作者：李存枚潘卫曹洁王锦红黄德圣庞强廖文婷邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的构建HIV-1HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌***21(DE3)中进行高效表达和纯化。方法应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(△C)的... 详细信息

目的构建HIV-1HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌***21(DE3)中进行高效表达和纯化。方法应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(△C)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌*** BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定。结果构建了pET32a-Tat(CN)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17mg/ml,相对分子质量为31ku。间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应。结论成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论。

关键词： HIV-1/遗传学大肠杆菌/遗传学基因产物 tat 基因表达

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