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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：曹冬梅麻献华蔡娇章卫平第二军医大学病理生理学教研室上海200433

目的:探讨转录因子ZBTB20 在小鼠腺垂体发育中的作用.方法:利用Zbtb20 基因全身敲除(Zbtb20-/-)小鼠模型,观察腺垂体及其靶腺发育;应用RT-PCR、Western blot 和ELISA 方法分析腺垂体组织中6 种促激素的表达分泌;应用免疫组化方法检测腺...

目的:探讨转录因子ZBTB20 在小鼠腺垂体发育中的作用.方法:利用Zbtb20 基因全身敲除(Zbtb20-/-)小鼠模型,观察腺垂体及其靶腺发育;应用RT-PCR、Western blot 和ELISA 方法分析腺垂体组织中6 种促激素的表达分泌;应用免疫组化方法检测腺垂体5 种内分泌细胞的数量和分布,并进一步通过多重免疫组化标记方法分析ZBTB20 在催乳素细胞群分化发育中的作用.结果:(1)Zbtb20-/-小鼠腺垂体体积明显小于正常对照,同时肝脏及血清IGF-1 水平下降,乳腺和性腺发育障碍.(2)Zbtb20-/-小鼠腺垂体催乳素细胞群出生后缺失,生长激素细胞群增殖减少,催乳素(PRL)和生长激素(GH)的mRNA 和蛋白水平不同程度减少.(3)Zbtb20-/-小鼠胚胎期垂体中存在PRL/GH 双阳性前体细胞,而出生4 d 后PRL 阳性细胞完全缺失.结论:(1)Zbtb20 基因敲除可导致严重的小鼠垂体发育不全.(2)ZBTB20 参与小鼠腺垂体催乳素细胞的终末分化过程.(3)Zbtb20 基因敲除可使腺垂体生长激素细胞增殖障碍,从而减少GH 的表达分泌.

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SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选

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安徽医科大学学报 2015年第9期50卷 1262-1267页

作者：林子玉丁莹莹周鹏高彩霞冯娇娇王锦红潘卫邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学病原生物学教研室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组... 详细信息

目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子。结果成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库(A1)、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库(C1)和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽(AI37)、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽(CI20),将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37CI20。两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全。Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30)A(I29I30)和AI-TQSA。结论通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30)A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQSA,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础。

关键词： AC突变体噬菌体展示文库筛选人免疫球蛋白G

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褪黑素通过下调ERK和AKT活化来抑制Toll样受体9触发的巨噬细胞促炎症因子产生

褪黑素通过下调ERK和AKT活化来抑制Toll样受体9触发的巨噬细胞促...

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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：王国权刘凯王寿棋许熊飞第二军医大学病理生理学教研室上海200433

目的:研究褪黑素(melatonin,MT)对Toll 样受体9(TLR9)配体CpG 诱导巨噬细胞产生促炎症因子的影响及其机制.方法:先采用不同浓度MT 处理小鼠腹腔巨噬细胞或小鼠巨噬细胞系Raw264.7,然后采用CpG 刺激细胞;通过定量PCR 检测MT 受体MT1 和M...

目的:研究褪黑素(melatonin,MT)对Toll 样受体9(TLR9)配体CpG 诱导巨噬细胞产生促炎症因子的影响及其机制.方法:先采用不同浓度MT 处理小鼠腹腔巨噬细胞或小鼠巨噬细胞系Raw264.7,然后采用CpG 刺激细胞;通过定量PCR 检测MT 受体MT1 和MT2 表达,通过ELISA 和定量PCR 检测细胞因子表达,通过Western blot 检测信号转导蛋白的活化.结果:MT 可上调巨噬细胞MT1 和MT2 的表达,MT 可呈剂量依赖性抑制CpG 刺激的巨噬细胞TNF-α、IL-6 和IL-12 的蛋白质和mRNA的表达,采用MT1/2 受体抑制剂Luzindole 研究发现MT 的抑制作用不依赖于MT1/2 受体,检测信号转导蛋白发现MT 可显著抑制CpG 刺激的巨噬细胞ERK 和AKT 磷酸化,提示MT 通过下调巨噬细胞ERK 和AKT 活化从而抑制CpG 诱导的促炎症因子的分泌.结论:MT 能抑制TLR9 触发的巨噬细胞促炎症因子的分泌,其机制主要通过下调ERK 和AKT 活化,本研究进一步阐明MT 调控固有免疫反应的作用与机制.

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结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值

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安徽医科大学学报 2015年第10期50卷 1404-1409页

作者：周鹏丁莹莹林子玉冯娇娇高彩霞王锦红杨华温宗梅潘卫邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学病原生物学教研室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病... 详细信息

目的对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637-731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测.

关键词：结核分枝杆菌 Rv3388 特异性敏感性

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ZBTB20是甲胎蛋白基因的一个序列特异性转录阻遏子

ZBTB20是甲胎蛋白基因的一个序列特异性转录阻遏子

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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：张海曹冬梅周露婷张晔谢志芳章卫平第二军医大学病理生理学教研室上海200433

目的:探究ZBTB20 结合甲胎蛋白(AFP)基因启动子发挥转录抑制作用的关键序列.方法:依赖ELISA 的DNA-蛋白实验、传统的凝胶阻滞实验(EMSA)、双萤光素酶报告基因检测和定量PCR 技术.结果:AFP 基因启动子-104/-86 区域是ZBTB20 可以结合的...

目的:探究ZBTB20 结合甲胎蛋白(AFP)基因启动子发挥转录抑制作用的关键序列.方法:依赖ELISA 的DNA-蛋白实验、传统的凝胶阻滞实验(EMSA)、双萤光素酶报告基因检测和定量PCR 技术.结果:AFP 基因启动子-104/-86 区域是ZBTB20 可以结合的最小有效关键序列.

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氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响

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大连医科大学学报 2015年第5期37卷 442-446页

作者：杜莉莉吕润潇杨晓漪辛娜马廷贤中国医科大学基础医学院病理生理学教研室辽宁沈阳110013 第二军医大学附属长海医院研究生队上海200433 第二军医大学研究生队上海200433 中国医科大学

目的：比较不同氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响。方法组织块培养法分离人胎盘间充质干细胞pMSCs，并利用流式细胞技术进行表面标志鉴定。将第3代pMSCs分别培养于常氧（21％O2）及不同浓度的低氧（5％O2、3％O2、1％O2、0．... 详细信息

目的：比较不同氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响。方法组织块培养法分离人胎盘间充质干细胞pMSCs，并利用流式细胞技术进行表面标志鉴定。将第3代pMSCs分别培养于常氧（21％O2）及不同浓度的低氧（5％O2、3％O2、1％O2、0．5％O2）环境中，观察各组细胞形态，MTT检测细胞增殖情况，划痕实验检测细胞迁移能力，ELISA检测细胞VEGF分泌表达量情况。结果成功从人胎盘组织分离出间充质干细胞pMSCs，阳性表达CD29、CD44，阴性表达CD31、CD34、CD45、HLA－DR。低氧培养的pMSCs形态均一，细胞伸展为长梭形，漩涡状排列明显。与常氧组相比，一定范围内低氧（5％O2～1％O2）培养的pMSCs增殖、迁移增快，分泌VEGF增多，氧浓度越低，变化越明显。过低氧浓度（0．5％O2）培养的pMSCs增殖减慢，分泌VEGF减少。结论一定范围内的低氧可促进pMSCs增殖、迁移及分泌VEGF，氧浓度越低，促进作用越明显。而过低氧浓度则产生抑制作用。

关键词：胎盘间充质干细胞低氧生物学特性

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ZBTB20参与腺垂体发育和催乳素细胞终末分化

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1870-1870页

作者：曹冬梅麻献华蔡娇章卫平第二军医大学病理生理学教研室

目的:探讨转录因子ZBTB20在小鼠腺垂体发育中的作用。方法:利用Zbtb20基因全身敲除(Zbtb20-/-)小鼠模型,观察腺垂体及其靶腺发育;应用RT-PCR、Western blot和ELISA方法分析腺垂体组织中6种促激素的表达分泌;应用免疫组化方法检测腺垂体... 详细信息

目的:探讨转录因子ZBTB20在小鼠腺垂体发育中的作用。方法:利用Zbtb20基因全身敲除(Zbtb20-/-)小鼠模型,观察腺垂体及其靶腺发育;应用RT-PCR、Western blot和ELISA方法分析腺垂体组织中6种促激素的表达分泌;应用免疫组化方法检测腺垂体5种内分泌细胞的数量和分布,并进一步通过多重免疫组化标记方法分析ZBTB20在催乳素细胞群分化发育中的

关键词：腺垂体垂体前叶催乳素促乳素 ZBTB20

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锌指蛋白ZBTB20对消化道功能和代谢的调节作用

锌指蛋白ZBTB20对消化道功能和代谢的调节作用

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2015消化与代谢病理生理研讨会

作者：章卫平第二军医大学基础部病理生理学教研室

ZBTB20 是含有BTB 结构域的C2H2 锌指蛋白亚家族的新成员.我们的基因打靶研究显示,ZBTB20 全身性基因敲除小鼠表现为严重的低血糖和生长发育障碍,幼鼠表现为明显的胃肠道消化吸收异常.

关键词：

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H1受体拮抗剂异丙嗪降低紫杉醇对卵巢癌的化疗作用

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1839-1839页

作者：李于鑫杜安通范梦迪朱晓彤陈玉霞第二军医大学病理生理学教研室

目的:观察紫杉醇化疗时为缓解过敏反应而常规联用的组胺H1受体拮抗剂是否影响其疗效。方法:构建荷人卵巢癌裸鼠模型,随机分为对照、单用紫杉醇、单用异丙嗪、异丙嗪+紫杉醇4组,6.5 mg/kg异丙嗪或生理盐水腹腔注射给药0.5 h后,再予腹腔注... 详细信息

目的:观察紫杉醇化疗时为缓解过敏反应而常规联用的组胺H1受体拮抗剂是否影响其疗效。方法:构建荷人卵巢癌裸鼠模型,随机分为对照、单用紫杉醇、单用异丙嗪、异丙嗪+紫杉醇4组,6.5 mg/kg异丙嗪或生理盐水腹腔注射给药0.5 h后,再予腹腔注射10 mg/kg紫杉醇或生理盐水(每3 d 1次,共4次),测量肿瘤体积和瘤重。免疫组化检测肿瘤血管标志物CD31

关键词：异丙嗪 H1 非那根组织胺H1受体阻断药卵巢癌卵巢恶性肿瘤卵巢肿瘤紫杉醇受体拮抗剂

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ZBTB20是甲胎蛋白基因的一个序列特异性转录阻遏子

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1887-1887页

作者：张海曹冬梅周露婷张晔谢志芳章卫平第二军医大学病理生理学教研室

目的:探究ZBTB20结合甲胎蛋白(AFP)基因启动子发挥转录抑制作用的关键序列。方法:依赖ELISA的DNA-蛋白实验、传统的凝胶阻滞实验(EMSA)、双萤光素酶报告基因检测和定量PCR技术。结果:AFP基因启动子-104/-86区域是ZBTB20可以结合的最小... 详细信息

目的:探究ZBTB20结合甲胎蛋白(AFP)基因启动子发挥转录抑制作用的关键序列。方法:依赖ELISA的DNA-蛋白实验、传统的凝胶阻滞实验(EMSA)、双萤光素酶报告基因检测和定量PCR技术。结果:AFP基因启动子-104/-86区域是ZBTB20可以结合的最小有效关键序列。我们利用定量PCR检测了ZBTB20肝脏特异性敲除小鼠和对照小鼠肝脏中HNF1α、

关键词：甲胎蛋白球蛋白 ZBTB20 特异性序列基因

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