检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2012年第6期47卷 617-622页

作者：章萍萍潘卫曹洁陈秋莉王锦红张华群葛宜兵祁培培刘超邓松华安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安庆医药高等专科学校安庆246052

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析... 详细信息

目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。

关键词： CHIKV-E2 跨膜疏水性蛋白全基因合成缺失突变体原核表达

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microRNA定向诱导iPS细胞向心肌细胞分化的初步研究

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宁夏医科大学学报 2012年第8期34卷 760-763页

作者：吴仪陈虎艳李宁宋晓伟陈思锋袁文俊宁夏医科大学基础医学院生理学系银川750004 复旦大学上海医学院生理与病理生理学系上海200032 第二军医大学生理学教研室上海200433

目的研究miRNAs诱导iPS细胞向心肌细胞的定向分化。方法将心肌细胞特异性miRNA-1、miR-NA-133a和miRNA-208排列组合后分别转染iPS细胞,悬浮培养3d后提取RNA和蛋白,应用Real-timePCR和Western blot的方法检测心肌细胞标志分子α-肌球蛋... 详细信息

目的研究miRNAs诱导iPS细胞向心肌细胞的定向分化。方法将心肌细胞特异性miRNA-1、miR-NA-133a和miRNA-208排列组合后分别转染iPS细胞,悬浮培养3d后提取RNA和蛋白,应用Real-timePCR和Western blot的方法检测心肌细胞标志分子α-肌球蛋白重链(α-MHC)和肌钙蛋白T(Troponin-t)的表达。结果转染了miRNA-133a和miRNA-208+miRNA-133a组合的两个实验组中,α-MHC的mRNA表达量显著升高;同时转染了miRNA-208+miRNA-133a两个miRNA的实验组中,Troponin-t的mRNA和蛋白表达量显著上调。结论 miRNA-208和miRNA-133a共同作用,有利于诱导iPS细胞向心肌细胞的定向分化。

关键词： iPS细胞心肌细胞 miRNA

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单只小鼠来源的大脑皮层星形胶质细胞的体外原代培养

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解剖学杂志 2011年第2期34卷 236-238页

作者：姬文力任安经谢志芳章卫平第二军医大学病理生理学教研室上海200433

目的：建立单只小鼠来源的星形胶质细胞体外原代培养体系.方法：取单只新生小鼠,无菌操作下取双侧大脑皮质,彻底剥除脑膜,制备细胞悬液,差速贴壁法去除成纤维细胞,悬液原代培养9d左右,待细胞融合成单层并铺满瓶底后,消化传代,胶质纤维... 详细信息

目的：建立单只小鼠来源的星形胶质细胞体外原代培养体系.方法：取单只新生小鼠,无菌操作下取双侧大脑皮质,彻底剥除脑膜,制备细胞悬液,差速贴壁法去除成纤维细胞,悬液原代培养9d左右,待细胞融合成单层并铺满瓶底后,消化传代,胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学显色鉴定星形胶质细胞.结果：分离培养出的星形胶质细胞生长良好,纯化率达95%以上,细胞数目能达到106以上.结论：采用该改进的方法能简捷地用单只小鼠大脑皮层建立星形胶质细胞的体外培养及研究体系.

关键词：大脑皮质星形胶质细胞细胞培养小鼠

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雾化吸入肺表面活性物质对急性肺损伤大鼠血液氧合水平的影响

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第二军医大学学报 2011年第1期32卷 1-4页

作者：闫亚敏李忆东宋兴磊王燕卢建王志红第二军医大学护理系临床护理教研室上海200433 第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433

目的探讨雾化吸入肺表面活性物质(PS)对油酸型急性肺损伤(ALI)大鼠血液氧合水平的影响。方法 43只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雾化生理盐水组和雾化PS组。颈外静脉注入油酸(0.2 ml/kg)复制ALI模型,约1 h后雾化生理盐水组和雾化PS... 详细信息

目的探讨雾化吸入肺表面活性物质(PS)对油酸型急性肺损伤(ALI)大鼠血液氧合水平的影响。方法 43只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雾化生理盐水组和雾化PS组。颈外静脉注入油酸(0.2 ml/kg)复制ALI模型,约1 h后雾化生理盐水组和雾化PS组分别雾化吸入生理盐水和160 mg PS。实验过程中测定大鼠血气分析指标和呼吸频率(BR)。计算大鼠存活率。结果雾化吸入PS后,大鼠动脉血氧分压(PaO2)及动脉血氧饱和度(SaO2)均逐渐增加,至雾化吸入4 h后,PaO2及SaO2分别增加至99.4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)及98.2%,与雾化生理盐水组相比,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠BR自雾化吸入PS 0.5 h后即开始下降,雾化吸入PS 4 h后,BR降至100次/min,低于同时间点的雾化生理盐水组(P<0.05)。雾化PS组大鼠的存活率为100%,与雾化生理盐水组(60%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论雾化吸入PS能明显提高ALI大鼠血液的氧合状况,改善大鼠的肺功能及提高其存活率。

关键词：气雾剂肺表面活性物质急性肺损伤血气分析

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转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白对肝脏糖脂代谢的调节作用

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第二军医大学学报 2011年第3期32卷 318-322页

作者：周露婷章卫平第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433

肝脏是体内糖脂代谢的重要器官,转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)是调节肝脏糖酵解及脂肪合成的重要转录因子。ChREBP与Max样蛋白X以异二聚体的形式调控葡萄糖利用及转化为脂肪过程中大量基因的表达。在ob/ob小鼠肝细胞特异... 详细信息

肝脏是体内糖脂代谢的重要器官,转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)是调节肝脏糖酵解及脂肪合成的重要转录因子。ChREBP与Max样蛋白X以异二聚体的形式调控葡萄糖利用及转化为脂肪过程中大量基因的表达。在ob/ob小鼠肝细胞特异性敲除ChREBP基因后能明显改善其脂肪肝及胰岛素抵抗。阐明ChREBP对糖脂代谢的调控机制及其生物学功能,可进一步解释葡萄糖诱导脂肪形成的过程,并有望为脂肪肝等代谢性疾病的干预治疗提供新的思路。本文对ChREBP的结构特征、调控机制、生物学功能及其与疾病的关系等最新进展进行综述。

关键词：碳水化合物反应元件结合蛋白糖酵解脂肪生成脂肪肝

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抗新型锌指蛋白ZBTB45单克隆抗体的制备与应用

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第二军医大学学报 2011年第12期32卷 1277-1281页

作者：王燕王科嘉李玲陈榕麻献华郭小芹张晔邹大进谢志芳章卫平第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 第二军医大学长海医院内分泌科上海200433 第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433

目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分... 详细信息

目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分泌ZBTB45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,从荷瘤小鼠的腹水中通过蛋白A柱纯化单克隆抗体,鉴定分析所制备抗体在免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学中的应用效果。结果成功制备了6株抗ZBTB45的特异性单克隆抗体,其中3E5、2G4、4D2和1D4可成功用于免疫印迹和免疫沉淀分析,3E5、6D8和8E3可用于免疫组织化学检测内源性ZBTB45,具有较好的敏感性、特异性。结论首次成功制备了抗ZBTB45单克隆抗体,可应用于体外和体内的免疫学检测,为深入研究ZBTB45的生物学功能提供了技术支持。

关键词：锌指蛋白转录因子 ZBTB45 单克隆抗体

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HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat_(38-61)的原核表达及其免疫反应性

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中国生物制品学杂志 2011年第1期24卷 10-13,24页

作者：庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群黄德胜葛宜兵潘卫第二军医大学微生物教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

目的构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组... 详细信息

目的构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性。结果重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应。结论已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PET32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础。

关键词： tat基因产物,人免疫缺陷病毒核心碱性区重组融合蛋白质类原核细胞基因表达免疫反应性

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人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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病毒学报 2011年第6期27卷 580-586页

作者：张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大... 详细信息

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 Tat蛋白缺失突变原核表达免疫原性

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“以学生为中心”的教学理念在长学制医学生病理生理学教学中的实践与体会

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医学研究杂志 2011年第12期40卷 153-155页

作者：王燕李忆东刁飞张晔章卫平第二军医大学病理生理学教研室上海200433

长学制医学教育要达到的目标是培养学生成为＂有高尚的思想道德和良好的职业素质,富有人文精神和创新意识,实践能力强,发展潜力大,能参与国际医学科学竞争的高级临床医学专门人才＂。病理生理学是一门研究疾病发生、发展、转归的规律和... 详细信息

长学制医学教育要达到的目标是培养学生成为＂有高尚的思想道德和良好的职业素质,富有人文精神和创新意识,实践能力强,发展潜力大,能参与国际医学科学竞争的高级临床医学专门人才＂。病理生理学是一门研究疾病发生、发展、转归的规律和机制的学科,是临床医学与基础医学之间的＂桥梁＂。

关键词：病理生理学教学长学制医学教育以学生为中心医学生教学理念医学专门人才临床医学职业素质

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TGF-β诱导上皮间充质转化的信号通路研究

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国际病理科学与临床杂志 2011年第1期31卷 81-86页

作者：吴腾云张威曹冬梅第二军医大学基础医学部病理生理学教研室上海200433

上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞脱黏附而转变成具有迁移能力的间质细胞的现象,它在胚胎发育、肿瘤转移及组织纤维化过程中都发挥重要的生理和病理作用。转化生长因子β(transforming growth factor... 详细信息

上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞脱黏附而转变成具有迁移能力的间质细胞的现象,它在胚胎发育、肿瘤转移及组织纤维化过程中都发挥重要的生理和病理作用。转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)作为EMT发生过程中必不可少的诱导因子,经由Smad通路及Erk,PI3K/Akt,JNK/p38,WNT/GSK3/β-catenin等非Smad通路调节EMT的发生、发展。本文就TGF-β信号通路参与EMT过程的分子机制作一综述。

关键词：转化生长因子β 上皮间充质转化信号转导

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